TALLER INGENIERÍA GENÉTICA – ADN Y PROTEÍNAS RECOMBINANTES Y SU

APLICACIÓN EN LA AGROINDUSTRIA

1. Que son las enzima de restricción, como es su mecanismo de acción, cuál es su

función principal en la biología de los organismos y cuáles son sus aplicaciones en
biotecnología.

Una enzima de restricción es una proteína aislada a partir de bacterias que cortan
secuencias de ADN en sitios específicos de la secuencia, lo que produce fragmentos
de ADN con una secuencia conocida en cada extremo. El uso de enzimas de
restricción es sumamente importante para determinados métodos de laboratorio, tales
como la tecnología de ADN recombinante y la modificación genética.

Las enzimas de restricción son proteínas que se unen al ADN de una manera muy
específica. Realmente reconocen los pares de bases en el ADN. En general se unen a
una secuencia palindrómica que es una secuencia que tiene una copia en espejo de sí
misma - GCTAGC.

2. Suponga que el gen del punto anterior fue aislado con éxito y se incluye en la
siguiente secuencia. Indique que fragmentos son obtenidos al digerir el gen con las
enzimas de restricción descritas

ATCAGGCTGCAGCCGGCCGCTCGCTCTGTTCGGCCGTCAACTGAAGCTTTTCGCCC
GCATAGTAGGCCCGCACCTTGGGGTCGACCGCCCGCCACAGCGGCGGGATCAGCG
CCAGCACCACCATCCCGGCATAAGCTTGCTGGGCATCTGCGGGCTATCGTCACTGCA
GCGGAAATCTTCTGATAGGGGCGTTTGGCGCATGCATGATGGTCGGAATGCCGTTGC
AGATGGAACAGGACCAAGCTTGGTGAAGACGAAGTTGCTGTTCCAAACATA 
a) SphI
b. HindIII
c. PstI

3. A que hacen referencia los términos: Clonación, Transformación, Transfección y

Transducción.

La clonación, en relación con la genética y la genómica, implica el uso de métodos

científicos para producir copias idénticas o prácticamente idénticas de un organismo,
células o secuencia de ADN. La frase “clonación molecular” por lo general se refiere a
aislar y copiar un segmento de interés determinado de ADN para estudiarlo en más
detalle.

la transformación es la alteración genética de una célula resultante de la absorción

directa, incorporación y expresión del material genético exógeno (ADN exógeno). El
ADN exógeno se encuentra en el ambiente y se introduce a través de la membrana de
la célula. La transformación ocurre de forma natural en algunas especies de bacterias,
aunque también se puede efectuar por medios artificiales. Para que ocurra la
transformación, la bacteria debe estar en un estado de competencia, lo que puede
ocurrir como una respuesta limitada en el tiempo a las condiciones ambientales, tales
como la falta de nutrientes y una densidad celular elevada.
la transfección consiste en la introducción de material genético externo en células
eucariotas mediante plásmidos u otras herramientas para la transferencia. En un
sentido más reducido, frecuentemente se usa solo para referirse a la introducción de
material genético en células animales, prefiriéndose otros términos para otras células

La transducción es un proceso mediante el cual el ADN es transferido desde una

bacteria a otra mediante la acción de un virus. También se utiliza para designar al
proceso mediante el cual ADN exógeno es introducido en una célula mediante un
vector viral. Esta es una herramienta que usualmente utilizan los biólogos moleculares
para introducir en forma controlada un gen extraño en el genoma de una célula
receptora.

Cuando los bacteriófagos (virus que infectan bacterias) infectan una célula bacteriana,
su modo normal de reproducción consiste en capturar y utilizar la maquinaria de
replicación, transcripción, y traducción de la célula de la bacteria receptora para
producir gran cantidad de virones, o producir partículas virales, incluido el ADN o ARN
viral y la cubierta de proteína.

4. Que el ADN recombinante

El ADN recombinante (rADN) es una tecnología que utiliza enzimas para cortar y unir
secuencias de ADN de interés. Las secuencias de ADN recombinado se pueden
colocar en unos vehículos llamados vectores que transportan el ADN hacia el lugar
adecuado de la célula huésped donde puede ser copiado o expresado.

5. Que es un vector de clonación y/o expresión que tipos puede identificar.

Vector de clonación: los vectores son de clonación si su finalidad es el

almacenamiento de secuencias y la obtención de grandes cantidades del ADN
insertado o de la molécula recombinante, suelen ser plásmidos, fagos, fagemidos,
cosmidos y cromosomas artificiales bacterianos o de levadura

Vector de expresión: son aquellos cuyo objetivo es producir un transcrito (ARN) o la

proteína producto de ese transcrito, los vectores de expresión pueden ser plásmidos o
fagos

6. Para que se aplican las técnicas de clonación y/o expresión y posterior inserción
de los vectores en células procariotas o eucariotas.

Los vectores de expresion en los sistemas de procarioticos comúnmente son vectores

plasmídicos obtenidos por manipulación genética y configurados cuidadosamente a fin
de asegurar los niveles optimos de síntesis de la proteína de interés, todos los
vectores de expresion tendrán una arquitectura esencial con elementos necesarios
para su replicación en el hospedero y para la transcripción y traducción del gen
clonado entre estos elementos se encuentra el origen de replicación, el promotor, el
sitio de unión al ribosoma,la secuencia codificadora, terminadores de la transcripción,
asi como marcadores de resistencia a antibióticos que facilitan la selección d ellos
recombinantes y garantizan la estabilidad del plasmido en el hostedero mediante el
cultivo en un medio  selectivo, adicionalmente como parte de la estructura del vector 
podrá encontrarse un gen recgulador que actue directa o indirectamente sobre el
promotor, modulando su actividad  y permitiendo condicionar los niveles de expresion
según los intereses de síntesis de la proteína en cuestión. De la misma forma el vector
de expresion podrá incorporar secuencias especificas de codones en el mismo marco
de lectura del gena expresar,que codifican pequeños péptidos o proteínas de fusión.

7. Observe el siguiente vector de expresión, explique cada uno de los elementos

genéticos observados y cuál es su función.

8. ¿Qué mecanismos son utilizados para verificar que una bacteria fue transformada
exitosamente con un plásmido con un gen clonado? 

9. ¿En qué consiste el screening de microrganismos transformados mediante la

técnica de la alfa complementación?

10. ¿Qué mecanismo de regulación génica se utiliza en los plásmidos y cual cree
usted que es la razón por la cual estos mecanismos son implementados?

11. Lea el articulo “Clonación, expresión y caracterización de una nueva esterasa

derivada de meta genomas de suelos agrícolas colombianos”. Explique cómo se
aplican las técnicas de biología molecular (extracción de ADN, PCR,
 secuenciación y bioinformática) estudiadas, en el proceso descrito por los autores
y como es el mecanismo general para la clonación y transformación de la bacteria.
Explique los elementos genéticos del plásmido utilizado (imagen). Finalmente
reflexivo como se pudieron emplear las ciencias ómicas para la identificación del
gen codificante para la esterasa obtenida.

12. ¿Qué aplicaciones agroindustriales tiene a su parecer de microrganismo con ADN

recombinante?