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FACULTAD DE CIENCIAS

DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE BIOLOGÍA

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

INFORME N° 5:

“IDENTIFICACIÓN DE HONGOS
MEDIOAMBIENTALES Y CULTIVO EN CÁMARA
HÚMEDA”

Integrantes:

- 20160091…………….Alcalá Bacigalupo, Silvana


- 20160107…………….Mallqui Argüelles, Nathalie
- 20160060…………….Pastor Arbulú, Paulo
- 20151081…………….Tineo Balcázar, Gabriela

MESA N° 4

GRUPO F: ​Miércoles 3-5 p.m.

2018-II
I. INTRODUCCIÓN

Se sabe que los hongos son organismos que prosperan en diversos ambientes, incluyendo el
aire e interiores. Además, se desarrolla mejor en condiciones cálidas o húmedas de acuerdo a
sus requerimientos, también se propaga y reproduce por esporas, las cuales sobreviven en
condiciones ambientales que desfavorecen el crecimiento normal del hongo, permaneciendo
latentes hasta que las condiciones ambientales se vuelvan favorables
.
El crecimiento de hongos puede ser en espacios interiores, manteniendo niveles de humedad
por debajo del 50% y ventilando las áreas por donde se circula. Esto es debido a que el aire es
el medio de diseminación tanto de hongos como otras sustancias que, a la vez, pueden estar
cargadas de diversos grupos de microorganismos.
Muchas de estas especies de hongos se pueden diferenciar, identificar y clasificar según su
morfología, estructura, mecanismo de formación y elementos formadores de las esporas. El
conocimiento de estas características puede ser suficiente para identificar especies que
pertenecen al grupo de los hongos filamentosos.

La mayoría de los hongos son nutricionalmente poco exigentes y desarrollan en medios


sencillos que contengan carbohidratos como fuente de carbono (glucosa, maltosa, sacarosa,
almidón, celulosa), sales de nitrógeno inorgánico o peptonas, como fuente de nitrógeno y
pequeñas cantidades de oligoelementos (Fe, Mg, P, K Zn,Cu, Mn y Mo). Existen diferentes
tipos generales de medios de cultivo para hongos, de los cuales, los medios sintéticos se
caracterizan por tener una composición química definida. Uno de los más conocidos y
utilizados entre estos medios es el Agar Sabouraud, que puede ser utilizado para el
aislamiento, identificación y conservación de hongos saprófitos y patógenos. Es un medio
nutritivo cuya alta concentración de glucosa y el pH ácido actúan inhibiendo el desarrollo
bacteriano. El agregado de antibióticos aumenta la selectividad del medio y permite eliminar
bacterias y hongos saprófitos indeseables a partir de muestras contaminadas.

Durante la práctica se realizó un cultivo en agar expuesta a condiciones medioambientales,


para luego de unos días de incubación, realizar la observación tanto macroscópica como
microscópica. En ambas se registraron características generales que fueron utilizadas para la
identificación de las diferentes colonias.

II. OBJETIVOS

➢ Determinar los géneros de hongos más frecuentes presentes en el medio ambiente.


➢ Mediante la observación macroscópica, establecer características típicas para el
reconocimiento.
➢ Determinar las características del desarrollo vegetativo de los hongos a través de un
cultivo en cámara húmeda y mediante observaciones periódicas al microscopio.

III. MARCO TEÓRICO


Los hongos son organismos heterótrofos que absorben el alimento después de descomponerlo en
pequeñas moléculas. La mayoría de los hongos son pluricelulares y se componen de filamentos de
células, las hifas, entretejidas en micelios. Los hongos que se reproducen sexualmente suelen formar
micelios dicarióticos, durante el periodo entre la fusión nuclear (cariogamia) y la fusión
citoplasmática (plasmogamia). Las paredes celulares de los hongos contienen quitina.
Los análisis moleculares sugieren que los hongos evolucionaron hace unos 1.500 millones de años,
probablemente a partir de un protista flagelado que también es ancestro de los animales. Las
asociaciones muy tempranas de los hongos con otros organismos en micorrizas y líquenes pueden
haber sido importantes en el establecimiento de la vida eucariótica en la tierra firme
Los científicos han descrito más de 100.000 especies de hongos, y que dan muchas más por descubrir.
Algunos micólogos calculan que podrían existir más de un millón de especies de hongos. Los hongos
se clasifican principalmente atendiendo a los detalles de su ciclo vital y su morfología. Las especies
que poseen ciclos vitales muy definidos se ubican en uno de estos cuatro filos: Chytridiomycota,
Zygomycota, Ascomycota y Basidiomycota.
Antes de la aparición de la secuenciación del ADN, era difícil, sino imposible, clasificar a los hongos
que carecen de una fase sexual conocida en su ciclo vital. Dichos hongos fueron englobados
colectivamente como deuteromycetes u hongos imperfectos (debido a su carencia generalizada de una
fase sexual). En un momenta determinado, se incluyeron más de 15.000 especies de hongos en esta
categoría de acogida temporal. Recientemente, los análisis de ADN han acelerado el ritmo de
reclasificaci6n de los deuteromicetos. La mayoría de estos deuteromicetos han sido ubicados en el filo
Ascomycota

Loshongos filamentosos que se encuentran en aire libre como en interiores, existe desde hace miles de
años. El moho crece mejor en condiciones cálidas, mojadas y húmedas, se propaga y reproduce
mediante esporas. Estas pueden sobrevivir en condiciones ambientales desfavorables como la
resequedad, que no beneficien el crecimiento normal del moho.
Algunas personas son sensibles a los mohos. La exposición a los mohos puede causar síntomas como
congestión nasal, irritación de los ojos o resuello. Las reacciones severas pueden ocurrir entre
trabajadores expuestos a grandes cantidades de mohos en los lugares de trabajo, como en el caso de
los granjeros que trabajan todo el día alrededor del heno mohoso. Algunas reacciones severas pueden
incluir fiebre y dificultad para respirar. Las personas con enfermedades crónicas, como enfermedad
obstructiva de los pulmones, pueden presentar infecciones de moho en los pulmones.
Los mohos se encuentran en diversos ambientes y pueden ser detectados, tanto en interiores como al
aire libre, durante todo el año. Las condiciones húmedas y cálidas favorecen el crecimiento del moho.
Al aire libre pueden encontrarse en áreas o lugares húmedos sombreados donde hay descomposición
de hojas o de otro tipo de vegetación. En los interiores pueden encontrarse en lugares donde los
niveles de humedad son altos como los sótanos o las duchas. Los tipos más comunes de mohos son
Cladosporium sp, Penicillium sp, Aspergillus sp, Mucor sp y Alternaria sp​.

● Cladosporium sp:​ Cladosporium es un hongo filamentoso, perteneciente al filo Ascomycota y


al grupo de los dematiáceos, caracterizados por presentar una coloración oscura.
Microscópicamente presenta hifas finas, septadas, ramificadas de color hialino a marrón. Las
hifas sostienen cadenas ramificadas de conidios unicelulares, elipsoides o cilíndricos, algunos
con forma de escudo debido a las cicatrices de unión entre ellos. Macroscópicamente forma
colonias aterciopeladas, pulverulentas o vellosas, con pliegues radiales, de color blanco o
crema que tienden a oscurecerse en tonos verde oliva y, a veces, gris verdoso o marrones. Es
un hongo saprófito, normalmente se encuentra colonizando las plantas o en el suelo. Puede
crecer en paja y madera húmeda, alimentos, combustibles fósiles, cosméticos (cremas),
pinturas, plásticos, papel y tejidos (ropa, alfombras, cuero). Su temperatura óptima de
crecimiento es de 18ºC a 28ºC, la mayoría de las especies no crecen a temperaturas superiores
a 35ºC, pero algunas como C. herbarum pueden crecer a bajas temperaturas hasta los -6ºC.
Normalmente requieren humedad relativa alta del 80% al 90%, aunque especies como C.
carrionii pueden crecer con baja humedad relativa y colonizar plantas xerófilas. Las esporas
se encuentran en forma de bioaerosol en el aire, principalmente a finales de verano y
principios de otoño, sobre todo en zonas templadas, siendo un contaminante habitual en los
edificios o en los lugares de trabajo

http://www.insht.es/RiesgosBiologicos/Contenidos/Fichas%20de%20agentes%20biologicos/F
ichas/Hongos/Cladosporium%20spp.pdf

● Penicillium sp: ​Con una sola excepción (Penicillium marneffei, hongo termodimórfico), los
miembros del género Penicillium son hongos filamentosos. Las especies de Penillium están
ampliamente distribuidas en la naturaleza y se hallan en el suelo, la vegetación caída, el aire y
el suelo. A diferencia de las otras especies del género, Penicillium marneffei es endémico del
Sudeste de Asia, donde infecta ratas del bamboo, las cuales sirven como marcadores
epidemiológicos y reservorios para las infecciones humanas. Es aislamiento de especies de
Penicillium diferentes de Penicillium marneffei son considerados contaminantes habituales en
el laboratorio, pero pueden causar infecciones, especialmente en huéspedes immuno
comprometidos. Penicillium marneffei es patógeno, particularmente en los pacientes HIV
positivos, y su aislamiento de la sangre es considerado como un marcador de SIDA en las
áreas endémicas. Además de su potencial patogenicidad, Penicillium produce mycotoxinas.
Algunas especies de Penicillium tienen fase teleomorfa, incluida en los géneros
Eupenicillium, Talaromyces, Hamigera y Trichocoma. Las especies de Penicillium (excepto
P. marneffei), hifas septadas hialinas (1.5-5 µ de diámetero), con conidióforos simples o
ramificadas, métulas, fialides y conidias. Las métulas son ramificaciones secundarias que se
forman sobre los conidióforos. Las métulas acarrean fialides en forma de frasco. La
organización de las fialides en la punta de los conidioforos es típica (llamadas "penicilli" o
pincel). Las conidias (2.5-5µ de diámetro) son redondas, unicelulares y observadas como
cadenas no ramificadas en el extremo de las fialides. En su fase filamentosa, Penicillium
marneffei es microscópicamente similar a otras especies de Penicillium. En su fase de
levadura, Penicillium marneffei presenta células globosas o elongadas con forma de salchicha
(3-5 µ) que se multiplican por fisión. Penicillium marneffei es fácilmente inducido a producir
artroconidias en el estado de levadura por subcultivos en BHI e incubando a 35°C, en los
cuales después de una semana, se forman levaduras divididas por fisión e hifas con
artroconidias.

https://www.inspq.qc.ca/moisissures/fiches/penicillium-spp

● Aspergillus sp: A​ spergillus es un hongo filamentoso hialino, saprofito, perteneciente al filo


Ascomycota. Se encuentra formado por hifas hialinas septadas y puede tener reproducción
sexual (con formación de ascosporas en el interior de ascas) y asexual (con formación de
conidios). Las diferentes especies se diferencian en tamaño, tasa de crecimiento, textura
(aterciopelada, granular, algodonosa) y color de la colonia: verde-amarillento (A. flavus),
negro (A. niger), marrón (A. terreus). La coloración aparece casi siempre en todas las
estructuras aéreas, tanto en el micelio como en las cabezas conidiales. Aspergillus es uno de
los principales hongos productores de micotoxinas. Las micotoxinas son metabolitos
secundarios producidos y secretados por el hongo durante el proceso de degradación de la
materia orgánica, como mecanismo de defensa frente a otros microorganismos. Crece en
cualquier tipo de sustrato, especialmente en suelos y materiales en descomposición. Es un
contaminante habitual de los conductos de climatización-ventilación. Es termotolerante,
puede vivir entre los 12ºC y los 57ºC. La transmisión se produce principalmente por medio de
las esporas o conidios que se encuentran presentes en el ambiente de trabajo en forma de
bioaerosoles y penetran en el organismo por vía respiratoria. También es posible la
transmisión por contaminación de heridas o mucosas y la aparición de efectos tóxicos por
ingestión de alimentos contaminados. Son responsables de casos de enfermedad nosocomial.
No se produce transmisión de persona a persona.
http://www.insht.es/RiesgosBiologicos/Contenidos/Fichas%20de%20agentes%20biologicos/F
ichas/Hongos/Ficha%20Aspergillus%20spp.pdf

● Mucor sp: Las especies de Mucor, se encuentran en suelo, plantas, frutas y vegetales en
descomposición. Es ubicuo en la naturaleza y un contaminante común de laboratorio, sin
embargo, puede causar infecciones en el hombre, anfibios y ganado vacuno y porcino. El
genero Mucor, contiene varías especies, la mayoría de las cuales son incapaces de crecer a 37
°C. Las cepas aisladas de infecciones humanas suelen ser por especies termotolerantes. Las
especies más comunes son Mucor ramosissimus y M. circinelloides. Mucor spp. Presenta un
micelio macrosifonado (entre 4 y 8µm de diámetro), cenocítico, hialino, en ocasiones puede
llegar a presentar clamidoconidios, que se llegan a confundir con septos; Al ser un
Zygomiceto presenta esporangiosporas de entre 3 y 5µm de diámetro, dentro de esporangios
de entre 20 y 80µm, con una columela pequeña pero muy ovoide. (Bonifa, 2012).

https://atlasdemicologia.wordpress.com/2016/03/17/mucor-spp/

● Alternaria sp: e​ s un hongo filamentoso, saprofito, perteneciente al filo Ascomycota y al grupo


de los dematiáceos, caracterizados por presentar una coloración oscura. Microscópicamente se
observan conidióforos simples, tabicados, de forma alargada u ovoide. En el extremo del
conidióforo se forman unos conidios de color pardo, con septos transversales y verticales
(muriformes) de disposición irregular. La reproducción es por gemación de la célula apical, a
partir de la cual se genera un nuevo conidio, formándose así largas cadenas de conidios. Las
colonias son de crecimiento rápido (tres o cuatro días) y macroscópicamente presentan un
aspecto velloso, al principio de color gris, después adquieren tonos negros oliváceos en el
centro y reverso y con un borde gris blanquecino que rodea la colonia. getales encontrándose
principalmente en el suelo, en vegetales en descomposición (madera, frutas, cereales,
hortalizas), en papel y tejidos (ropa, alfombras). Para crecer necesita una humedad relativa
entorno al 25%-30%, siendo mayor su proliferación a humedades relativas más altas
(superiores al 90%). También puede crecer en un amplio rango de temperaturas de 2ºC a
33°C, y amplio rango de pH entre 2-8. Las esporas se encuentran en forma de bioaerosol en el
aire, alcanzando concentraciones pico a finales del verano y en otoño. Es un contaminante
habitual en los edificios o en los lugares de trabajo, encontrándose en los sistemas de aire
acondicionado y en las humedades generadas por condensación.
http://www.insht.es/RiesgosBiologicos/Contenidos/Fichas%20de%20agentes%20biologicos/F
ichas/Alter%20spp.pdf

Método de cámara húmeda


Un dispositivo para cultivo de cámara húmeda es un sistema esterilizado que consta de una
placa Petri conteniendo un disco de papel filtro y una varilla de vidrio en “U” que soporta dos
laminas porta y cubre objetos. Asépticamente se secciona una pequeña porción de medio de
cultivo estéril (agar sabouraud), y se coloca sobre la lámina porta objetos. Realizada la
siembra del hongo en estudio, la preparación se cubre con otra lámina y el papel filtro se
humedece conservando la asepsia. La placa es incubada a temperatura ambiente (20-25 °C)
por 4 o 5 días. En la presente práctica se observara el crecimiento mitótico de los filamentos
para solo 2 días después de la incubación.

Agar Sabouraud
Este medio de cultivo es utilizado para cultivos de mohos y levaduras patógenas y no
patógenas. Utiliza la peptona, la tripteina y la glucosa son los nutrientes para el desarrollo de
microorganismos. El alto contenido de glucosa, la presencia de cloranfenicol, el pH es acido,
de pH 5.6±0.2, inhiben el desarrollo bacteriano y favorecen el crecimiento de hongos y
levaduras. El agar es un agente solidificante.
Sus características:
· Medio de cultivo deshidratado: color beige claro, homogéneo, libre deslizamiento.
· Medio de cultivo preparado: color ámbar claro , ligeramente opalescente sin precipitado

IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Ejercicio N°1: Identificación de hongos medioambientales

a) Materiales:
- Aislamientos de hongos medioambientales (cocina y dormitorio) en placas de agar
sabouraud.
- Estilete.
- Láminas porta y cubre objeto.

b) Métodos:
1. Análisis macroscópico:
- Se observó el tipo de desarrollo de los hongos en el medio de cultivo. Y se
contabilizó la cantidad de colonias existentes.
- Luego de contabilizar las colonias, en cada colonia se determinó: color, forma
(circular, invasivo, amorfo) y aspecto (agamuzado, aterciopelado,
algodonoso, filamentoso, mucoso, con brillo metálico).
- Finalmente se determinó la frecuencia de cada tipo morfológico con respecto
al total de colonias y los diámetros de cada una de las colonias.

2. Análisis microscópico:
- Se observó una muestra de cada colonia, al microscopio en todos los
aumentos y se determinó el tipo de hifa (septada o cenocítica).
- Luego se observó el tipo funcional de las hifas (vegetativa aérea,
esporangióforo, conidióforo).
- Después se observó la estructura de diseminación (esporas o conidias) y se
comparó el grosor y altura, con las otras muestras. Y se apuntaron todos los
resultados, para la posterior identificación del hongo estudiado.
- Finalmente, los hongos que no se pudieron identificar, se procedió a llevarlos
a cultivo en cámara húmeda.

Ejercicio N°2: Cultivo en cámara húmeda

a) Materiales:
- Placas petri con colonias de hongos aislados.
- Dispositivo para cultivo en cámara húmeda (Soporte en U, porta objetos, cuadrado de
agar sabouraud, cubre objetos y papel filtro).
- Mechero con alcohol.
- Estilete.
- Pinzas.
- Agua destilada.

b) Métodos:
1. Se prendió el mechero para crear un ambiente estéril.
2. Luego se abrió la placa, con mucho cuidado, y con la ayuda de un estilete se extrajo
una pequeña fracción de la colonia.
3. Después se depositó la fracción de la colonia, sobre la porción de agar que estaba
dispuesta en el portaobjeto y con la pinza estéril (calentada en el mechero), se colocó
la lámina cubreobjetos.
4. Con la pinza también se colocó el portaobjetos encima del soporte en U.
5. Se humedeció el papel filtro con agua destilada.
6. Finalmente se incubó la placa a una temperatura entre 20 - 25°C.
7. A partir de ese día se examinó cada 24 horas, al microscopio la lámina sembrada,
hasta verificar e identificar el tipo de hongo. Se observó la germinación de las
esporas, el crecimiento y ramificación del micelio, la aparición de hifas diferenciadas
y el desarrollo de sus estructuras de reproducción.

V. RESULTADOS

Ejercicio N°1: Identificación de hongos medioambientales


a. Placa 1:​ ​Hongos existentes en el dormitorio.

*​Datos macroscópicos:

- Cantidad de colonias : 4 colonias en total.


- Frecuencia de la colonia : 50% para ambas colonias (colonias 2 y 4 iguales y colonias
1 y 3 iguales).
- Diámetro : El diámetro de la colonia 1 es de 2 centímetros, el de la
colonia 2 es de 2,5 centímetros, el de la colonia 3 es de 1 centímetro y el de la colonia 4 es de
0,25 centímetros.
- Color de la colonia : El color de las colonias 1 y 3 son verde oscuro, y el color de
las colonias 2 y 4 son amarillo-mostaza.
- Forma de la colonia : La forma para todas las colonias presentes, es de forma
circular.
- Aspecto de la colonia : La colonia 1 tiene un aspecto agamuzado, al igual que la
colonia 3 y las colonias 2 y 4 tienen un aspecto medio algodonoso y agamuzado.
*​Resultados microscópicos:

- ​ rado de aumento 400X.


Colonia 1: ​Cladosporium sp. G
Presenta hifas septadas y conidióforos.

- ​ rado de aumento 400X.


Colonia 2:​ ​Ulocladium sp. G

Presenta hifas septadas y conidias muy características en forma ovoidal.

b. ​Placa 2​: ​Hongos existentes en la cocina.


*​Datos macroscópicos:

- Cantidad de colonias : 7 colonias en total.


- Frecuencia de la colonia : 14,29% para la colonia más grande (1) y visible, 57, 15%
para las colonias 2, 3, 4 y 5 y 28,56% para las colonias 6 y 7.
- Diámetro : El diámetro de la colonia 1 es el diámetro de toda la placa
petri ( cm), para la colonia 2, 3,4 y 5 el diámetro es de aproximadamente 0,5 centímetros y
para las colonias 6 y 7, el diámetro es 2,5 cm y 1 cm respectivamente.
- Color de la colonia : El color de la colonia 1 es de color blanco, las colonias 2,
3,4 y 5 son de color verde oscuro y las colonias 6 y 7 son de color marrón.
- Forma de la colonia : La forma para todas las colonias 2,3,4,5,6 y 7, es de forma
circular. En cambio la colonia 1, es de forma invasiva.
- Aspecto de la colonia : La colonia 1 tiene un aspecto algodonoso, las colonias 2, 3,
4, 5, 6 y 7 tienen un aspecto agamuzado.

*​Resultados microscópicos:

- ​ rado de aumento 400X.


Colonia 1: ​Rhizopus sp. G

Presenta

rizoides, esporangio y esporangióforos.

- Colonia 6: ​Alternaria sp. ​Grado de aumento 400X.


Presenta hifas septadas y unas conidias multicelulares.

Ejercicio N°2: Cultivo en cámara húmeda

- Ulocladium sp.

Día 1:

Se observó con un grado de aumento de 100X , aún no se podía diferenciar qué organismo era.

Día 2:
Se observó con un grado de aumento de 400X. En este día ya se podía reconocer al hongo, junto con
sus conidias.

- Rhizopus sp.

Día 1:

Se observó con un grado de aumento de 100X, aún no se podía diferenciar al hongo.

Día 2:

Se observó con un grado de aumento de 400X. Para este día ya se podía reconocer al hongo.

VI. DISCUSIONES

Los hongos son organismos cosmopolitas ya que el muestreo se dio en diferentes lugares a diferentes
horas y las colonias presentadas en las placas mostraban repeticiones de las mismas que al
microscopio se reconocía que pertenecían al mismo género. El caso más frecuente fue
Cladosporium sp. el cual presentaba coloración verde petróleo y ​Aspergillus sp. que presenta color
marrón amarillento. La clasificación de hongos se basa en la observación de hifas, si estas son
septadas o cenocíticas; si presenta conidios o esporangios, la forma y el tamaño de estos; entre otros.
Además, si presenta esporangios, observar alguna zona que presente rizoide o no.

En el crecimiento vegetativo hay ausencia de órganos reproductivos, y al pasar los días el hongo
presentará hifas vegetativas indiferenciadas en los extremos. Al tomar una muestra de hongos, sea con
un estilete o con otro instrumento, tendemos a alterar sus estructuras, sobre todo las reproductoras las
cuales son las que portan las esporas. Como resultado de ello nuestra muestra puede estar llena de
esporas libres y será más difícil distinguir sus estructuras de reproducción o tal vez los micelios
pueden quedar adheridos al instrumento. Es por ello que se aisló una especie de hongo para poder
observar su desarrollo y sus estructuras sin necesidad de alterar ninguna de ellas, utilizamos el
microcultivo en cámara húmeda. Esta técnica nos permite obtener una pequeña colonia de hongo
sobre la superficie de una lámina portaobjetos (prácticamente en un mismo plano) que facilita la
observación de la totalidad de las estructuras características morfológicas de la especie en sus
diferentes etapas de crecimiento permitiendo identificar al hongo que estamos cultivando con menor
grado de error.

La técnica de microcultivo en cámara húmeda sólo es utilizable en el caso de hongos filamentosos. En


el caso de levaduras y otros microorganismos como las bacterias, se va a dar el crecimiento y
reproducción de éstas, sin embargo, lo harán a tal medida que lo único que obtendremos al final será
una masa concentrada de células, lo cual haría imposible nuestra observación en el microscopio. El
medio de cultivo es sólido porque este tipo de medio permite crecer y formar masas aisladas visibles
llamadas colonias. Las colonias pueden tener forma, tamaño y color variable dependiendo del
organismo, pero también son afectados por las condiciones de cultivo, el suministro de nutrientes y
otros parámetros fisiológicos. En esta técnica de cultivo se utiliza el agar sabouraud que contiene
glucosa y peptona modificada (pH 7.0) debido a que no apoya el fácil crecimiento de las bacterias.

Los resultados obtenidos para el primer ejercicio fueron la identificación de cuatro géneros de hongos
medioambientales que generan esporas en los ambientes cerrados, como al interior de la casa. Las
placas fueron colocadas en lugares como la cocina y el dormitorio para evaluar el crecimiento y
diversidad fúngica encontrada en dicho ecosistema. Se observó que en la placa Petri con agar
sabouraud, que fue dejada en el dormitorio por un periodos de exposición de 15 minutos, lograron
desarrollarse las esporas de ​Cladosporium sp. (​ colonias circulares, gamuzadas y de color verde
petróleo) y​ ​Ulocladium sp. (colonia circular, gamuzada, con bordes blancos y centro color mostaza).
Mientras que en la cocina, las esporas de hongos que desarrollaron fueron fundamentalmente de
Rhizopus sp. (​ que creció de forma invasiva ocupando casi todo el medio de cultivo, de aspecto
algodonoso, micelio color blanco y cuerpo reproductivo color negro). Aparte, se identificó una
pequeña colonia de ​Alternaria sp. c​ asi al borde de la placa Petri. Tenía forma irregular, color marrón y
aspecto gamuzado.

El siguiente ejercicio consistió en realizar dos cultivos en cámara húmeda para dos géneros de hongos.
En este caso, se seleccionaron las colonias de ​Ulocladium sp. y​ ​Rhizopus sp. ​Se extrajeron pequeñas
muestras para ser sembradas en la placa Petri que contiene la cámara húmeda y, sobre una gota de
agua en la lámina portaobjetos, se coloca un pequeño trozo de hongo con agar; se coloca finalmente la
lámina cubreobjetos y se cierra la placa. Esta será incubada a una temperatura de 30°C por los días
que sean necesarios para lograr su identificación al microscopio. En esta ocasión, bastaron
aproximadamente 44 horas (en dichas condiciones ambos hongos alcanzaron madurez sexual) para
reconocer con claridad las conidias particulares del ​Ulocladium sp. y​ los rizoides, esporangióforo y
esporangio del ​Rhizopus sp. ​En una primera observación, más o menos pasadas las 20 horas desde la
incubación, aún no se podía determinar el género debido a que solo se observan las estructuras
vegetativas, las hifas.

Según Centers for Disease Control and Prevention (2003), en un estudio desarrollado dentro de un
almacén industrial, los géneros de hongos medioambientales más comunes fueron ​Aspergillus sp.,
Penicillium sp., Fusarium sp.,​ Alternaria sp. Cladosporium sp. ​y ​Mucor sp. L ​ as especies de hongos
correspondientes a estos grupos se distribuye según si se analiza un ambiente al aire libre o en
interiores. No obstante, también se encontraron ejemplares de ​Rhizopus sp. y​ ​Ulocladium sp. s​ olo que
en menores proporciones. Comparado a nuestro estudio, es importante considerar que todos los
géneros encontrados resultan ser algunos de los más presentes en los ambientes cerrados. Los hongos
se encuentran en lugares donde la humedad y temperatura sea favorable para el desarrollo de sus
esporas. Asimismo, la disponibilidad de un sustrato puede ser fundamental para que un hongo
prolifere; existen especies de hongos que no responden, por ejemplo, al agar sabouraud debido a que
no es el medio de cultivo ideal para estas, que suelen ser agentes patógenos y por ello necesitan de un
hospedero para infectarlo y llevar a cabo su ciclo de vida.

VII. CONCLUSIONES
- De acuerdo a lo observado en ambos ejercicios, las placas mostraban repeticiones y mayor
frecuencia de ciertas colonias, que al microscopio se reconocía que pertenecían al mismo
género. Los más frecuentes fueron ​Cladosporium sp.​ y ​Aspergillus sp.
- Al realizar una observación a las colonias macroscópicas, se logró determinar y reconocer
caracteres comunes recurrentes en estas, los cuales sirven para hacer una identificación
general del hongo a estudiar, tales como color, forma (circular, invasivo, amorfo) y aspecto
(agamuzado, aterciopelado, algodonoso, filamentoso, mucoso, con brillo metálico).
- Las observaciones microscópicas fueron determinantes para la identificación de los hongos
en cuestión, empezando por las hifas, si estas son septadas o cenocíticas; si presenta conidios
o esporangios, la forma y el tamaño de estos; entre otros. Además, si presenta esporangios,
observar alguna zona que presente rizoide o no.

VIII. CUESTIONARIO

1. Haga una descripción morfológica de 5 géneros de hongos medioambientales


considerando las características de desarrollo en medio de cultivo y las
características observadas al microscopio.

➢ Fusarium: El color de las colonias es blanco, crema, pardo claro o pardo rojizo mezcladas
con zonas de color púrpura; raramente en cepas de aislamientos clínicos pueden presentar
masas mucosas verdes azuladas, formadas por macroconidias que nacen de esporodoquios. La
textura es algodonosa o lanosa. Se caracteriza por presentar conidióforos de esporodoquios
cortos, ramificados. Conidióforos de hifas aéreas generalmente no ramificados, muy largos,
reducidos a una simple fiálide más o menos cilíndrica, en cuyo ápice se puede encontrar un
conidio no desprendido. Macroconidias en masas mucosas, hialinos, mayormente con tres
septos, ligeramente curvados, fusiformes, pero con extremos más o menos redondeados.
➢ Aspergillus​: Presentan conidióforo corto, liso, vesícula con fiálides, uniseriada, ocupando 2/3
de la vesícula. Los conidios en cadenas forman una compacta columna sobre la vesícula, son
de color verde, finamente rugosos, globosos o subglobosos. La textura de las colonias es
aterciopelada, afelpada, vellosa o algo plegada, con margen blanquecino. El color
inicialmente es blanco virando en aproximadamente siete días a un verde azulado por la
producción de conidias. El reverso de la colonia es incoloro.
➢ Penicillium​: Este género se caracteriza por formar conidios en una estructura ramificada
semejante a un pincel que termina en células conidiógenas llamadas fiálides. Si hay sólo un
verticilo de fiálides el pincel es monoverticilado. Las ramificaciones de un pincel
poliverticilado son ramas, rámulas, métulas y fiálides. Los conidios generados en fiálides
suelen llamarse fialoconidios para indicar su origen. En la fiálide, al dividirse el núcleo, se
extiende simultáneamente el extremo apical que luego se estrangula separando a la espora
recién formada.
➢ Rhizopus: Inicialmente son blancas pero luego cambian a gris parduscas. El micelio carece
de septos. Presentan estolones y rizoides. Los esporangióforos no son ramificados, tienen una
longitud de 2 mm, generalmente están en grupos, formando verticilos en cuya base se sitúan
los rizoides. Las apófisis pueden estar presentes pero son poco evidentes. Presentan
esporangios esféricos, los cuales son de color gris pardusco a negro. La columnilla es
subesférica. Las esporangiosporas son angulares y con estrías longitudinales, grisáceas,
subesféricas o elipsoidales.
➢ Mucor: El color de las colonias es blanquecino al inicio, con el tiempo cambia a marrón. El
reverso de la colonia es blanquecino. La textura es algodonosa. Presentan hifas aseptadas y
gruesas. Se caracteriza por presentar esporangióforos, esporangios. Carecen de apófisis,
estolón y rizoides. Las columnillas son hialinas, siendo visibles si el esporangio se encuentra
intacto. Los esporangios son esféricos o redondos y de color gris a negro, estando llenos de
esporas.

2. Los nombres genéricos de muchos hongos son derivados de características
morfológicas. ¿De cuáles derivan los nombres Penicillium, Aspergillus y Rhizopus?

➢ El nombre ​Penicillium fue por primera vez asignado en el año 1809 por el científico alemán
Johann Link. Este observó que las estructuras reproductivas y diferenciales (conidióforos) del
hongo se parecían a un pincel.
➢ El nombre ​Aspergillus fue por primera vez asignado en el año 1729 por el biólogo italiano
Pier Antonio Micheli, en su obra “Nova Plantarum Genera”. El científico observó que la
morfología de este hongo se asemejaba a un aspersorio, instrumento metálico utilizado en las
iglesias para rociar agua bendita.
➢ El nombre ​Rhizopus ​se debe a que al ser vista al microscopio pueden observarse estructuras
vegetativas similares a las raíces de las plantas, por ello morfológicamente se le conocen
como rizoides. Fue descubierto inicialmente en los panes que se dejaban algunos días a la
intemperie, desde ahí se catalogó como el “moho negro del pan”. Schlegel, H. G. y
Zaborosch, G. (1997).

3. ¿Por qué razón algunas colonias aisladas del medio ambiente no desarrollan
esporas en el medio de cultivo?
Porque el agar muchas veces satisface las necesidades nutritivas del hongo, por lo que este se
extiende de manera vegetativa. Este comportamiento se puede entender considerando que la
producción de esporas es un proceso altamente energético y de dispersión, por lo que mientras
haya nutrientes necesarios y suficientes, se priorizará el crecimiento vegetativo.

4. ¿Cuál es la ventaja del empleo de la cámara húmeda en el estudio de los hongos?

Un dispositivo para cultivo en cámara húmeda consiste en un sistema esterilizado que consta
de una placa Petri conteniendo un disco de papel filtro y una varilla de vidrio en forma de “U”
que soporta dos láminas porta y cubreobjetos. Asépticamente, se secciona una pequeña
porción de medio de cultivo estéril (agar sabouraud), y se coloca sobre la lámina portaobjetos.
Realizada la siembra del hongo en estudio, la preparación se cubre con la otra lámina y el
papel filtro se humedece con agua destilada para no contaminar el medio. La placa es
incubada a temperatura ambiente (entre 20 y 35°C) durante 4 o 5 días. Moreno P. Ramos R.
Villena G. Gutiérrez M. (N.D.) Las ventajas de emplear esta técnica es que favorece el
crecimiento vertiginoso del hongo por dársele condiciones óptimas (temperatura y humedad)
para su desarrollo, además de que el medio se encuentra libre de contaminación.

La identificación del hongo puede hacerse a pocos días de la incubación y la muestra se


encuentra lista para ser observada al microscopio. Además, se permite visualizar con mayor
facilidad las etapas del desarrollo vegetativo y reproductivo del hongo. Desde la morfogénesis
de las primeras hifas, la expansión del micelio hasta los conidióforos, esporangióforos,
conidias o esporangios; dependiendo del género cultivado.

5. ¿Existen diferencias entre los hongos a nivel de crecimiento y diferenciación del


micelio?Explicar.
No se presentan diferencias morfológicas en estas etapas ya que en el nivel de crecimiento las
hifas son la forma característica de los hongos filamentosos; estás conectan a la enorme
cantidad de células vegetativas que constituye a estos microorganismos, estos hifas son
estructuras tubulares microscópicas, de diámetro y longitud característicos, dependientes de la
especie y las condiciones del medio; dichas estructuras tubulares se encuentran formadas por
quitina como el componente principal, que las hacen lo suficientemente fuertes como para
atravesar la pared celular de las plantas.
La diferenciación de micelio se da a consecuencia del incremento en las ramificaciones de las
hifas, lo que genera un aumento en el número de ápices y produce el incremento de la
biomasa del hongo, por lo cual la diferencia solo se da en la diferentes ramificaciones que
presenta cada hongo, más no en la morfología.

IX. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

- Webster J. (1986) ​Introduction to Fungi.​ 2° ed. Cambridge University Press.


- Mier, T. (2002). ​Hongos microscópicos saprobios y parásitos​. México: Instituto de
Biología, UNAM.
- Schlegel, H. G. y Zaborosch, G. (1997). Microbiología General. Novena edición.
Barcelona: Ediciones Omega S.A.
- Madigan M. Martinko J. Bender K. Buckley D. Stahl D. (2015). ​Brock. Biología de
los microorganismos.​ Decimocuarta edición. Madrid: Pearson Education.
- Centers for Disease Control and Prevention (CDC). [Internet]. Department of Health
and Human Services. 2003. [Citado 08 Oct 2018]. Disponible en:
https://www.cdc.gov/mold/es/pdfs/faqs.pdf
- Moreno P. Ramos R. Villena G. Gutiérrez M. (N.D.) ​Microbiología: Guía de
Laboratorio. ​Lima: ​Departamento Académico de Biología, Facultad de Ciencias -
UNALM.
- Arenas, R. (2008) MICOLOGÍA MÉDICA ILUSTRADA, capitulo 22 Zigomicosis,
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