1.

TSI – AZÚCAR TRIPLE Y HIERRO

Principio: capacidad de fermentar glucosa, lactosa y sacarosa, producir gas y ácido sulfhídrico
(H2S).
Tiosulfato de sodio (Fe3+) y H2S – Sulfuro de Hidrogeno (negro)
Indicador: Rojo fenol (ácido-amarillo) (alcalino-rojo)
Color del medio: rojo
Inoculación: picar el fondo y extender sobre la superficie del medio.
Incubación: 18 a 24 horas a 37ºC
Resultados:
1.- Pico 2.- Pico ácido/fondo 3.- Pico 4.- La presencia de 5.- El
alcalino/fondo ácido ácido (pico alcalino/fondo burbujas, o ruptura ennegrecimiento del
(pico rojo/fondo amarillo/fondo alcalino (pico del medio de cultivo, medio indica que el
amarillo): el amarillo): el rojo/fondo rojo): el indica que el microorganismo
microorganismo
solamente fermenta microorganismo microorganismo es microorganismo produce ácido
la glucosa. fermenta glucosa, no fermentador de produce gas a partir sulfhídrico
K/A lactosa y/o sacarosa. azúcares. de Glucosa
A/A K/K

Fundamento: El Agar con Azúcar Triple y Hierro en sus ingredientes contiene un hidrato de
carbono extra: 0.1% de glucosa, 1 % de lactosa y 1% de sacarosa.La bioquímica es básicamente
igual que la del KIA; por eso se discute en detalle KIA.
Interpretación: Vire del indicador de pH rojo de fenol: pH Alcalino (Alk., Alc. o Al): color rojo
pH Ácido (Ac., Acd. o A): color amarillo
Se coloca primero el pH del pico, una diagonal (/) y después el pH del fondo:
Alk/Ac: Solo fermenta la glucosa Ac/Ac: Fermenta glucosa y lactosa y/ o sacarosa (TSI)
Alk/S/c: Utiliza solamente las peptonas, no es una bacteria fermentadora de hidratos de carbono.
Para fines prácticos se reporta después la presencia o ausencia de gas (CO2+H2):
Gas (+): ruptura de la columna de agar o su desplazamiento hacia la parte superior, así como la
formación de burbujas.
Gas (-): sin las modificaciones del medio antes mencionadas.
Y para la producción de H2S se reporta de la siguiente manera:
H2S (+): presencia de un precipitado de color negro
H2S (-): ausencia de un precipitado de color negro
Formas de Reportar los resultados (+) de gas (CO2, H2 u O2) y H2S: Ac/Ac/gas/ H2S
Ac/Ac/gas/ Ac/Ac/ H2S Alc/Ác/ H2S
 2. LIA (AGAR LISINA HIERRO)

Principio: capacidad del microorganismo para descarboxilar un aminoácido (LISINA) y formar

una amina (Cadaverina) produciendo alcalinidad del medio. Produce gas y ácido sulfhídrico (H2S).
Desaminación de la lisina esto produce un ácido alfa-ceto-carbónico
Tiosulfato de sodio (Fe3+) y H2S – Sulfuro de Hidrogeno (negro)
Indicador: purpura de bromocresol (ácido-amarillo) (alcalino-púrpura)
Color del medio: purpura
Inoculación: punción y estriado en pico de flauta
Incubación: 18 a 24 horas a 37ºC
Resultados:
1.- Decarboxilación de la 2.- Desaminación de la 3.- Producción de ácido
lisina: lisina: Pico rojizo/fondo sulfhídrico
+Positivo: Pico violeta/fondo amarillo. Esto sucede con Positivo: Ennegrecimiento del
violeta. cepas del género Proteus, medio
-Negativo: Pico violeta/fondo Providencia y alguna cepas de 4.- Producción de gas
amarillo Morganella spp.

Fundamento: Si la bacteria tiene la capacidad de producir la enzima lisina descaboxilasa, atacará

el aminoácido L-lisina, el cual al ser descarboxilado formará dióxido de carbono y la diamina
cadaverina; la cual es estable en condiciones anaerobias. Debido a que el pH puede controlarse se
agrega un indicador, el Púrpura de bromocresol. Como se mencionó anteriormente para que se
lleve a cabo la descarboxilación primero debe de haber una acidificación del medio, esto se
realiza primeramente con la metabolización de la glucosa dando como productos una mezcla de
ácidos; que acidifican el medio y provocando el vire de la púrpura de bromocresol a amarillo.
Después llevándose a cabo la descarboxilación del aminoácido dando la producción cadaverina, la
cual alcaliniza el medio y provoca el vire del indicador nuevamente a un color púrpura más
intenso.
También se hace la interpretación de la presencia de H 2S, La formación de ácido sulfhídrico se
observa por una coloración negra debida al sulfuro de hierro producido.
Hay bacterias que a fin de realizar una descarboxilación de la L-lisina realizan la desaminación de
la lisina a ácido alfa cetocarbónico, formando compuestos pardo- rojizos en el pico de flauta del
medio con la sal de hierro y por la acción del oxígeno.
Interpretación: Prueba de descarboxilación de lisina Lisina (+): primeramente debe de haber a las
6 hrs. un cambio del indicador de pH a amarillo y después un regreso a púrpura más intenso.
Lisina (-): no existe el regreso de pH ácido a alcalino, decir, el tubo permanece de color amarillo.
 Desaminación de lisina: formación de compuestos pardo-rojizos en el pico de flauta del medio.
Producción de H2S se reporta de la siguiente manera:
H2S (+): presencia de un precipitado de color negro.
H2S (-): ausencia de un precipitado de color negro.

3. Arginina

FUNDAMENTO: Se trata de detectar la hidrólisis de la arginina mediante la enzima que

transforma este aminoácido en citrulina, con liberación de amoniaco.
TECNICA: Se inocula un tubo de caldo-arginina y se incuba junto a un tubo testigo estéril durante
24 h (en ocasiones 2-7 días).
La arginina es el precursor del óxido nítrico, que nuestro propio cuerpo usa como vasodilatador, es
decir, como mecanismo para dilatar nuestros vasos sanguíneos para que pueda circular por ellos
más sangre y, con ello, tener un mayor rendimiento.
USO PRETENDIDO: Caldo usado para la distinción de bacterias capaces de descarboxilar la
Larginina.
MUESTRAS: Este medio es destinado a ser utilizado en la distinción de microorganismos, son
necesarios cultivos puros para esta prueba.
COMPOSICIÓN Y PRESENTACIÓN: L-arginina, púrpura de bromocresol, dextrosa, extracto de
levadura.
PRESENTACIÓN: Paquete con 10 tubos 13x100.
ALMACENAMIENTO: Este producto debe ser almacenado en temperatura de 2 a 80C, podiendo
ser transportado en temperatura ambiente por hasta 72 horas.
CUIDADOS Y PRECAUCIONES: 1. Producto para uso diagnóstico “in vitro”; 2. No utilizar
productos con el plazo de validez expirado o con el sello de calidad roto; 3. Antes de descartar el
material usado, autoclavar a 1210C por 15 minutos.
 LIA TSI

descarboxilasaLisina
PICO / BASE
BACTERIAS

BASE
PICO

GAS

H2S
Escherichia coli K/K (+) A A + -
Klebsiella
K/K + A A + -
pneumoniae
Klebsiella oxytoca K/K + A A + -
Enterobacter
K/K + A A + -
aerogenes
Citrobacter
K/A - A A + +
diversus
Proteus mirabilis R/A - K A + +
Serratia marcesens K/K + KoA A - -