INFORME N°05-

EXTRACCIÓN DE PROTEÍNAS
DE CÉLULAS HUMANAS

INTRODUCCIÓN

¿Que son las proteínas?

Biomoleculas formadas por aminoácidos y que son esenciales para la vida porque llevan a cabo
la mayoría de las funciones de nuestro organismo Y Se fabrican en nuestras células.

Las proteínas son las moléculas orgánicas más abundantes en la célula, ellas constituyen más
del 50% del peso seco de la célula. Cada tipo celular, tiene un rol específico determinado por
su composición proteica.

La extracción de proteínas es un paso de preparación de muestras esencial en la proteómica.

Las proteínas pueden ser extraídas de plantas y animales de tejido, levaduras y
microorganismos.
 PROTOCOLO

 Lo primero que haremos es aislar una de las diferentes tipos de células que se
encuentran en nuestra sangre los neutrófilos; Para ello usamos un imán; Marcaremos
el resto de células con bolitas magnéticas para que se queden pegadas a las paredes
del tubo y así nos quedaremos solo con los neutrófilos

 A continuación centrifugamos a 2500 revoluciones por minuto durante 10 minutos

gracias a esto conseguiremos separar la fase liquida (el sobrenadante de los
neutrófilos) los que forman un agregado en el fondo del tubo a este agregado le
llamamos pellet que es lo que vamos a utilizar en resto del ensayo.

 En estos momentos tenemos las proteínas al interior de las células así que para
liberarlas vamos a romper todas las membranas celulares con un baser de lisis y lo
dejaremos actuar durante 30 minutos.

 Ahora ya tenemos una solución con nuestras proteínas pero no sabemos que cantidad
tenemos para conocerlo vamos a cuantificarlas utilizando el método Bradford
comenzamos realizando una curva estándar esto es una serie de diluciones que
contiene concentraciones decrecientes de proteínas que conocemos y que nos servirá
para comparar con nuestras muestras.

 En una placa añadimos 5 micro litros de cada punto de la curva estándar y de cada
muestra por duplicado es decir pondremos lo mismo en dos pocillos diferentes.

 Ahora añadimos el reactivo Bradford, este reactivo se une a las proteínas y cuando lo
hace cambia de color marrón a color azul por tanto los pocillos mas azules son los que
tienen más proteínas y los marrones menos proteínas

 Observad como en la curva estándar se observa una degradación desde más azul a
más concentrado a mas marrón menos concentrado
 Incubamos durante 5 minutos el cambio de color lo vamos a medir con un
espectrofotómetro este aparato hace pasar un haz de luz a través de cada pocillo de la
placa y mide la luz que ha sido absorbida por la muestra dándonos una medida
denominada absorbancia con las absorbancias obtenidas relacionaremos la
concentración de los tubos de la curva estándar que conocemos con sus valores de
absorbancia esto nos permite dibujar una gráfica con una recta y utilizando la
ecuación que define esta recta podremos extrapolar la concentración de nuestras
muestras a partir de los valores de absorbancia obtenidos en el espectrofotómetro