UNIVERSIDAD NACIONAL DE CAJAMARCA

PRCTICA N03
MEDIOS DE CULTIVO PREPARACIN Y ESTERILIZACIN

I.

INTRODUCCIN
Para el estudio de los microorganismos es indispensable contar entre otras
cosas con material y medios de cultivo estriles. En Microbiologa la
esterilizacin se define como el proceso mediante el cual se eliminan todos
los microorganismos (incluyendo formas de resistencia) de un objeto, medio
o superficie y su aplicacin garantiza la ausencia de microorganismos en el
material y medios de cultivo a ser empleados. Existen diversos mtodos de
esterilizacin, entre ellos: calor (seco o hmedo), filtracin (para sustancias
termolbiles y aire), radiaciones y aplicacin de gas de xido de etileno (para
jeringas y cajas de plstico).
Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones
adecuadas y en condiciones fsicas ptimas, permiten el crecimiento de los
microorganismos. Estos medios son esenciales en el Laboratorio de
microbiologa por lo que un control en su fabricacin, preparacin,
conservacin y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de
los resultados obtenidos.
En los laboratorios de microbiologa se utilizan diferentes tipos de medios de
cultivo que pueden ser preparados en forma lquida o en forma slida.
Usualmente para preparar un medio slido, se parte de un medio lquido al
que se le aade un agente solidificante como el agar, la gelatina o la
slicagel.

II. OBJETIVOS
Conocer y preparar correctamente el material que se someter a
esterilizacin.
Seleccionar los mtodos de esterilizacin adecuados para las diversas
necesidades del laboratorio de microbiologa.
Conocer los diferentes medios de cultivo que exista.

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III. MARCO TERICO

La esterilizacin.
La esterilizacin es un proceso a travs del que se puede lograr la
destruccin total de los microorganismos viables presentes
determinado material.

en

un

Clasificacin de los mtodos de esterilizacin:

AGENTES FSICOS.
El calor se puede aplicar como agente esterilizante de dos formas:El calor
hmedo
el
cual
destruye
losmicroorganismos por desnaturalizacin de las protenas y el calor seco qu
e destruye a losmicroorganismos por oxidacin de sus componentes
celulares. El calor es considerado como el mtodo de esterilizacin por
excelencia siempre y cuando el material a esterilizar soporte altas
temperaturas sin sufrir ningn tipo de dao.
a. Esterilizacin por calor.
El calor es el mtodo de eleccin para esterilizar el material de laboratorio
resistente a las altas temperaturas. La temperatura y el tiempo requeridos
para esterilizar un material dependen de que se est utilizando calor seco o
calor hmedo. Esterilizacin con calor seco: La accin bactericida del
calor seco se debe a la oxidacin fsica de un procedimiento lento o
coagulacin de la protena bacteriana por quemadura.
En ausencia de humedad se necesita una temperatura ms alta, ya que en
esta forma los microbios son destruidos al absorber el calor. Pueden ser dos
tipos:

Directa: Flameado o incineracin ms utilizada en laboratorios.

Indirecto: Aire caliente u horno de Pasteur con temperatura de 160C a

180C por 1 a 2 horas siendo el ms eficaz y seguro el elctrico.

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b. Esterilizacin con calor hmedo:

El calor hmedo es la forma de vapor saturado a presin es eficaz para la

destruccin de todas las formas microbianas, incluso espora. La muerte de
las bacterias es causada por la desnaturalizacin y coagulacin de su
protena o su sistema intercelular enzima-protena. Estas reacciones son
catolizadas por medio del agua. Estas pueden de dos tipos:

Calor hmedo discontinuo: algunos medios de cultivo que contiene

carbohidratos como la gelatina, leche, etc. no soportan temperaturas
elevadas y se realiza mediante los siguientes procedimientos:

Ebullicin: es el paso de un lquido al estado de vapor. El agua en ebullicin

representaen forma eficaz y prctica de proporcionar una desinfeccin de alt
o nivel deinstrumentos y guantes que entren en contacto de las membranas
mucosas, si bien al hervirlos por 20 minutos se aniquilan todas las formas
vegetativas de las bacterias, los virus, las levaduras y los hongos, pero no
destruye a las esporas.

Pasteurizacin: Elimina a todos los microorganismos no esporulados se

puede variar las temperaturas por ejemplo: 62C por 30 min.; 70C por 15
min. Se utiliza para preservar alimentos como ser leche, cerveza

Vapor a presin: conocido como autoclave, que posee todos los requisitos
indispensables como grados de temperatura y tiempo de exposicin, que
junto con el tamao del autoclave y el flujo del vapor, la densidad y el
tamao de la carga en la cmara aumentan la tasa de muerte de los
microorganismos, en una temperatura de 121C 132C durante 15 minutos
o ms.

c. Filtracin.
Se utiliza para esterilizar sustancias y materiales que no pueden soportar
elevadas temperaturas ni presiones como protenas, sueros, urea, etc. El
uso de esta tcnica est restringido a lquidos poco densos.

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medios de cultivo.
Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que en concentraciones
adecuadas y en condiciones fsicas ptimas, permiten el crecimiento de los
microorganismos. Estos medios son esenciales en el laboratorio de
microbiologa por lo que un control en su fabricacin, preparacin,
conservacin y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de
los resultados obtenidos.
El cultivo es el producto del crecimiento de organismos o grupos de
organismos, establecidos con fines experimentales o industriales.

Clasificacin de los medios de cultivo.

En los laboratorios de microbiologa se utilizan diferentes tipos de medios de
cultivo que pueden ser preparados en forma lquida o en forma slida.
Usualmente para preparar un medio slido se parte de un medio lquido al
que se le aade un agente solidificante como el agar, la gelatina o la slicagel
Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza de sus
constituyentes en:

Medios Lquidos.
Conocidos como caldos, estos son especialmente tiles para hacer dilucione
s, parahomogenizar mezclas de microorganismos, para enriquecer cultivos y
para rehidratar cepasliofilizadas.

Medios Slidos.
Para separar microorganismos y favorecer el desarrollo de las colonias
aisladas en las que es posible observar las caractersticas tpicas de un solo
tipo de microorganismo.

Medios Semislidos
Son aquellos medios lquidos a los que se adiciona agar en concentraciones
de 0.4 a 0.8%. Estos se emplean para determinar la movilidad de los
microorganismos microaeroflicos. Los medios de cultivo se pueden preparar
en el laboratorio a partir de cada uno de sus constituyentes
bsicos o por simple rehidratacin de productos asequibles comercialmente
(medios de cultivo deshidratados). Generalmente se prefiere el uso de los

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medios de cultivo deshidratados porque, adems de simplificar el trabajo,

con ellos se tiene mayor probabilidad de obtener resultados reproducibles.

Medios naturales o complejos:

Constituidos por sustancias complejas de origen animal o vegetal, las que
son usualmente complementadas por la adicin de minerales y otras
sustancias. En ellos no se conocen todos los componentes ni las cantidades
exactas presentes de cada uno de ellos.

Medios definidos o sintticos

Son los medios que tienen una composicin qumica definida cualitativa y
cuantitativamente. Generalmente se usan en trabajos de investigacin.

Medios de enriquecimiento:
Son medios lquidos que favorecen el crecimiento de un tipo de
microorganismos
en
particular.
Permiten aumentar
el nmero de microorganismos de ese tipo. Usualmente contienen una o
ms sustancias inhibidoras del crecimiento de los microorganismos con
excepcin de los que se quieren cultivar.

Medios selectivos:
Son parecidos a los de enriquecimiento, se diferencian por ser medios
slidos
y
estn diseados para el aislamiento de microorganismos especficos.

Medios diferenciales:
Son medios que contienen indicadores de productos derivados de la
actividad
microbiana de los microorganismos. No contienen ningn tipo de sustancia c
on actividad antimicrobiana. Permiten revelar caractersticas fisiolgicas de
los microorganismos.

Medios indicadores.
Son todos aquellos en los cuales se busca valorar caractersticas
metablicas especiales de cada especie de bacteria.
Para su preparacin se deben tener en cuenta los siguientes aspectos:

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Prepararlos slo a partir de productos que provengan de fabricantes o

proveedores que suministren productos de calidad.
Utilizar agua destilada o desmineralizada con una calidad microbiolgica y
fisicoqumica adecuada.
Utilizar materiales de vidrio bien lavado y enjuagado con agua destilada o
desmineralizada.
Controlar el tiempo y la temperatura recomendada durante su
esterilizacin. Nunca se deben exceder las condiciones sealadas por el
fabricante.
Los medios de cultivo deshidratados se deben almacenar en envases
sellados bajo las condiciones que seale el fabricante. Generalmente se
almacenan en un lugar fresco (entre 15 y 25), con poca humedad y
protegidos de la luz solar directa. Nunca se deben almacenar cerca de
autoclaves, hornos, ni otra fuente de calor o vapor.
Cuando los envases de estos medios de cultivo deshidratados son abiertos
para su uso inicial, se debe tener la precaucin de cerrarlos tan pronto como
sea posible y mantenerlos bien cerrados para prevenir la entrada de
humedad. La absorcin de agua produce cambios de pH, formacin de
grumos, decoloraciones del polvo, etc., lo cual indica que deben ser
descartados porque pueden haber sufrido cambios qumicos o estar
contaminados.
Una vez que el medio de cultivo ha sido preparado y esterilizado, puede
almacenarse a temperatura ambiente por un periodo mximo de 2 semanas
protegido de la luz, o por periodos mayores a 12 -15C. Sin embargo,
almacenados bajo refrigeracin entre 2 y 8C se prolonga la vida til de los
mismos, (nunca por debajo de 0C porque se destruye la estructura del gel).
Los medios de cultivo se deben mantener en recipientes bien cerrados para
evitar su deshidratacin y cuando se usa tapn de algodn, se debe colocar
por encima una envoltura de papel (Craft).
Otro punto muy importante a tomar en cuenta, es que cada lote de medio de
cultivo preparado debe pasar por un riguroso proceso de control de calidad,
en donde se determinan sus propiedades fisicoqumicas (apariencia, pH,
etc.) y microbiolgicas (esterilidad y promocin de crecimiento) verificando
que cumplan con los requisitos de calidad establecidos y por ende demostrar
que son aptos para su uso.
Tambin debemos de ser una prueba de esterilidad.
Consiste en colocar el cultivo en las placas o en los tubos para luego
ponerlas en incubadora o estufa por 24-37C. Para verificar si lo hemos
hecho bien todo el proceso, debemos de evaluar bien para as no este
contaminado.

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IV. MATERIALES

Caja de Petri.
Mecheros.
Aza de siembra.
Muestras lquidas y slidas.

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V. CONCLUSIONES
Hemos podido conocer los medios de cultivo es una preparacin artificial
que tiene los nutrientes para que haya un crecimiento de microorganismos
que nos sirven de gran ayuda para poder identificar la morfologa, observar
sus caractersticas macroscpicas por medio de sus colonias y tambin
pudimos observar las agrupaciones de los microrganismos.
Se puede elaborar medios de cultivo de manera sencilla, siendo muy til
para el estudio de microrganismos debido a que este tipo de medio se los
puede reproducir con facilidad y tambin se pudo conocer los diferentes
medios de cultivo que exista.
Mediante el desarrollo de esta prctica definimos, estudiamos y aplicamos
los procedimientos que se deben realizar para los medios de cultivo
preparacin y esterilizacin.

De acuerdo con lo realizado en la prctica se concluye que es de gran

importancia preparar adecuadamente los medios de cultivo, para obtener los
resultados esperados.

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VI. BIBLIOGRAFA

http://www.odon.uba.ar/uacad/Pagina%20Microbiologia/micro%202013/guias
%20tp/medios%20de%20cultivos.pdf.
http://libroslaboratorio.files.wordpress.com/2012/09/medios-de-cultivo-en-unlaboratorio-de-microbiologc3ada.pdf.
http://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/Soluciones-Cultivos_celularesprotocolos.pdf.

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