PRACTICA Nº 08

ADN RECOMBINANTE: CONSTUCCION DE TRANSGEN BACTERIANO

GENERALIDADES.
En todas las células los procesos vitales están controlados por su dotación genética, es decir,
por su conjunto de genes. Un gen puede ser definido como un segmento de ADN que codifica
una proteína (a través del ARN mensajero u otra molécula de ARN, como el ARN ribosómico).
Los genomas presentan una organización diferente en células procarióticas y en células
eucarióticas.
En las procarióticas, el ADN se encuentra como una larga molécula de dos cadenas formando
el cromosoma bacteriano que se condensa para dar origen a una masa visible llamada
nucleoide. En la mayoría de los organismos procarióticos el ADN es circular no asociado a
histonas en su equivalencia está asociado a la proteína HU y en general este material equivale
a un cromosoma único, por esta razón, la mayoría de los organismos procarióticos contienen
una sola copia de cada gen y por consiguiente, son genéticamente haploides.
Una bacteria típica como por ejemplo Escherichia coli, contiene un único cromosoma con ADN
de alrededor de 4,6 millones de pares de bases. Como su cromosoma ha sido completamente
secuenciado, sabemos que contiene cerca de 4300 genes. Algunas bacterias tienen un número
de genes tres veces superior, pero otras no superan la octava parte de dicho número.
Las bacterias tienen un pequeño ADN circular llamado plásmido que se replica en forma
autónoma. Entre los plásmidos más conocidos se encuentran los que generan los factores de
resistencia a los antibióticos, a los metales pesados, se usan como vectores de clonación de
genes.
Un fragmento de ADN eucariota puede ser incorporado a un plásmido (con ayuda de
endonucleasas de restricción) e introducido en una bacteria para su multiplicación. Esta
recombinación de dos ADN de diferentes procedencias con el fin de lograr su multiplicación fue
la que dio origen a la ingeniería genética o de la recombinación genética.

COMPETENCIAS.
 Construye un TRANSGEN BACTERIANO, por simulación, utilizando un plásmido VECTOR
y un gen INSERTO.
 Aplica los conocimientos sobre el modo de acción de las enzimas de restricción y los pasos
que involucra la tecnología del DNA recombinante.

MATERIALES:
https://allyouneedisbiology.wordpress.com/2016/06/03/ingenieria-genetica/
 1 Fotocopia con DNA del plásmido vector.
 1 Fotocopia con DNA que contenga el gen que codifica la producción de insulina.
 2 Fotocopias con distintas enzimas de restricción.
 1 Fotocopia con dibujos de bacterias para introducir el plásmido – r.
 1 Fotocopia con el medio y el antibiótico para poner en las placas Petri donde crecerán las
bacterias.
 Varios modelos para simular las enzimas DNA-ligasas. (clip, cinta adhesiva, etc).
 Placas Petri.

INSTRUCCIONES.
 Recortar los trozos de DNA del plásmido y unirlos con cinta adhesiva para formar una
estructura circular que simule el plásmido.
 Hacer lo mismo con el DNA del gen inserto: “gen de la insulina”. Unir los distintos trozos
pero no cerrar.
 Recortar las diferentes enzimas de restricción.
 Deslizar ahora las enzimas de restricción en paralelo sobre el DNA del plásmido, hasta
encontrar los lugares en los que coincida la secuencia del plásmido con la secuencia
reconocida por la enzima.
 Hacer un diagrama en el que se represente los siguientes datos:
 Lugares de actuación de cada enzima de restricción.
 Lugar de inicio de replicación del plásmido.
 Lugares de resistencia a antibióticos.
 Localizar del mismo modo, los lugares de restricción en el DNA del gen inserto: gen del la
insulina.
 Seleccionar la enzima adecuada. Recordar que la enzima debe cumplir estas condiciones:
1. Que al cortar, se consiga un fragmento de DNA que contenga entero el gen de la
insulina.
2. Que rompa el plásmido y se pueda obtener un fragmento que contenga el lugar de
inicio de la replicación y al menos un factor de resistencia a antibióticos.
 Realizar los cortes apropiados en el DNA del gen inserto y en el plásmido.
 Trasladar el fragmento del DNA del gen inserto, al fragmento del plásmido seleccionado.
 Unir los fragmentos con una DNA-ligasa. Se obtiene el plásmido recombinado. Hacer un
diagrama.
 El siguiente paso es introducirlo en una bacteria para transformarla. Esto se consigue
mediante varios procesos físicos y químicos, que también se pueden simular lucidamente
en esta experiencia.
 Por último, se preparan las placas Petri y se ponen las bacterias transformadas. Proceder a
realizar la selección y reconocimiento de las células transformadas.
 Preparar un informe, (incluir el transgen), interpretar y discutir los resultados obtenidos.
ACTIVIDADES PARA ENTREGAR EN EL AULA VIRTUAL

 Transgen obtenido.
 Mapa genético del transgen obtenido.
 Adjunta las placas Petri de los cultivos realizados al transgen bacteriano.
 Desarrolla el siguiente cuestionario.
1. ¿Porque los genes Eucarióticos pueden ser introducidos en plásmidos y clonados en
bacterias?.
2. Qué clase de vectores pueden emplearse para clonar fragmentos de DNA?.
3. Indague sobre la aplicación en la biología sobre los transgenes bacterianos.