Manual de Laboratorio Bioquimica Clinica Nutri-Fisio

MANUAL DE LABORATORIO DE
BIOQUIMICA CLINICA
(NUTRICIÓN – FISIOTERAPIA)
MARÍA DEL PILAR TRUJILLO

Bacterióloga y Laboratorista Clínico U. Javeriana
Maestría en Biología U. Javeriana
pilartrujillo@unipamplona.edu.co
CARMEN ROSA CONTRERAS MONTAÑEZ

Química Farmacéutica U. Nacional
Especialista Administración de Servicios de Salud U. de Antioquia
Magíster en Salud Pública U. de Antioquia
carmenrcontrerasm@unipamplona.edu.co
OMAIRA CAÑAS BERMUDEZ

Bacterióloga y Laboratorista Clínico UDES
Maestría en Bioquímica Universidad de Pamplona
omairacbermudez@unipamppona.edu.co
UNIVERSIDAD DE PAMPLONA
FACULTAD DE SALUD
DEPARTAMENTO DE BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO
PAMPLONA
DEPARTAMENTO NORTE DE SANTANDER
COLOMBIA
2020
1
INDICE DE CONTENIDO
Pág.
Introducción 3
Practica 1: Bioseguridad 5
Practica 2: Soluciones Buffer 8
Practica 3: Precipitación diferencial de Proteínas 12
Practica 4: Reacciones Enzimáticas 16
Practica 5: Factores que afectan las reacciones Enzimáticas 18
Practica 6: Fermentación Alcohólica 22
Practica 7: Soluciones y diluciones 26
Practica 8: Diluciones en serie 37
Practica 9: Diluciones no seriadas 41
Practica 10: Parámetros Bioquímicos de importancia clínica – casos clínicos 43
Practica 11: Uroanálisis 51
2
INTRODUCCION
En este manual se ha querido recopilar las principales pruebas y las de mayor utilidad
en el campo de la Bioquímica.
Los conocimientos aportados por la Bioquímica Clínica no sólo permiten entender mejor
la manera en la que están estructuradas las células y los tejidos, el funcionamiento del
organismo y cuáles son los fundamentos de la patogénesis existente, sino que
proporcionan las bases para el uso racional de las estrategias terapéuticas,
principalmente en el campo del descubrimiento de fármacos efectivos con un mínimo
de efectos indeseables.
Esperamos que estos ensayos básicos aporten al desarrollo de la Bioquímica Clínica
en nuestro país, pues se han escogido ensayos muy sencillos y de fácil realización en
cualquier laboratorio.
NORMAS DE SEGURIDAD
Normas sobre el manejo de reactivos químicos:
• Leer atentamente la etiqueta de identificación del reactivo.
• Verificar que se esté empleando la sustancia indicada.
• Verificar el grado de peligrosidad.
• Conocer cómo va a reaccionar (al diluir ácidos fuertes, añadir siempre el ácido
al agua, nunca lo contrario, y hacerlo lentamente).
• No pipetear con la boca. Usar dispensadores o pipetas automáticas.
• Medir solo las cantidades de reactivos necesarios para el trabajo experimental
y depositarlos en material de vidrio limpio y seco.
• No dejar los frascos destapados o abandonados sobre las mesas de trabajo.
Una vez utilizados taparlos y guardarlos o dejarlos en el lugar indicado.
• No coger los frascos de los reactivos por el cuello.
En general, los productos que no lleven señalización de seguridad no quiere decir que
no sean peligrosos, pregunte a su profesor antes de usarlos.
Normas de bioseguridad en el laboratorio:
• Se exige puntual asistencia.

• Usar gafas de protección.
• Usar guantes.
• Evitar el uso de joyas (anillos y colgantes).
• Atarse el pelo largo para evitar accidentes con la llama del mechero.
• Usar encendedores de chispa por fricción y no fósforos.
• No cambiar de lugar equipos, materiales y reactivos.
• No comer, beber, fumar, almacenar alimentos, aplicar cosméticos, ni recibir
visitas.
• Realizar todos los procedimientos técnicos en la forma indicada.
• Usar los gabinetes de seguridad biológica, como son las campanas de
extracción cuando se realizan procedimientos que pueden formar aerosoles
infecciosos.
• Descontaminar las superficies de los mesones de trabajo inmediatamente
después de derrames de material infeccioso.
3
• Desechar los productos químicos, desechos biológicos y otros desperdicios en
los lugares indicados.
• Secar bien las manos antes de iniciar el trabajo.
• No trabajar con equipos eléctricos defectuosos, o si se ha derramado un
reactivo sobre ellos.
• Lavar y secar el material antes y después de ser empleado.
• Leer la guía de trabajo correspondiente y seguir sus instrucciones
estrictamente.
• Llevar a la práctica: MANUAL DE TRABAJO, CUADERNO DE
LABORATORIO, EQUIPO DE BIOSEGURIDAD, UNA TOALLA O PAÑOS
DESECHABLES, PIPETEADOR, CINTA DE ENMASCARAR, O MARCADOR
DE VIDRIO, DETERGENTE LÍQUIDO Y DEMÁS MATERIALES QUE SE LES
SOLICITEN EN CADA PRÁCTICA. Los alumnos son responsables del material
de laboratorio que se les entregue.
• Si durante el período de prácticas, algún material es dañado por éste, se exigirá
la reposición del mismo para el siguiente período de práctica. En este sentido
el estudiante deberá llenar una planilla de Control de Material Roto.
• Una vez concluido el trabajo experimental, todo el material de vidrio utilizado
debe regresarse, limpio y seco a sus respectivos lugares.
• Usar los implementos de bioseguridad de acuerdo al riesgo de cada practica:
Niveles De Riesgo:
• Nivel 1: Riesgo Bajo (Bata de Laboratorio Manga Larga, Zapato Cerrado

Bajo, Pantalón Largo).
• Nivel 2: Riesgo Medio (Bata de Laboratorio, Guantes, Cofia, Tapabocas,

Zapato Cerrado Bajo, Pantalón Largo).
• Nivel 3: Riesgo Alto (Bata, Mascara Respiratorias, Guantes, Cofia, Gafas de

Seguridad, Zapato Cerrado Bajo, Pantalón Largo).
4
PRACTICAS:
PRACTICA Nº 1
1. BIOSEGURIDAD
2. Objetivos:
• Conocer las medidas preventivas para controlar los factores de riesgo procedentes
de los agentes biológicos, físicos o químicos.
• Aplicar el concepto de bioseguridad en el laboratorio.
• Identificar las señales y símbolos relacionados con la seguridad en el laboratorio.
• Reconocer las medidas generales de seguridad en el laboratorio.
3.Marco Teórico
La Bioseguridad, se define como el conjunto de medidas preventivas, destinadas a
mantener el control de factores de riesgo laborales procedentes de agentes biológicos,
físicos o químicos, logrando la prevención de impactos nocivos, asegurando que el
desarrollo o producto final de dichos procedimientos no atenten contra la salud y
seguridad de trabajadores de la salud, pacientes, visitantes y el medio ambiente.
Sistema de precauciones universales.
Este sistema fue establecido por el Centro de Control de Enfermedades (C.D.C) de

Atlanta, en 1987, a través de un grupo de expertos quienes desarrollaron guías para
prevenir la transmisión y control de la infección por VIH y otros patógenos provenientes
de la sangre hacia los trabajadores de la salud y sus pacientes. En el cual se recomendó
que todas las Instituciones de Salud adoptaran una política de control de la infección, que
denominaron “Precauciones Universales”. Se entienden como Precauciones Universales
al conjunto de técnicas y procedimientos destinados a proteger al personal que conforma
el equipo de salud de la posible infección con ciertos agentes, principalmente Virus de la
Inmunodeficiencia Humana, Virus de la Hepatitis B, Virus de la Hepatitis C, entre otros,
durante las actividades de atención a pacientes o durante el trabajo con sus fluidos o
tejidos corporales.
Las precauciones universales parten del siguiente principio:
“Todos los pacientes y sus fluidos corporales independientemente del diagnóstico

de ingreso o motivo por el cual haya entrado al hospital o clínica, deberán ser
considerados como potencialmente infectantes y se debe tomar las precauciones
necesarias para prevenir que ocurra transmisión.” Es así que el trabajador de la salud
debe asumir que cualquier paciente puede estar infectado por algún agente transmisible
por sangre y que, por tanto, debe protegerse con los medios adecuados.
Líquidos de precaución universal

Los líquidos que se consideran como potencialmente infectantes son:
· Sangre.
· Semen.
5
· Secreción vaginal.
· Leche materna.
· Líquido cefalorraquídeo.
· Líquido sinovial.
· Líquido pleural.
· Líquido amniótico.
· Líquido peritoneal.
· Líquido pericárdico.
· Cualquier otro líquido contaminado con sangre.
Las heces, orina, secreción nasal, esputo, vómito y saliva, no se consideran líquidos
potencialmente infectantes, excepto si están visiblemente contaminados con sangre.
Para que la transmisión del VIH pueda ser efectiva es necesario que el virus viable,
procedente de un individuo infectado, atraviese las barreras naturales, la piel o las
mucosas. Esto ocurre cuando las secreciones contaminadas con una cantidad suficiente
de partículas virales libres y de células infectadas, entran en contacto con los tejidos de
una persona a través de una solución de continuidad de la piel (cómo úlceras, dermatitis,
escoriaciones y traumatismos con elementos cortopunzantes) o contacto directo con las
mucosas.
El Virus de la Hepatitis B posee una mayor capacidad de infección que el VIH; se estima
que un contacto con el virus a través de los mecanismos de transmisión ocupacional,
pinchazos con agujas contaminadas con sangre de pacientes portadores, desarrollan la
infección hasta un 30 - 40% de los individuos expuestos, mientras que con el VIH es
menor del 1% el riesgo ocupacional. Sin embargo, el riesgo de adquirir accidentalmente
y desarrollar la enfermedad con el VIH y el VHB existe.
Bioseguridad en el laboratorio
La bioseguridad en el laboratorio se refiere a un conjunto de protocolos de trabajo que

suministra el conocimiento del riesgo, las normas de prevención y las indicaciones de
actuación para cuando ocurra un accidente. La seguridad incluye dos factores
determinantes: el factor objetivo relativo al riesgo y el factor humano, quien es el que lo
maneja y toma las respectivas precauciones.
Tipos de daños o lesiones

Los daños que se pueden presentar incluyen, los de efecto inmediato, por ejemplo, la
quemadura por un ácido y los indirectos, es decir, que no se manifiestan en el momento;
por ejemplo, la exposición a una sustancia tóxica, la contaminación por mal manejo de
material biológico.
Señalización, signos y recomendaciones

La señalización normalizada es necesaria para la seguridad, pues indica de manera
inmediata los posibles peligros de carácter general. Existen múltiples señales
reconocidas internacionalmente que informan aspectos diferentes:
• Riesgos para la salud-color azul.
• Inflamable-color rojo.
• Grado de inestabilidad de compuestos-color amarillo.
Algunos símbolos designan peligros:

• Atención a sustancias explosivas.
• Materias que aumentan la combustibilidad.
6
• Atención a sustancias inflamables.
• Veneno.
• Sustancias agresivas.
• Perjudicial para la salud.
• Atención sustancias radiactivas.
Precauciones de importancia
Llevar guantes puestos.
Uso de máscaras antigas.
Señales de salvamento
✓ Se deben colocar en las salidas de emergencia.
✓ Productos que no llevan señalización de seguridad, no quiere decir que no sean
peligrosos.
✓ Normas de seguridad para el personal de laboratorio.
✓ La seguridad como prevención viene definida por una serie de barreras:
Primarias: Localizadas en torno al origen del riesgo. Ejemplo, hacer la práctica

adecuadamente.
Secundarias: Localizadas en el círculo del practicante. Ejemplo, la relacionada con la

higiene personal (pelo recogido para evitar que se queme con los mecheros, o que
provoque la caída de tubos de ensayo y reactivos).
Terciarias: Localizadas alrededor del laboratorio. Ejemplo, material tóxico del

laboratorio.
4.Materiales
No aplica.
5. Reactivos
No aplica.
6.Procedimiento
1. Organice grupos de trabajo.
2. Lea detenidamente las normas de seguridad escritas en la guía e información anexa
y socialice las normas.
3. Lea el Manual de Bioseguridad de Laboratorios de la Universidad de Pamplona y
socialícelo.
Cuestionario
✓ Dibuje los símbolos que indican peligros, señales de prohibición y precauciones
importantes.
✓ Consulte cuál es la utilidad de las claves R-S.
✓ Consulte los riesgos relativos al manejo de los siguientes equipos:
1. Centrífugas.
2. Espectrofotómetros.
3. Baños serológicos.
4. Campanas extractoras.
5. Balanzas.
7. Nivel de Riesgo:
7
• Nivel 1: Riesgo Bajo (Bata de Laboratorio Manga Larga, Zapato Cerrado Bajo,
Pantalón Largo).
Manejo de residuos:
• No aplica
8. Bibliografías
MINISTERIO DE SALUD. Conductas Básicas En Bioseguridad: Manejo Integral. Bogotá
D.C. 1997. P. 8-9.
Disponible en Internet:
http://www.ecomed.org.ar/notas/articulos/varios/down/articulos_bioseguridad.pdf
Disponible en Internet: http://www.qo.fcen.uba.ar/normas.htm.
PRACTICA Nº 2
1. SOLUCIONES BUFFER
2.Objetivos
• Determinar la capacidad amortiguadora de una solución buffer.
• Analizar la importancia de las soluciones buffer en diversos sistemas biológicos
3.Marco Teórico
Sistemas de Tampón - Soluciones Buffer – Sistemas Amortiguadores
Una solución amortiguadora consiste en una mezcla de un ácido débil y su base

conjugada. Las soluciones amortiguadoras tienden a resistir cambios de pH cuando se
agregan cantidades moderadas de ácidos o bases fuertes.
Las soluciones amortiguadoras pueden mantener el pH en un valor relativamente

constante gracias a la presencia de cantidades considerables tanto del ácido como de su
base conjugada. Esta condición se satisface a valores de pH cercanos al pKa del ácido.
Si se añade OH-, estará presente en solución una cantidad apreciable de la forma ácida
del amortiguador que puede reaccionar con la base agregada. Si se añade H+ también
habrá una cantidad apreciable de la forma básica del amortiguador que puede reaccionar
con el ácido añadido.
Tenemos el ejemplo del ácido fosfórico, un ácido débil (H2PO4-) que al disociarse forma
su base conjugada (HPO4-) el pH al cual este ácido comienza a disociarse es de 7.2, es
decir este es su pKa, por lo tanto, las dos formas ácido débil como base conjugada se
mantienen a concentraciones adecuadas para amortiguar soluciones a este pH. A valores
8
de pH por debajo del pKa predomina la forma ácida, y a valores de pH por arriba del pKa
predomina la forma básica.
La condición de que un amortiguador contenga cantidades apreciables tanto de ácido

débil como de base conjugada aplica tanto a la proporción de las dos formas como a la
cantidad absoluta de cada una presente en la solución. Un amortiguador que contienen
cantidades más altas tanto de ácido como de base tiene una mayor capacidad
amortiguadora.
Elaboración de Amortiguadores:
Cuando estudiamos los amortiguadores en teoría, es común usar la ecuación de

Henderson- Hasselbalch y efectuar muchos cálculos de proporciones base conjugada:
ácido. En la práctica, preparar un amortiguador es mucho más sencillo. Para tener un
amortiguador, lo único que se necesita es incluir cantidades razonables de las dos formas
del amortiguador en la solución. Esto puede lograrse añadiendo cantidades
predeterminadas de la forma básica conjugada(A-) a la forma ácida (HA), o bien,
podríamos partir de una y crear la otra. Para hacer un amortiguador podríamos partir de
la forma HA y añadir NAOH hasta tener el pH correcto, lo que se determina con un
medidor de pH también podríamos partir de la forma A- y añadir HCl hasta llegar al pH
correcto. Dependiendo de la relación entre el pH deseado y el pKa del amortiguador,
podría ser más conveniente partir de una forma o de la otra. Por ejemplo, si vamos a
hacer un amortiguador de ácido acético/acetato a pH 5.7, sería más lógico partir de la
forma A- y añadir un poco HCl para bajar el pH a 5.7, que a partir de HA y tener que
añadir mucho más NaOH para subirle pH hasta rebasar el Pka.
Desde otro punto de vista supóngase que un bioquímico desea estudiar una reacción de
pH 4.0, puede tratarse de una reacción que genere o consuma protones. Para evitar que
el pH se modifique demasiado durante la reacción, el investigador debe utilizar una
solución amortiguadora consiste en una mezcla determinada de un ácido débil y su base
conjugada. En este ejemplo, una selección sería utilizar un amortiguador ácido
fórmico/formiato, puesto que su el pKa del ácido fórmico es de 3.75 está cerca del valor
de pH requerido. Una mezcla de ácido acético/acetato no sería tan adecuada porque el
pKa del ácido acético que es de 4.6.
La proporción de ácido fórmico/formiato necesario para mantener el ph de 4.0 se puede

calcular a partir de la ecuación de Henderson- Hasselbalch así:
Ph= pka+log base conjugada/ácido débil.
4.0=3.75 +log  HCOO / HCOOH .
Para calcular la proporción base/ácido, restamos 3.75 de 4.0, y tomamos el antilogaritmo

de ambos lados de la ecuación (1):
 HCOO / HCOOH = 100.25= 1.78
Este amortiguador puede obtenerse, por ejemplo, mezclando volúmenes iguales de ácido
fórmico 0.1 M y formiato 0.178 M. También se puede prepararse una solución
9
amortiguadora titulando una solución de 0.1 M de ácido fórmico hasta pH 4.0 con
hidróxido de sodio.
Selección de amortiguadores
Una buena parte de la bioquímica se estudia efectuando reacciones enzimáticas en un

tubo de ensayo (in Vitro) o, sea en vidrio. Tales reacciones suelen amortiguarse para
mantener un pH constante pues las enzimas al ser proteínas con grupos ionizables
necesitan mantenerlos en determinadas formas (ionizados o no) para su correcta y eficaz
función. Debido a que esta ionización depende del pH celular, es importante que existan
compuestos que ayuden a amortiguarlo. Así mismo, prácticamente todos los métodos
para aislar enzimas y otras proteínas e incluso para cultivar tejidos utilizan soluciones
amortiguadoras.
Los criterios siguientes se aplican por lo común al seleccionar un amortiguador para una
reacción bioquímica:
1. pka apropiado para el amortiguador
2. Ninguna interferencia con la reacción o la detección del ensayo
3. Concentración iónica apropiada del amortiguador
4. Aspectos de solubilidad
5. Naturaleza no biológica del amortiguador.
4.Materiales
• 1 Vidrio de reloj.
• 1 Espátula.
• 4 vasos de precipitado de 100 ml.
• 1 pipeta graduada de 25ml.
• 1 pipeta graduada de 1ml.
• 1 Balón aforado de 100 ml.
• 1 frasco lavador.
• 1 churrusco.
Equipos
• Balanza.
• Potenciómetro.
5. Reactivos
• K2HPO4.
• KH2PO4.
• Na2HPO4.
• NaH2PO4.
• Agua destilada.
• HCl 1 M.
• NaOH 1M.
6. Procedimiento
A. Cálculos para preparar la siguiente solución amortiguadora

Prepare 100ml de una solución amortiguadora de:
10
• Fosfatos (Na2HPO4 NaH2PO4) 0.25 M a pH 7.30 Tenga en cuenta que el pKa de este
ácido es de 7.21.
• Fosfatos (k2HPO4 kH2PO) 0.25 M a pH 7.30 Tenga en cuenta que el pKa de este
ácido es de 6.80.
Ecuación de Henderson Hasselbalch
pH = pKa + log A-/AH
B. Medición de pH de las soluciones sin ácido y sin base

En dos vasos por separado mida 50 ml de la solución de fosfatos que usted preparó y en
otros dos vasos mida 50 ml de agua desionizada en cada uno. Luego mida en el
potenciómetro el pH de cada una de las soluciones.
C. Medición de pH de las soluciones con ácido

Con una pipeta graduada de 1 ml mida 0.5 ml de HCl 1M agregue en cada uno de los
vasos (agua y solución amortiguadora) esta cantidad de ácido. Mida el pH de cada
solución. Anote los resultados.
D. Medición de pH de las soluciones con base

Con una pipeta graduada de 1 ml mida 0.5 ml de NaOH 1M agregue en cada uno de los
vasos (agua y solución amortiguadora) esta cantidad de base. Mida el pH de cada
solución. Anote los resultados.
E. Análisis de Resultados
Compare los resultados de las mediciones y explique brevemente.
Preguntas de consulta
1. Defina solución amortiguadora y sus componentes
2. ¿Qué se entiende por ácido y su base conjugada?
3. Consulte la fórmula química o molecular del sistema amortiguador ácido carbónico
en la célula.
4. Identifique: ¿cuál es el ácido y la base conjugada? Y ¿por qué?
5. Escriba la ecuación de equilibrio para el sistema buffer anterior.
6. ¿Cuál es el pKa de este sistema buffer? Defina que es Pka y qué importancia tiene.
7. Explique por qué es importante para la célula la existencia de sistemas
amortiguadores.
8. Cite ejemplos en donde se ponga en evidencia la importancia biológica de las
soluciones amortiguadoras a nivel celular.
9. ¿Cómo participan el aparato respiratorio y el riñón en el control del pH sanguíneo?
10. Consulte cuales sistemas amortiguadores comúnmente utilizados en el laboratorio de
bioquímica
7. Nivel de Riesgo:
• Nivel 2: Riesgo Medio (Bata de Laboratorio, Guantes, Cofia, Tapabocas, Zapato

Cerrado Bajo, Pantalón Largo).
Manejo de residuos:
• Línea 8
11
8. Bibliografías
Campbell, M. K, Farell, S. O. Bioquímica.4ª Ed .México. Thomson. 2004. P. -53-55.
Mathews, et al. Bioquímica. 3a. Editorial Mac Graw Hill. 2000. P. 50-53.
PRACTICA Nº 3
1. PRECIPITACIÓN DIFERENCIAL DE PROTEÍNAS
2.Objetivos
• Reconocer la importancia de la fuerza iónica como método de separación de
proteínas.
• Separar proteínas de una mezcla mediante precipitación diferencial con sulfato de
amonio.
• Observar las proteínas totales de la mezcla y de las fracciones mediante método
cualitativo colorimétrico de Biuret.
3.Marco Teórico
Las proteínas biológicamente activas son polímeros formados por aminoácidos que se
eslabonan mediante enlaces peptídicos covalentes.
Proteínas plasmáticas
La sangre está constituida por formas celulares en suspensión (eritrocitos, leucocitos y

plaquetas) en un medio líquido llamado plasma. El plasma se obtiene cuando,
inmediatamente después de extraer la sangre, se le agregan anticoagulantes como
oxalato, citrato, EDTA o heparina y se centrifuga. Si se recoge sangre sin anticoagulante
y se deja que ésta coagule, el líquido que se separa se llama suero. El suero carece de
células y de factores de la coagulación incluyendo la proteína fibrinógeno, pues ésta ha
sido transformada en fibrina insoluble en el proceso de la coagulación. El fibrinógeno
constituye sólo de 3 a 6% del total de las proteínas en plasma.
El agua constituye 92 a 93% del plasma o suero y en ella encontramos electrolitos,
metabolitos, nutrientes, hormonas y proteínas en una proporción de 7 a 8%; de estos
solutos presentes, las proteínas son las que están en máxima proporción,
aproximadamente 6 a 8 g/dl de suero y este valor es 0.2 a 0.4 g/dl mayor en plasma por
la presencia de fibrinógeno.
Las proteínas plasmáticas son un grupo de más de 100 moléculas distintas con
características y funciones muy diversas, aunque para fines prácticos el término "proteína
plasmática" se usa para todas aquellas proteínas cuya concentración en el plasma sea
mayor a 10 mg/dl y que cumplan con alguna función específica dentro de él.
Aproximadamente son 20 las proteínas que cumplen con ambas definiciones. Todas
estas proteínas, a excepción del fibrinógeno, se encuentran tanto en plasma como en
suero.
Precipitación con fuerza iónica
12
Dado que una célula contiene miles de proteínas distintas la tares de separarlas y
determinar la estructura de una sola proteína es en extremo difícil pero no imposible. 1
Para separar las moléculas el bioquímico aprovecha las diferencias que existen entre
ellas. Tales diferencias pueden ser solubilidad, tamaño, masa, carga eléctrica o afinidad
por otras moléculas.
Para pasar desde los tejidos a un material purificado, solemos utilizar diversas técnicas
distintas de modo secuencial. Una de las formas más antigua, más simple u aun bastante
eficaz para llevar a cabo la separación de una mezcla de proteínas es utilizar la
solubilidad diferente en disoluciones salinas concentradas.
Las proteínas se hacen insolubles en presencia de concentraciones elevadas de sales y
esta solubilidad varía mucho entre una proteína y otra y en disoluciones concentradas
varía rápidamente con la fuerza iónica.
Unas proteínas por ser un anfolito tienen muchos grupos ionizables ácidos y básicos; las
moléculas pueden tener una carga positiva, cero o negativa, dependiendo del pH de la
solución.
Por otro lado, al ser un polieléctrolito tienen múltiples grupos ionizables con una sola
clase de carga. Es decir, al comportarse como un anfólito o polieléctrolito depende del
pH y de la presencia de pequeños iones, que apantallan los macro iones de las otras
cargas.
Las proteínas se mantienen disueltas gracias a las interacciones no covalentes (puentes

de hidrógeno) con el agua. Al agregar a una solución de proteínas una sal esta se disocia
formando iones, estos iones hacen una fuerza que puede ser débil o fuerte. Cuando la
fuerza iónica es débil, la atmósfera contra iónica es muy extensa o grande, (en este caso
el de las proteínas) y el apantallamiento de la sal es ineficaz, la fuerza iónica aumenta, la
atmósfera contra iónica se contrae y se concentra alrededor del macroión, y las
interacciones de los grupos negativos y positivos se apantallan con eficacia.
El aumento de la fuerza iónica hasta un determinado punto aumenta la solubilidad de las

proteínas. Este efecto de disolver las proteínas incrementando la concentración salina se
denomina “saltin in”. Si este nivel se sobrepasa causa el efecto opuesto, en soluciones
salinas muy concentradas, gran parte del agua que normalmente solvata a la proteína y
ayuda a solubilizarlas está enlazada a los iones de la sal, impidiendo una hidratación
suficiente de la proteína y precipitan. Este efecto se denomina “saltin out”.2. Estas
proteínas se separan posteriormente por centrifugación.
El sulfato de amonio se emplea con frecuencia para estas precipitaciones selectivas o
diferenciales debido a que pueden conseguirse fuerzas iónicas bastantes altas sin dañar
las proteínas
A partir de una mezcla de proteínas, en esta práctica se harán precipitaciones al 40% y

al 70% de saturación con sulfato de amonio y se cuantificará la concentración de
proteínas de la mezcla y de cada uno de los sobrenadantes obtenidos después de
efectuada la precipitación.
El volumen de la solución saturada de sulfato de amonio necesario para una determinada

saturación se calcula mediante la siguiente ecuación:
Vs = Vp (S2-S1)
13
(1-S2)
En donde:
Vs = volumen de la solución saturada de sulfato de amonio
Vp= Volumen de la mezcla de proteínas
S1= Saturación inicial expresada como fracción
S2 = Saturación final expresada como fracción.
Identificación de proteínas mediante la reacción con el reactivo de Biuret
La presencia de proteínas en una mezcla se puede determinar mediante la reacción del

Biuret. El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solución acuosa alcalina (gracias a la
presencia de NaOH o KOH). La reacción se basa en la formación de un compuesto de
color violeta, debido a la formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu2+
y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces
peptídicos.
O C C O
HN NH
R CH HC R
Cu2+
O C C O
HN NH
R CH HC R
La reacción debe su nombre al biuret, una molécula formada a partir de dos de urea (H2N-
CO-NH-CO-NH2), que es la más sencilla que da positiva esta reacción, común a todos
los compuestos que tengan dos o más enlaces peptídicos consecutivos en sus
moléculas.
4. Materiales
• 1 vaso de precipitados de 250 ml.
• 2 tubos de centrífuga plásticos.
• 8 tubos de ensayo.
• 3 pipetas de 5 ml.
• 3 pipetas de 1 ml.
Equipos
• Centrífuga.
5. Reactivos
• Solución de proteínas plasmáticas.
• Sulfato de amonio saturado al 50%.
14
• Reactivo de Biuret.
• Hielo.
6. Procedimiento
A. Cálculos del volumen de la solución saturante:

Aplique la ecuación para el cálculo del volumen de la sustancia saturante, calcule el
volumen del sulfato de amonio necesario para precipitar el 40% y el 70% de proteínas.
B. Precipitación al 40 %:
Coloque en un tubo de ensayo 3 ml de solución de proteínas de saturación inicial S1 (0%)

en el vaso de precipitado grande y que contenga hielo. Agregue lentamente la solución
de sulfato de amonio necesaria para precipitar proteínas al 40% de saturación (S2). Deje
en reposos durante 10 minutos y centrifugue por 10 minutos a 3.500 rpm. Si el
sobrenadante no es claro, repita el procedimiento. Obtenga de éste 1 ml y deposítelo en
un tubo marcado como 40% y añádale 2 ml de reactivo de Biuret. (Márquelo como 40%).
En otro tubo coloque 1 ml de la solución de proteínas al 100% y añádale 2ml de reactivo
de Biuret. (Márquelo como 100%).
C. Precipitación al 70 %:
Obtenga del sobrenadante anterior 1 ml en un tubo y márquelo como 40 %, mida el

volumen restante, deposítelo en un tubo de centrífuga mantenido en hielo y agregue
lentamente el volumen de sulfato de amonio necesario para precipitar proteínas al 70%
de saturación. Deje en reposo durante 10 minutos y centrifugue por 10 minutos a 3.500
rpm. Si el sobrenadante no es claro no siga el procedimiento con este. Separe el
sobrenadante deposítelo en otro tubo y añádale 2ml de reactivo de Biuret y márquelo
como 70%.
D. Interpretación de resultados
¿Qué porcentaje de proteína se encuentra en el sobrenadante de cada tubo?
¿A que porcentaje de precipitación corresponde cada tubo?
¿Represente con un dibujo como la fuerza iónica esta afectando la solubilidad de las
proteínas en cada tubo?
Cuestionario
1. ¿Cómo se clasifican las proteínas según su solubilidad?
2. ¿Qué se entiende por fuerza iónica? Indique con un dibujo.
3. ¿Qué se entiende por electroforesis?
4. Consulte como se separan electroforéticamente las proteínas del plasma sanguíneo.
Realice un dibujo.
5. Que importancia tiene este examen a nivel clínico.
7. Nivel de Riesgo:

Cerrado Bajo, Pantalón Largo)
15
Manejo de residuos:
• Línea 8
8.Bibliografías
Campbell, M. K, Farell, S. O. Bioquímica.4ª Ed .México. Thomson. 2004. P. 116 -119.
Mathews, et al. Bioquímica. 3a. Editorial Mac Graw Hill. 2.000. P. 54-57; 166-167.
PRACTICA Nº 4
1. REACCIONES ENZIMÁTICAS
2.Objetivos
• Reconocer a las enzimas como proteínas que aceleran y controlan las reacciones
químicas en los seres vivos.
• Identificar la presencia de diversas clases de enzimas en tejidos animales y vegetales.
• Aplicar los componentes teóricos en las reacciones enzimáticas observadas.
• Discutir la presencia de inhibidores enzimáticos que pueden preservar algunos
alimentos.
3.Marco Teórico
Un automóvil obtiene su energía de la oxidación del hidrocarburo gasolina a dióxido de
carbono y agua en una explosión controlada dentro de un motor en el que los gases
pueden alcanzar temperaturas de 2200 ºC. En contraste, la célula viva obtiene energía
oxidando el carbohidrato glucosa a dióxido de carbono y agua a una temperatura (en el
ser humano) de 37ºC
El ingrediente secreto en los organismos vivos es la catálisis, un proceso llevado a cabo

por enzimas proteínicas. Una reacción que requiere muchas horas para completarse no
puede ser útil, desde el punto de vista metabólico, para una bacteria que ha de
reproducirse en 20 minutos, o para una célula nerviosa humana que debe responder a
un estímulo de forma instantánea.
De hecho la vida aprovecha hábilmente el hecho de que la mayoría de las reacciones

deban estar catalizadas.
Un catalizador es una sustancia que aumenta la rapidez o la velocidad de la reacción
química, sin verse alterada ella misma en el proceso global. La sustancia sobre la que
actúa una enzima se denomina sustrato de esa enzima. Y lo que se obtiene es
denominado producto de la reacción.
Podemos apreciar el poder de la catálisis enzimática con un ejemplo: la descomposición
del peroxido de hidrógeno en agua y oxígeno:
2H2O2 a 2H2O +O2
Esta reacción, auque muy favorecida termodinámicamente, es muy lenta, a menos que
sea catalizada. Se puede comprar una botella de una solución de H2O2 (agua oxigenada)
y guardarla en un armario durante muchos meses antes de que se degrade. Sin embargo,
si añadiera un trocito de ión férrico, observaría que la velocidad de la reacción aumenta
16
unas 1000 veces. La proteína hemoglobina que contienen hierro, es aun más eficaz para
incrementar la velocidad de esta reacción. Si uno aplica la solución de peróxido de
hidrógeno a un corte de un dedo, se observa un burbujeo inmediato del O2 liberado: la
reacción se está produciendo ahora aproximadamente un millón de veces más
rápidamente que el proceso sin catalizar. Pero pueden alcanzarse velocidades aún. La
catalasa una enzima presente en muchas células, aumenta la velocidad de
descomposición del H2O2 sin catalizar aproximadamente 1000 millones de veces.
Algunas reacciones celulares producen peróxido de hidrógeno que es un oxidante
peligroso, por lo que la catalasa se ha perfeccionado para defenderse de él.
Este ejemplo muestra que la velocidad de una reacción favorable depende en gran
medida, de que exista o no un catalizador y de la naturaleza del mismo.
4. Materiales
Papa.
Cuchillo.
Manzana.
Mortero.
Cuchara o espátula.
Portaobjetos.
Pipeta Pasteur.
1 Vaso de precipitados 50 ml.
5. Reactivos
100 ml de peróxido de hidrógeno o “agua oxigenada” comercial.
1 Pastilla de vitamina C.
6.Procedimiento
A. Presencia de polifenol oxidasa de manzana
1. Moler una pastilla de vitamina C hasta que quede un polvo fino - Cortar una manzana
por la mitad.
2. Colocar en una mitad de la manzana el polvo de la vitamina C, procurando que quede
bien esparcido.
3. Dejar ambas mitades de manzana a temperatura ambiente durante 60 minutos y
observar los cambios de coloración.
B. Presencia de catalasa de papa

1. Cortar una rebanada de papa y colocarla sobre un portaobjetos.
2. Agregar 3 gotas de agua oxigenada sobre la rebanada de papa.
3. Ver la actividad de la catalasa por el burbujeo de oxígeno que se desprende.
4. Observar el tiempo en el cual se llevan a cabo la reacción.
C. Interpretación de resultados
Después de efectuar todos los experimentos en cada caso:
1. ¿Cómo evidencia que se produjo una reacción enzimática?
2. ¿A qué se debe la presencia del color marrón en la manzana que no tiene vitamina
C?
3. ¿Qué papel desempeña la vitamina C sobre la manzana expuesta al oxígeno?
4. ¿A qué se debe la producción de burbujas en el experimento de la catalasa?
5. ¿Y cuando dejan de formarse?
6. ¿Qué es lo que estamos midiendo en ese caso?
7. ¿Cómo comprobar que el gas desprendido en el experimento con catalasa es
17
oxígeno?
Cuestionario
1. Diseñe un experimento para averiguar cómo varía la velocidad de la reacción. Y así
poder determinar qué tan veloz y afín es la enzima por su sustrato en el caso de los
experimentos realizados en clase. Realice un esquema.
2. ¿Cómo calculan la velocidad total de cada una de las reacciones realizadas en el
laboratorio?
3. ¿Cuál es el efecto de agregar diferentes cantidades de sustrato sobre la velocidad de
esta reacción? Justifiquen sus conclusiones.
7. Nivel de Riesgo:

Manejo de residuos:
• Línea 19
8. Bibliografías
Campbell, M. K, Farell, S. O. Bioquímica.4ª Ed .México. Thomson. 2004. P. -134-135
Mathews, et al. Bioquímica. 3a. Editorial Mac Graw Hill. 2.000. P. 404-405
PRACTICA Nº 5
1. FACTORES QUE AFECTAN LAS REACCIONES ENZIMÁTICAS
2.Objetivos
• Reconocer que las reacciones enzimáticas dependen de factores como: temperatura,
pH y la presencia de sales.
• Comprobar que el pH es un factor que altera o modifica la actividad enzimática.
• Reconocer que las enzimas son catalizadores orgánicos que sólo se encuentran en
los seres vivos.
3.Marco Teórico
Las enzimas al ser proteínas contienen grupos ionizables, cuyo comportamiento depende
del pH y de las moléculas con carga que se encuentran a su alrededor. Es bien sabido
que la función biológica de las proteínas está directamente relacionada con su estructura
y si tenemos en cuenta la influencia del medio externo sobre las proteínas es de pensar
que es necesario mantenerlas en un ambiente adecuado para que su estructura no se
modifique y por lo tanto pueden cumplir biológicamente su función.
Otra variable que influye también sobre la estructura de las proteínas, es la temperatura.
Esta junto con el pH influyen como se describe a continuación:
Influencia de la temperatura:
18
La temperatura puede causar un incremento de la velocidad de la reacción o el efecto
contrario así:
• Incremento de la velocidad con la temperatura: En general, la velocidad de la

reacción se incrementa con la temperatura hasta que un punto máximo es
alcanzado. Este incremento se debe a que aumenta el número de moléculas ricas
en energía que pueden pasar la barrera energética de estado de transición, para
formar a los productos.
• Decremento de la velocidad con la temperatura: la elevación excesiva de la
temperatura del medio que contiene a las enzimas, resulta en un decremento de
la velocidad como resultado de la desnaturalización, es decir, la pérdida de la
estructura tridimensional de las enzimas.3 En este momento se rompen enlaces
de tipo no covalente como los puentes de hidrógeno que estabilizan las
estructuras secundarias e incluso terciarias.
La mayor parte de las enzimas presentan su actividad máxima en el intervalo de

30 a 40 °C y por encima de 45°C comienzan a desnaturalizarse. La
desnaturalización de una proteína se ha definido como:
“Un cambio de importancia en la estructura original, sin rotura de ninguno de los enlaces
químicos primarios que unen entre sí a los aminoácidos “. Es decir, solo hay rompimiento
de los enlaces no covalente tipo puentes de hidrógeno.
El término inactivación de una enzima se refiere a la pérdida de la actividad. Las
temperaturas de refrigeración, congelación, escaldado, blanqueado también inactivan a
las enzimas.
Influencia del pH:
El sitio activo de la enzima puede contener aminoácidos ionizables, la concentración de

H+ afecta la velocidad de la reacción en muchas formas. Primero el proceso catalítico
usualmente requiere que la enzima y el sustrato tengan grupos químicos en una forma
iónica particular para poder interactuar. Por ejemplo la actividad catalítica puede
necesitar a un grupo amino, por ejemplo de una lisina en estado protonado (-NH3+) o no
(-NH2+), el pH modifica este estado y por tanto a la velocidad de la reacción.4.Esto
puede causar efectos como:
• Desnaturalización de la enzima: pH extremos pueden ocasionar la

desnaturalización de las enzimas, debido a que la estructura con estos cambios
es posible modificar las interacciones iónicas que intervienen en la estabilidad de
la enzima en su estado nativo.
• El pH óptimo varía para las diferentes enzimas: El pH al cual las enzimas

adquieren su máxima actividad al que se le denomina “pH óptimo”. es diferente
para cada una de ellas y depende de la secuencia de aminoácidos que las
conforman, por supuesto, también está relacionado con el microambiente celular
en el cual desarrollan su catálisis. La mayor parte de las enzimas presentan su
actividad máxima a pH entre (4,5 - 8). Pero existen enzimas como Por ejemplo la
19
pepsina que es una enzima digestiva que actúa en el estómago, posee un pH
óptimo de alrededor de 2 unidades, por el contrario, otras enzimas que actúan a
pH neutro, o la arginasa cuyo pH es de 10 otras se desnaturalizan a pH alcalino
o ácido.
Al comprobar experimentalmente la influencia del pH y la temperatura en la velocidad de

las reacciones enzimáticas se obtienen curvas que indican que los enzimas presentan un
pH y una temperatura óptima de actividad. (Ver figura abajo).
• En general el pH puede afectar:

• Al centro activo que puede contener aminoácidos con grupos ionizados que
pueden variar con el pH.
• La ionización de aminoácidos que no están en el centro activo puede provocar
modificaciones en la conformación de la enzima.
• El sustrato puede verse afectado por las variaciones del pH.
4.Materiales
Portaobjetos.
1 papa.
1 hoja de planta.
1 corazón de pollo.
Polvo de levadura.
1 champiñón.
Pinzas.
Vasos desechables.
Limón.
Cuchara.
Mechero.
Malla.
Trípode.
Equipos
Baño serológico.
5. Reactivos
100 ml de peróxido de hidrógeno.
HCl concentrado.
Papel de pH.
Azúcar .
Sal.
Limadura de hierro.
Hielo.
20
6.Procedimiento
A. Factores que afectan la catalasa
En una cuadrícula organiza dos portaobjetos con el material indicado, como se muestra
en el dibujo:
Azúca Sa Pap Hoj Corazó Levadur Champiñó Limadur

r l a a n a n a
SR-sin reacción L-lento R-rápido MR-muy rápido
Un portaobjetos es para evidenciar la actividad enzimática sin agregarle HCl; y el otro

para evidenciar la reacción enzimática agregando HCl:
1. Mida el pH de cada material sin agregar HCl con el papel indicador de pH.
2. Adicione una gota de peróxido de hidrógeno a cada material. Observe la presencia
de burbujas.
3. Agregue una gotica de HCl y con el papel indicador vuelva a medir el pH agregue una
gótica de peróxido de hidrógeno.
4. Observe y anote lo que ocurrió en cada uno de los portaobjetos, antes y después de
agregar el peróxido de hidrógeno, marca la reacción a “ojo” de acuerdo al pH=5 y
pH=1.
B. Factores que afectan de las enzimas del metabolismo de la levadura

1. Marcar los vasos con los siguientes títulos: control, caliente, frío, ácido y sal.
2. Colocar en 5 vasos desechables transparentes una cantidad igual del polvo de
levadura, azúcar y 50 ml de agua tibia.
3. El vaso denominado control debe contener solo la mezcla anterior.
4. Mida el tiempo desde que le agregue el azúcar a la levadura y la aparición de burbujas
en el vaso control.
5. Al vaso marcado como frió colocarlo sobre el hielo. Compare con el vaso control.
6. Al vaso marcado como caliente colocarlo sobre el baño serológico. Compare con el
vaso control.
7. Al vaso marcado como ácido añadirle jugo de limón. Compare con el vaso control.
8. Al vaso marcado como sal añadirle una cucharada de sal.
9. Dejar todos los vasos durante 60 minutos y al final observar la actividad de las
enzimas por la producción de bióxido de carbono que se ve en la formación de
espuma.
C. Interpretación de los resultados

Con base en los siguientes parámetros.
SR-sin reacción L-lento R-rápido MR-muy rápido
Cuestionario
1. ¿Cómo la temperatura el pH y las sales afectan la estructura química de las enzimas?
2. ¿Cómo se verán afectados los parámetros cinéticos de las enzimas?
3. ¿Podrían esos factores ser inhibidores enzimáticos?
4. ¿Cuál de los materiales de la práctica se clasifican como vivos y no vivos? Justifique
su respuesta
21
5. Identifique la o las enzimas con las cuales usted evidenció la reacción en cada tejido
vivo. ¿En cual material de la práctica se encuentran estas enzimas?
6. Cuál es la reacción que efectúa cada enzima.
7. En la reacción bioquímica que describe cada proceso. Identifique sustrato, enzima
producto coenzima.
8. ¿Cuáles factores afectaron el metabolismo de las células de cada tejido? Dé una
explicación química.
9. ¿Qué indica el tiempo durante el cual salen burbujas? Consulte la actividad de una
enzima de la levadura, en otras frutas o verduras.
10. ¿Por qué la limadura de hierro siendo un elemento sin vida se observa la presencia
de burbujas?
7. Nivel de Riesgo:

Manejo de residuos:
• Línea 18
• Línea 1
8. Bibliografías
http://laguna.fmedic.unam.mx/~evazquez/0403/velocidad%20reaccion%20enzimatica.html
http://www.csgastronomia.edu.mx/profesores/calimentos/quimica2/Capitulo%20VI/enzimas%20
siguiente.htm.
PRACTICA Nº 6
1. FERMENTACIÓN ALCOHÓLICA
2.Objetivos
• Reconocer el proceso de fermentación como un procesos metabólico realizado por
diversos microorganismos a partir de compuestos orgánicos como los carbohidratos.
• Obtener alcohol etílico a partir de sustancias fermentables: azúcares, panela y fruta.
• Conocer y aplicar el método de separación de compuestos llamado destilación.
• Realizar pruebas para identificación de alcoholes.
3.Marco Teórico
La mayoría de los organismos consumimos glucosa y la oxidamos para obtener energía,
un producto de esta oxidación es el piruvato, este tiene números destinos alternativos en
los microorganismos anaerobios. Por ejemplo, las bacterias del ácido láctico reducen el
piruvato a lactato en un solo paso. En cambio, las levaduras convierten el piruvato en
etanol en una ruta de dos pasos. Esta fermentación alcohólica comienza por la piruvato
22
decarboxilasa. Que va seguida de la reducción del acetaldehído a etanol, que depende
del NADH, catalizada por la enzima alcohol deshidrogenasa. (Ver figura abajo).5
La primera reacción requiere la presencia como coenzima de pirofosfato de tiamina. Esta
coenzima, procedente de la vitamina B1, interviene en varias reacciones de transferencia
de grupos que implican una porción aldehído activada.
Glucosa
Pi
Gliceraldehído 1, 3 Bifosfoglicerato
ADP
NAD+ NADH+ H+ Piruvato ATP

Piruvato decarboxilasa
Etanol Acetaldehído
Alcohol deshidrogenasa
La producción industrial del etanol ha adquirido una importancia tremenda cuando la

humanidad intenta considerar dos problemas serios:
La sustitución del petróleo, no renovable, por fuentes de energía renovables; y la
utilización de los materiales biológicos de desecho. Los esfuerzos en estos campos
necesitan de la bioingeniería para generar cepas bacterianas que puedan convertir
sustancias como la celulosa de los desechos humanos a animales a hexosas.
Los tejidos animales también tienen alcohol deshidrogenasa, a pesar de que el etanol no
es un producto metabólico importante en los animales.
Algunas de las consecuencias metabólicas importantes de la intoxicación por etanol se
deben a la oxidación del etanol a acetaldehído por esta enzima en el hígado. Primero se
reduce excesivamente el NAD+ a NADH, que agota el flujo que transcurre por la
generación de energía. En segundo lugar, el acetaldehído es bastante tóxico, y muchos
de los efectos desagradables de las resacas son consecuencia de las acciones del
acetaldehído y sus metabolitos posteriores.
La obtención del etanol a partir de una sustancia fermentada se realiza mediante la

técnica de destilación, que consiste en la evaporación parcial de un líquido (teniendo en
cuanta su punto de ebullición), con la transferencia de estos vapores y la subsiguiente
condensación y colección.
23
4.Materiales
1 Erlenmeyer de 250 ml.
6 Tubos de ensayo
1 Balón de 250 ml para destilación.
1 Gradilla.
2 pipetas graduadas de 5 ml.
1 Mechero.
2 Soportes.
2 Pinzas
1 Pera
1 Churrusco
1 Termómetro
2 Perlas de ebullición.
1 Capsula de porcelana.
1 Aro
1 Malla.
2 Mangueras
1 capsula de porcelana
1 Panela.
1 Libra de Azúcar.
Cáscara de piña.
Uvas
Levadura.
Equipos
Equipo para destilación.
5. Reactivos
Etanol.
24
2 Propanol.
Terbutanol.
Reactivo de Lucas.
6.Procedimiento
A. Proceso de fermentación
Coloque en un recipiente de 1L una panela rallada, 2 papeletas de levadura (o pesas

25g), agua hasta alcanzar las ¾ partes del volumen del recipiente. Coloque en el frasco
un a tapa con un orificio por donde coloque un pitillo sin tocar la solución. (Si es posible
adicione una mínima cantidad de sulfato de amonio) deje durante aproximadamente 8
días.
B. Destilación de alcoholes
Decante el producto fermentable y páselo a través de una gasa para filtrar, transfiera la
solución obtenida al balón o erlenmeyer del equipo de destilación y acondicione el equipo
para destilación, tal como se ilustra en la figura.
Ajuste el equipo de destilación simple e inicie el proceso prendiendo la llama en el
mechero. Controle la temperatura para que no sobrecargue los 78ºC. Recoja el destilado
que se produzca en un erlenmeyer.
C. Propiedades químicas de reconocimiento:
1 Combustibilidad: Coloque 1 ml de alcohol obtenido en una cápsula de porcelana y

acerque un fósforo encendido. Observe el tipo de combustión. Repita el procedimiento
con etanol.
2 Prueba de Lucas: tome 4 tubos de ensayo y márquelos, en el primero agregue 1 ml de

alcohol destilado, en los restantes adicione la misma cantidad de los alcoholes: etanol, 2
propanol y terbutanol, en orden estricto agregue 2 ml del reactivo de Lucas. Observe que
sucede y en cuanto tiempo se produce la reacción. Anote los resultados y obtenga
conclusiones.
7. Nivel de Riesgo:

Manejo de residuos:
• Línea 1
• Línea 18
Cuestionario
1. ¿En el proceso de destilación para la obtención de etanol? ¿Por qué se agrega sulfato
de amonio?
2. ¿Por qué es necesario realizar un orificio a la tapa del recipiente que contiene la
mezcla fermentadora? ¿Cómo se explica?
25
3. ¿Por qué es necesario controlar la temperatura en el proceso de destilación? ¿Y cuál
es la razón que sea controlada entre el rango de 75-80 ºC específicamente?
4. Investigue bajo qué procesos metabólicos se puede oxidar los alcoholes y
justifíquelos.
5. Consulte qué otros estilos de destilación se conocen y en qué tipo de separación
deban ser utilizados.
8.Bibliografías
Mathews, et al. Bioquímica. 3a. Editorial Mac Graw Hill. 2.000. P. 516-518.
PRACTICA Nº 7
1. SOLUCIONES Y DILUCIONES
2.Objetivos
• Reproducir los conceptos teóricos de soluciones y diluciones en la vida práctica del
laboratorio.
• Identificar, seleccionar, y emplear las fórmulas adecuadas para diferentes procesos
de dilución.
• Practicar de manera hábil la preparación de soluciones y diluciones.
• Mejorar la habilidad y destreza en el manejo de las unidades de concentración
mediante la preparación de soluciones utilizado diluciones en serie.
3.Marco Teórico
Soluciones
Una solución es la mezcla homogénea de dos o más sustancias. Para que dos más
sustancias formen una solución se necesita que estas sean solubles o miscibles. La
solubilidad de un soluto o un solvente, está indicada por la máxima cantidad de soluto
que se disuelve en una determinada cantidad de solvente.
Dilución:
Proceso por el cual una solución concentrada es con vertida en una menos concentrada
(diluida), por la adición de solvente.
Unidades de concentración
Cada sustancia tiene una solubilidad que es la cantidad máxima de soluto que puede
disolverse en una disolución, y depende de condiciones como la temperatura, presión, y
otras substancias disueltas o en suspensión.
La concentración es la magnitud física que expresa la cantidad de un elemento o un

compuesto por unidad de volumen.
El término solubilidad se utiliza tanto para designar al fenómeno cualitativo del proceso
de dilución como para expresar cuantitativamente la concentración de las soluciones.
Puede expresarse en moles por litro, en gramos por litro, o en porcentaje de
soluto/disolvente.
En química, para expresar cuantitativamente la proporción entre un soluto y el disolvente

en una disolución se emplean distintas unidades: molaridad, normalidad, molalidad,
26
formalidad, porcentaje en peso, porcentaje en volumen, fracción molar, partes por millón,
partes por billón, partes por trillón, etc. También se puede expresar cualitativamente
empleando términos como diluido, para bajas concentraciones, o concentrado, para
altas.
La concentración de una solución se expresa como relaciones en peso, en volumen o

peso-volumen.
Relaciones en peso
Estas son: porcentaje en peso, partes por millón, molalidad, fracción molar. Las dos
primeras son unidades físicas y las dos últimas son relaciones entre unidades químicas
y físicas.
Las unidades físicas utilizadas son: el gramo (g) y sus múltiplos y submúltiplos: miligramo
(mg), nanogramo (ng), kilogramo (Kg), microgramo (µg).
Las unidades denominadas químicas son: la mol-gramo y sus submúltiplos mili y micro
mol (mmol, µmol respectivamente).
• Porcentaje en peso (% p/p): lo indica el número de gramos de soluto presentes en

cien gramos de la solución.
• Partes por millon (ppm): indica las partes de soluto presentes en un millón de partes
de solución (g por tonelada o mg por Kg).
Para expresar concentraciones muy pequeñas, trazas de una sustancia muy diluida en
otra, es común emplear las relaciones partes por millón (ppm), El millón equivale a 106,
el billón estadounidense, o millardo, a 109 y el trillón estadounidense a 1.
Partes por millón (abreviado como ppm) unidad empleada usualmente para valorar la
presencia de elementos en pequeñas cantidades (traza) en una mezcla. Generalmente
suele referirse a porcentajes en peso en el caso de sólidos y en volumen en el caso de
gases. Se abrevia como ppm. También se puede definir como "la cantidad de materia
contenida en una parte sobre un total de un millón de partes."
Ejemplo: Supongamos que tenemos un cubo homogéneo de un metro de arista, cuyo
volumen es un metro cúbico (m³). Si lo dividimos en 'cubitos' de un centímetro de lado,
obtendríamos un millón de 'cubitos' de un centímetro cúbico, (cm³ o cc). Si tomamos uno
de esos 'cubitos', del millón total de 'cubitos', tendríamos una parte por millón.
• Molalidad (m): representa las moles de soluto en cada kilogramo de solvente.
• Fracción molar (X): relaciona las moles de soluto con las moles totales en la solución
(moles totales son las moles del soluto mas las moles del solvente). Por ejemplo, en una
mezcla binaria de 6 moles de etanol y 4 moles de agua, lo que da un total de 10 moles,
la fracción molar del etanol es de 6/10 = 0,6; mientras que la fracción molar del agua es
27
4/10 = 0,4. La suma de todas las fracciones molares de una mezcla da como resultado
la unidad.
Xsoluto=nsoluto/ntotal,
Relaciones en volumen
• Porcentaje en volumen (%v/v): Indica las partes en volumen de soluto por cada
cien partes de solución. Por ejemplo, ml de soluto por cada cien mililitros de solución.
Relaciones Peso A Volumen
Indica las partes del soluto expresadas en alguna unidad de peso entre el volumen de la
solución.
Gramos por litro (g/l): Se pueden usar también las mismas unidades que para medir la
densidad aunque no conviene confundir ambos conceptos. La densidad de la mezcla es
la masa de la solución entre el volumen de esta mientras que la concentración en dichas
unidades es la masa de soluto entre el volumen de la disolución. Se suelen usar los
gramos por litro (g/l).
Porcentaje peso a volumen (%p/v):
• Gramos por ciento (%g): Indica el número de gramos de soluto que estén
contenidos en cien mililitros de la solución.
• Miligramos por ciento (%mg): representa el número de miligramos de soluto

contenidos en cien mililitros de solución o los mg de soluto por decilitro (mg/dl).
• Molaridad (M)
La molaridad (M) es el número de moles de soluto contenidas en un litro de solución. Por
ejemplo, si se disuelven 0,5 moles de soluto en 100 mL de disolución, se tiene una
concentración de ese soluto de 5,0 M (5,0 molar). Para preparar una disolución de esta
concentración normalmente se disuelve primero el soluto en un volumen menor, por
ejemplo 30 mL, y se traslada esa disolución a un matraz, para después rellenarlo con
más disolvente hasta los 100 mL.
28
Es el método más común de expresar la concentración en química sobretodo cuando se
trabaja con reacciones químicas y relaciones estequiométricas. Sin embargo, tiene el
inconveniente de que el volumen cambia con la temperatura
• Normalidad (N)
La normalidad (N) es el número de equivalentes (n) de soluto (es la unidad de masa que
representa a la mínima unidad que puede reaccionar) contenidas en un litro de solución
(sc).
Diluciones
Tanto en un laboratorio clínico como en un stand de enfermería, como en cualquier área

de la salud se presentan diariamente situaciones en que se realizan diluciones de
diferentes solucione. Frente a esto se hace necesario entender que lo que se está
diluyendo son soluciones y que estas soluciones se expresan en términos de
concentración, es por esto que es importante en primera instancia, conocer y manejar
estos dos términos; y en segundo lugar conocer que al diluir se disminuye la
concentración de una solución determinada, es decir, diluir es agregar un solvente a una
solución y así obtener una concentración menor de sólido en la solución.
Una de las soluciones que se diluyen con más frecuencia en un laboratorio clínico es el
plasma o suero o líquidos biológicos en los cuales encontramos todos los analitos a
determinar cuantitativamente, actuando estos como solutos diluidos en el agua celular.
Otras soluciones a diluir son aquellos reactivos utilizados como preservativos de algunas
de estas muestras biológicas, tales como el ácido clorhídrico o nítrico entre otros pues
sus concentraciones elevadas no los hacen aptos para cumplir su función.
Por otra parte, un enfermero(a) cuando maneja sustancias cuyas cantidades necesarias
para ver un efecto son extremadamente pequeñas (por ejemplo, un fármaco para tratar
una enfermedad, una hormona para estudiar su efecto en un animal de experimentación,
etc.) y difícilmente se pueden pesar o medir en esas proporciones tan pequeñas, también
tiene que diluir.
En esas situaciones es necesario recurrir a la preparación de una solución de alta
concentración (o solución de stock o solución madre) y hacer diluciones seriadas a partir
de ésta. A continuación, realizamos un esquema que muestra el proceso de dilución:
Vd = Vs+Vc( 1)
Vs
Vc
Vd
Cc Cd
Cc=Concentración de la solución concentrada
Cd=Concentración de la solución diluída
29
Vd=Volumen de la solución diluída
Vc= Volumen de la alícuota de solución concentrada, es decir el volumen que se extrae
de la solución concentrada para realizar la dilución.
Como mencionamos anteriormente, dilución es el proceso por el cual una solución
concentrada es convertida en una menos concentrada (diluida), por adición de una
solvente.
En una solución la cantidad de soluto que el volumen de solución diluida (Vd); pues el
solvente añadido (Vs) no contendrá soluto alguno. Entonces si la cantidad de soluto por
unidad de volumen se puede determinar por:
Cantidad de Soluto = Volumen de la Solución x Concentración Solución.
Para la solución concentrada tenemos:

Cantidad de soluto en Vc = Vc x Cc
Para la solución diluida será:

Cantidad de soluto en Vd = Vd x Cd
Si la cantidad de soluto es igual, entonces:
Cc x Vc = Cd x Vd..............(1)
La anterior ecuación es la base para todos los cálculos que se efectúan para las
diluciones.
La concentración de la solución diluida puede ser calculada a partir de la concentración

de la solución concentrada, teniendo en cuanta el factor de dilución (fd). Esta es una
expresión que resulta de manejar la ecuación (1):
Cd = fdCc................(2)
Así que fd = Cd
Cc
Y relacionando con (1)

fd = Vc ya que Vc = Cd
Vd Vd Cc
fd también es igual a Vc , ya que Vd es igual a Vs + Vc

Vs + Vc
El factor de dilución se expresa generalmente como una relación en función del volumen
final y así un factor de dilución (fd) 1/10 indica que una solución que tenia una
determinada concentración, se ha diluido diez veces y que la relación entra el (Vc) y (Vd)
es de 1:10. De aquí también se desprende que la relación entre el (Vc) y el (Vs) es de
1:9.
Para preparar soluciones muy diluidas se recurre a las diluciones en serie; las cuales se
hacen sacando volúmenes o alícuotas de la solución anterior para preparar la siguiente.
Para obtener la concentración de una solución determinada, se puede aplicar la ecuación:
30
Cn = fd1 x fd2 x fd3 x fd4 x.......x fdn x Cc.........(3)
Como se puede observar, un enfermero, bacteriólogo, o cualquier profesional de la salud

se puede enfrentar a diversas situaciones en la rutina diaria en las cuales tiene que diluir.
Principalmente se puede enumerar 3 situaciones básicas tales como:
1. Concentraciones elevadas de determinado analito en una muestra biológica.
2. Diluciones de reactivos químicos con concentraciones conocidas.
3. Preparación de patrones para elaboración de curvas de calibración.
A cada una de estas situaciones debemos enfrentarnos e identificar los pasos a seguir
para desempeñarnos de una manera ágil y hábil.
1. Concentraciones elevadas de determinado analito en una muestra biológica

Cuando el equipo no reporta ningún resultado esto es debido a las altas concentraciones
del analito (sustancia a analizar en la sangre del paciente: glucosa, triglicéridos proteínas
etc) que se está determinando en la muestra, o simplemente disminuir la concentración
de alguna solución:
a. Muestra con concentraciones elevadas de analitos:

Cc = Vd / Fd
Vc
Fd
Vd
Muestra de sangre o
medicamento a diluir
¿Se tiene el tubo de la muestra a analizar experimentalmente nos preguntamos cual es

la cantidad de muestra que debo tomar y cómo voy a realizar la dilución? Para esto se
necesitan de dos datos con los cuales se pueden realizar todas las diluciones fácilmente,
primero: conocer a que volumen final al cual voy a realizar la dilución, y segundo
determinar el factor de dilución a mi criterio. En este momento somos autónomos de elegir
tanto el volumen final como el factor dilución.
Ejemplo Nº 1
Podemos escoger un factor de dilución de ½ y un volumen final de 5 ml. Aplicamos la
fórmula que nos indica que volumen de la solución concentrada en este caso de la
muestra biológica vamos a medir.
Vc = Vd x fd
Vc= 5ml x ½
Vc= 2.5 ml del suero sanguíneo o medicamento a diluir
Es decir medimos 2.5 ml de suero lo agregamos a otro tubo y adicionamos el volumen

que hace falta para completar 5ml del volumen final de la solución; es decir 2.5ml de agua
destilada u otro disolvente.
31
En este momento usted puede procesar su muestra y no olvidar que el resultado que
calcule con esta dilución no es el real, es necesario multiplicar por el factor de dilución
así: la muestra diluida arrojó una concentración de 200mg/dl la verdadera concentración
es: 400mg/dl ya que se multiplica por el denominador del factor de dilución en este caso
es 2.
Se pude presentar otra situación en la que aún la muestra sigue muy concentrada y es
necesario seguir realizando diluciones en este caso acudimos a realizar diluciones en
serie.
Diluciones en serie o seriadas

Vc Vc Vc Vc
fd fd fd fd
Vd1 Vd2 Vd3 Vd4
Se denominan en serie porque la dilución anterior ahora es la solución concentrada de la

siguiente y así sucesivamente como se muestra en el esquema. Para realizar diluciones
en serie al igual que para realizar cualquier dilución se necesita conocer el factor de
dilución y el volumen final (Vd), para así conocer el volumen que debemos extraer de la
muestra concentrada (Vc). Al realizar estas diluciones se pueden presentar dos
situaciones a saber:
A. EL factor de dilución utilizado en todas las diluciones es el mismo, por lo tanto, el
volumen de la solución concentrada para extraer de cada tubo es el mismo y el del
solvente también lo es.
B. El factor de dilución varía de un tubo a otro y por lo tanto el volumen de la solución
concentrada es diferente y por lo tanto el volumen del solvente varía para cada tubo.
En este ejemplo vamos a utilizar un ejemplo para la situación A:
La muestra del ejemplo Nº 1 que se diluyó debe diluirse más, si seguimos utilizando el
mismo factor de dilución ½ y utilizando un volumen final de 5ml, siempre debemos medir
del tubo anterior 2.5ml y en todos los tubos adicionar 2.5ml del solvente ver esquema.
Si se requiere conocer las concentraciones de cada tubo se pueden presentar dos
situaciones:
a. Que se conozca la concentración de la solución stock.
b. Desconocer la contracción de la solución stock y sólo conocer la contracción de la
última solución.
Se desea conocer la concentración de las diluciones siguientes a la solución stock a la

cual se le conoce la concentración:
Para solucionar el primer caso recurrimos a la fórmula:
Cd= Cc x fd
Para el tubo Nº 1
Cd= *400mg/dl x ½ Cd= 200mg/dl
32
Para el tubo Nº 2
Cd = 200mg/dl x ½ Cd= 100mg/dl
Para el tubo Nº 3
Cd = 100mg/dl x ½ Cd = 50mg/dl
Para el tubo Nº 4
Vd= 50mg/dl x ½ Vd = 25mg/dl
*Recuerde que esos datos provienen del ejemplo Nº 1
Si vamos a resolver la segunda situación en donde se desconoce la contracción de la

solución stock y sólo se conoce la contracción de la última solución. que en este caso
sería de 25mg/dl se procede así:
Cc = Cd
fd
Cc = 25
½
25 x *2 = 50 mg/dl
* En este caso recuerde que al dividir por un fraccionario se multiplica por su

denominador.
2. Diluciones de reactivos químicos con concentraciones conocidas.

En este caso partimos de reactivo de concentración conocida y se requiere preparar o
llegar a otra concentración.
Se desea preparar una solución de HCL 5% y se parte de una solución de 10%. Para
este caso es necesario conocer cuál es el volumen que necesito medir de la solución
concentrada, debo definir los dos parámetros el factor de dilución y el volumen final, a
diferencia de los otros problemas en el caso experimental el factor de dilución no lo defino
yo, en este caso debe hallarse teniendo en cuanta las dos concentraciones así:
fd = Cd
Cc
fd= 5%
10%
fd=1/2
Teniendo el factor de dilución entonces podemos fijar un volumen final cualquiera por
ejemplo 2 ml, entonces hallamos el volumen de la solución concentrada así:
Vc = Vd x fd
Vc= 2ml x ½
Vc= 1 ml de la solución de HCl al 10%
Y adicionamos 1 ml de solvente para completar el volumen final
3. Preparación de patrones para elaboración de curvas de calibración
33
El primer ejemplo que veremos es una proteína. La albúmina sérica bovina es la proteína
que más usualmente se emplea como patrón para calcular la cantidad de proteínas
totales en una muestra incógnita. Las unidades que habitualmente se usan para la
solución de stock son mg/ml, y en general una solución de 10 mg/ml puede resultar
adecuada para realizar diluciones seriadas y medir luego la concentración de proteínas
en una muestra. En este caso se pueden presentar dos situaciones:
a. Diluciones NO en serie o no seriadas a partir siempre de la solución stock conociendo
las concentraciones a las que queremos llegar
b. Diluciones en serie sin conocer las concentraciones a las que se desea llegar.
Diluciones no seriadas: es decir que el volumen inicial siempre se extrae de la

solución stock
Para el primer caso se procede así: Las diluciones se harán al medio en una serie de
tubos rotulados con las concentraciones 5 mg/ml; 2 mg/ml; 1 mg/ml; 0.5 mg/ml; hallamos
el factor de dilución con la fórmula del ejemplo Nº 3 para conocer el volumen a tomar de
la solución stock (Vc) en cada dilución y fijamos un volumen final de 1ml; aplicamos la
fórmula del ejemplo Nº1
Tubo Concentración ml de H2O ml solución x Dilución

1 5 mg/ml 0.5 ml 0.5ml solución stock 1/2
2 2mg/ml 0.8 ml 0.2 ml de la solución stock 1/5
Diluciones en serie: cuyo volumen inicial se extrae de la dilución anterior

Para el segundo caso se van a preparar 4 patrones y se van a realizar 4 diluciones en
serie a partir de la misma solución stock anterior de 10 mg/dl. En este caso yo decido el
factor de dilución y el volumen final de cada dilución. Para este caso determiné que voy
a diluir a ½ y el volumen final es de 2 ml aplico la fórmula del ejemplo Nº 1.
Vc = Vd x fd.
Vc= 2ml x ½.
Vc= 1 ml de la solución concentrada.
Como es el mismo factor de dilución para todos los tubos entonces voy a extraer del tubo
anterior a la siguiente dilución 1 ml. y adiciono 1ml del solvente.
Tubo Concentración ml de H2O ml de solución x Dilución

1 1ml 1ml 1/2
2 1ml 1ml 1/2
3 1ml 1ml 1/2
4 1ml 1ml 1/2
34
Para determinar las concentraciones entonces aplico la fórmula Vd = CC x fd, teniendo
en cuenta que siempre la dilución anterior al último tubo que le voy a hallar la
concentración es la solución concentrada respecto a esta. Así como se hizo en el ejemplo
Nº 2.
4.Materiales
1 Vaso de precipitado de 50 ml.
1 Balón aforado de 50ml.
1 Vidrio d reloj
1 Espátula.
1 Agitador.
1 Pipeta graduada 5 ml.
1 Pipeta graduada de 1 ml.
6 Tubos de ensayo.
1 Pera.
1 Churrusco.
1 Gradilla.
Equipos
Balanza analítica
5. Reactivos
Agua destilada.
NaOH.
KOH
NaCl.
Glucosa.
Sacarosa.
Azul de metileno.
Procedimiento
A. Preparación de soluciones.
1. Preparar 50ml de una solución de glucosa 0.1 M. Exprese la concentración en %p/v.
2. Preparar 50ml de una solución de sacarosa 0.5 M. Exprese la concentración en %p/v.
3. Preparar 50ml de una solución de NaOH 0.25 M. Exprese la concentración en %p/v.
4. Preparar 50ml de una solución de NaCl 0.2 M. Exprese la concentración en %p/v.
5. Preparar 50ml de una solución de KOH 0.15 M. Exprese la concentración en %p/v.
6. Preparar 50ml de una solución de glucosa 0.5 M. Exprese la concentración en %p/v.
7. Preparar 50ml de una solución de sacarosa 0.1 M. Exprese la concentración en %p/v.
8. Preparar 50ml de una solución de NaOH 0.2 M. Exprese la concentración en %p/v.
9. Preparar 50ml de una solución de NaCl 0.15 M. Exprese la concentración en %p/v.
10. Preparar 50ml de una solución de KOH 0.25 M. Exprese la concentración en %p/v.
B. Diagrama de proceso de trabajo

Una vez realizada la lectura del problema realice un esquema donde se observe paso a
paso la preparación de la solución y los cálculos correspondientes.
35
C. Reproducción experimental del problema propuesto
Por cada grupo de trabajo prepararán las soluciones de forma experimental.
Ejercicios de aplicación
Lea atentamente los siguientes ejercicios que se presentan a continuación:
1. Se necesita inyectarle al paciente un antibiótico que contiene 250.000 unidades

internacionales (U.I) Usted lo encuentra en su mesa. El médico ordena que se le debe
suministrar sólo una concentración de 250 U.I Realice la dilución adecuada esta
concentración teniendo en cuenta que se disuelve en agua esterilizada hasta 5 ml. Si se
mezclan 5 ml de la solución anterior con 5ml de agua (solución 2). ¿Cuál es la
concentración de esta ultima solución?
2. En un laboratorio clínico se necesita preparar un patrón de glucosa. Cuántos gramos

tiene que pasar para preparar 10 ml de una solución stock o patrón de glucosa de 0.15M:
• Prepare la solución, calcule y redacte como la hace mediante un esquema
• Exprese la solución preparada en % (P/V)
• A partir de solución stock preparar cuatro diluciones en serie aplicando un factor de
dilución 1/2 y con un volumen final de 5 ml: Hacer los cálculos respectivos y hallar las
concentraciones de cada dilución
3. Realice una dilución 1/5, 1/8, 1/10 del antibiótico anterior halle las concentraciones
de cada una.
4. Usted encuentra una muestra de suero de un paciente que se observa lechosa y muy
viscosa debido a la alta cantidad de triglicéridos de la muestra, para el análisis es
necesario realizar 4 diluciones en serie aplicando un factor de dilución de 1/10 y con un
volumen final de 4.5 ml en cada una. ¿Cuántos ml tiene que sacar del suero para poder
obtener la primera dilución: es la misma cantidad para las demás diluciones? Determine
las concentraciones de cada dilución teniendo en cuenta que la primera tiene una
concentración de 500mg/dl.
5. Se necesita conocer la concentración de proteínas en el suero de un paciente: para

esto diluya el suero 1/3 y este a su vez ½. Cómo realiza las diluciones. Si la última dilución
presenta una concentración de 8mg/dl de proteínas; ¿Cuál es la concentración de
proteínas en la segunda dilución y en la muestra original?
6. Se le entrega la muestra de orina de un paciente con elevada concentración de

nitrógeno ureico, el equipo no la puede procesar, debido a la alta concentración. Por lo
tanto, usted de diluir la muestra. Mezcle 5ml de orina con 15 ml de agua y 5 ml de HNO3.
¿Qué dilución se realizó? A partir de esta dilución prepare dos diluciones en serie 1:9
tenga en cuenta que la concentración de nitrógeno en la orina es de 200mg%. ¿Cuál
será la concentración de la última dilución?
7. Preparar 100ml de una solución de NaOH 0.2 N.

a. A partir de la anterior solución preparar 50ml de otra solución con una concentración
de 0.3g/dl.
b. A partir de la anterior solución realizar 4 diluciones. Realice un esquema y los cálculos
respectivos para cada dilución.
c. Determine las concentraciones de cada dilución.
36
8. Cuántos ml de Ácido Clorhídrico concentrado de densidad 1,12 y concentración 36,5%
(P/P) debe medir para preparar 50 ml una solución 0.3 N. Realice los cálculos respectivos
y explique mediante un esquema.
a. A partir de esta solución prepare 10ml de una solución de ácido clorhídrico cuya
concentración sea de 0.75 g/dl.
b. A partir de la anterior solución realizar 4 diluciones. Realice un esquema y los cálculos
respectivos para cada dilución.
c. Determine las concentraciones en molaridad (M) de cada dilución.
7. Nivel de Riesgo:

Manejo de residuos:
• Línea 8
• Línea 4
8. Bibliografías
Torrenegra, Rubén. Introducción al Análisis Químico Moderno. Bogotá D.C.

Publicaciones Universidad Javeriana. Pontificia Universidad Javeriana.1990. P. 9-25.
Disponible en Internet: http://es.wikipedia.org/wiki/Concentraci%C3%B3n.
PRACTICA Nº 8
1. DILUCIONES EN SERIE O SERIADAS
2. Objetivos
• Aplicar unidades de concentración en la preparación de soluciones patrón.

• Preparar en forma correcta una solución patrón de concentración conocida.
de dilución.
mediante la preparación de soluciones utilizado diluciones en serie.
3. Marco Teórico
Preparación de patrones para elaboración de curvas de calibración
A. Diluciones en serie sin conocer las concentraciones a las que se desea llegar.
37
B. Diluciones NO en serie o no seriadas a partir siempre de la solución stock conociendo
A. Diluciones en serie o seriadas

Vc Vc Vc Vc
fd fd fd fd
Vd1 Vd2 Vd3 Vd4
Se denominan en serie porque la dilución anterior ahora es la solución concentrada de la

siguiente y así sucesivamente como se muestra en el esquema. Para realizar diluciones
en serie al igual que para realizar cualquier dilución se necesita conocer el factor de
dilución y el volumen final (Vd), para así conocer el volumen que debemos extraer de la
muestra concentrada (Vc). Al realizar estas diluciones se pueden presentar dos
situaciones a saber:
C. EL factor de dilución utilizado en todas las diluciones es el mismo, por lo tanto, el
volumen de la solución concentrada para extraer de cada tubo es el mismo y el del
solvente también lo es.
D. El factor de dilución varía de un tubo a otro y por lo tanto el volumen de la solución
concentrada es diferente y por lo tanto el volumen del solvente varía para cada tubo.
En este ejemplo vamos a utilizar un ejemplo para la situación A:
La muestra del ejemplo Nº 1 que se diluyó debe diluirse más, si seguimos utilizando el
mismo factor de dilución ½ y utilizando un volumen final de 5ml, siempre debemos medir
del tubo anterior 2.5ml y en todos los tubos adicionar 2.5ml del solvente ver esquema.
Si se requiere conocer las concentraciones de cada tubo se pueden presentar dos
situaciones:
c. Que se conozca la concentración de la solución stock.
d. Desconocer la contracción de la solución stock y sólo conocer la contracción de la
última solución.
Se desea conocer la concentración de las diluciones siguientes a la solución stock a la

cual se le conoce la concentración:
Para solucionar el primer caso recurrimos a la fórmula:
Cd= Cc x fd
Para el tubo Nº 1
Cd= *400mg/dl x ½ Cd= 200mg/dl
Para el tubo Nº 2
Cd = 200mg/dl x ½ Cd= 100mg/dl
Para el tubo Nº 3
Cd = 100mg/dl x ½ Cd = 50mg/dl
38
Para el tubo Nº 4
Vd= 50mg/dl x ½ Vd = 25mg/dl
*Recuerde que esos datos provienen del ejemplo Nº 1 presentado en soluciones y

diluciones
Si vamos a resolver la segunda situación en donde se desconoce la contracción de la

solución stock y sólo se conoce la contracción de la última solución. que en este caso
seria de 25mg/dl se procede así:
Cc = Cd
fd
Cc = 25
½
25 x *2 = 50 mg/dl
* En este caso recuerde que al dividir por un fraccionario se multiplica por su

denominador.
Diluciones en serie: cuyo volumen inicial se extrae de la dilución anterior

Se van a preparar 4 patrones y se van a realizar 4 diluciones en serie a partir de la misma
solución stock anterior de 10 mg/dl. En este caso yo decido el factor de dilución y el
volumen final de cada dilución. Para este caso determiné que voy a diluir a ½ y el volumen
final es de 2 ml aplico la fórmula del ejemplo Nº 1.
Vc = Vd x fd.
Vc= 2ml x ½.
Vc= 1 ml de la solución concentrada.
Como es el mismo factor de dilución para todos los tubos entonces voy a extraer del tubo
anterior a la siguiente dilución 1 ml. y adiciono 1ml del solvente.
Tubo Concentración ml de H2O ml de solución x Dilución

1 1ml 1ml 1/2
2 1ml 1ml 1/2
3 1ml 1ml 1/2
4 1ml 1ml 1/2
Para determinar las concentraciones entonces aplico la fórmula Vd = CC x fd, teniendo

en cuenta que siempre la dilución anterior al último tubo que le voy a hallar la
concentración es la solución concentrada respecto a esta. Así como se hizo en el ejemplo
Nº 2.
4.Materiales
39
1 Vidrio d reloj
1 Espátula.
1 Agitador.
6 Tubos de ensayo.
1 Pera.
1 Churrusco.
1 Gradilla.
Equipos
Balanza analítica
5. Reactivos
Agua destilada.
NaOH.
NaCl.
HCl.
Glucosa.
Sacarosa.
Azul de metileno.
6. Procedimiento
1. Preparar 50ml de una solución de glucosa 0.1 M. A partir de la anterior solución
realizar 2 diluciones, factor de dilución (fd) de 1/2, volumen final de 5ml.
2. Preparar 50ml de una solución de sacarosa 0.5 M. A partir de la anterior solución
3. Preparar 50ml de una solución de NaOH 0.25 M. A partir de la anterior solución
4. Preparar 50ml de una solución de NaCl 0.2 M. A partir de la anterior solución realizar
2 diluciones, factor de dilución (fd) de 1/4, volumen final de 6ml.
5. Preparar 50ml de una solución de KOH 0.15 M. A partir de la anterior solución realizar
6. Preparar 50ml de una solución de glucosa 0.5 M. A partir de la anterior solución
7. Preparar 50ml de una solución de sacarosa 0.1 M. A partir de la anterior solución
8. Preparar 50ml de una solución de NaOH 0.2 M. A partir de la anterior solución realizar
9. Preparar 50ml de una solución de NaCl 0.15 M. A partir de la anterior solución realizar
10. Preparar 50ml de una solución de KOH 0.25 M. A partir de la anterior solución realizar

40
Por cada grupo de trabajo se prepararán las soluciones de forma experimental.
7. Nivel de Riesgo:

Manejo de residuos:
• Línea 8
• Línea 4
8. Bibliografías

Disponible en Internet: http://es.wikipedia.org/wiki/Concentraci%C3%B3n
PRACTICA Nº 9
1. DILUCIONES NO SERIADAS
2. Objetivos
• Aplicar unidades de concentración en la preparación de soluciones patrón.

• Preparar en forma correcta una solución patrón de concentración conocida.
de dilución.
mediante la preparación de soluciones utilizado diluciones no seriadas.
3. Marco Teórico
Preparación de patrones para elaboración de curvas de calibración
A. Diluciones en serie sin conocer las concentraciones a las que se desea llegar.
B. Diluciones NO en serie o no seriadas a partir siempre de la solución stock conociendo
Diluciones no seriadas: es decir que el volumen inicial siempre se extrae de la

solución stock
Para el primer caso se procede así: Las diluciones se harán al medio en una serie de
tubos rotulados con las concentraciones 5 mg/ml; 2 mg/ml; 1 mg/ml; 0.5 mg/ml; hallamos
el factor de dilución con la fórmula del ejemplo Nº 3 para conocer el volumen a tomar de
41
la solución stock (Vc) en cada dilución y fijamos un volumen final de 1ml; aplicamos la
fórmula del ejemplo Nº1
Tubo Concentración ml de H2O ml solución x Dilución

1 5 mg/ml 0.5 ml 0.5ml solución stock 1/2
4.Materiales
1 Vidrio d reloj
1 Espátula.
1 Agitador.
6 Tubos de ensayo.
1 Pera.
1 Churrusco.
1 Gradilla.
Equipos
Balanza analítica
5. Reactivos
Agua destilada.
NaOH.
NaCl.
HCl.
Glucosa.
Sacarosa.
Azul de metileno.
6. Procedimiento
1. Preparar 50ml de una solución de glucosa a una concentración de 5 g/l. A partir de la
solución stok realizar 2 diluciones de 1g/l y de 2g/l, volumen final de 5ml.
2. Preparar 50ml de una solución de sacarosa a una concentración de 10 g/l. A partir de
la solución stok realizar 2 diluciones de 2g/l y de 3g/l, volumen final de 5ml.
3. Preparar 50ml de una solución de NaOH a una concentración de 15 g/l. A partir de la
4. Preparar 50ml de una solución de NaCl a una concentración de 20 g/l. A partir de la
42
5. Preparar 50ml de una solución de KOH a una concentración de 25 g/l. A partir de la
6. Preparar 50ml de una solución de glucosa a una concentración de 30 g/l. A partir de
7. Preparar 50ml de una solución de sacarosa a una concentración de 35 g/l. A partir de
8. Preparar 50ml de una solución de NaOH a una concentración de 10 g/l. A partir de la
9. Preparar 50ml de una solución de NaCl a una concentración de 15 g/l. A partir de la
10. Preparar 50ml de una solución de KOH a una concentración de 20 g/l. A partir de la


Por cada grupo de trabajo se prepararán las soluciones de forma experimental.
7. Nivel de Riesgo:

Manejo de residuos:
• Línea 8
• Línea 4
8. Bibliografías

Disponible en Internet: http://es.wikipedia.org/wiki/Concentraci%C3%B3n
PRACTICA N 10
1. PARÁMETROS BIOQUÍMICOS DE IMPORTANCIA CLÍNICA
2.Objetivos
• Identificar los principales parámetros bioquímicos analizados en la rutina clínica
• Reconocer los valores de referencia de los parámetros bioquímicos críticos en la
salud y vida del paciente.
• Analizar diferentes casos clínicos con base en los valores de referencia descritos y
concluir sobre la posible condición del paciente.
43
3.Marco Teórico
Análisis sanguíneos
Aunque existen diferentes matrices para el análisis de los diferentes parámetros

bioquímicos, tales como orina u otros líquidos corporales, es la sangre (total, suero y
plasma) la muestra más utilizada en la rutina.
Cuando se obtiene un resultado, se compara dentro de unos límites establecidos como
“normales”, llamados valores de referencia. Estos valores permiten comparar un individuo
con lo que en general refleja una población sana, sin embargo, no necesariamente la
alteración de estos parámetros indica presencia de enfermedad, ni estar dentro del rango
indica ausencia de la misma.
Al tomar estos valores como guía, en la interpretación se deben tener en cuenta factores
como la edad, sexo, raza, técnica analítica, muestra, etc. Es necesario que los valores
de referencia sean establecidos en cada laboratorio, siguiendo los estándares
internacionales.
Nota: Tenga en cuenta al momento de leer los resultados las unidades que lo
acompañan.
Glucosa
Es el principal Tipo de azúcar que contiene la sangre la forma de adquirirla es mediante
los alimentos que ingerimos y es la principal fuente de energía
Se aumenta en diabetes mellitus, pancreatitis, desordenes endocrinos, (Ej.,acromegalia,
síndrome de Cushing, feocromocitoma, hiperaldosteronismo), insuficiencia renal crónica,
Stress y tras el consumo de alimentos. Disminuye en enfermedad hepática severa,
hiperinsulinemia, hipoglicemia reactiva, ingestión de etanol, insuficiencia adenocortical.
Se consideran unos valores normales de Glucosa en sangre de 70 a 105 mg/dl, sin
embargo, la PAHO ha propuesto los criterios para diabetes como se muestra a
continuación:
44
Perfil Renal
Nitrógeno Uréico (BUN): Es el producto del metabolismo de las proteínas, valores

normales (19-36 mg/dl), su aumento en sangre se da por enfermedad renal, hemorragia
GI, shock, deshidratación, dieta alta en proteínas y algunos medicamentos como los
corticoesteoides y tetraciclinas.
Disminuye tras falla hepática, desnutrición o por sobrehidratación.
Creatinina: Es el producto de la degradación de la creatina muscular, su eliminación

indica un buen funcionamiento renal. Valores Normales: (0.7 1.3 mg/dl para el hombre y
para la mujer de 0.5 a 1.1. mg/dl)
Se aumenta en insuficiencia renal, daño muscular severo. Su disminución no tiene
significado clínico importante.
Ácido Úrico: se forma como resultado de catabolismo de las purinas. Valores Normales
3.4-7.2 mg/dl en hombres y en mujeres de 2.6 – 6 mg/dl
Se aumenta en enfermedades como la Gota, enfermedad renal crónica, trastornos

hematológicos, ingestión de etanol, necrosis tisular, dieta alta en proteínas. Disminuye
en el tratamiento con ACTH, fármacos uricosúricos, enfermedad de Wilson, alcoholismo
severo con daño hepático.
Perfil Hepático:
Bilirrubinas: Se forman tras la destrucción de los glóbulos rojos que libera la

hemoglobina y esta es transformada hasta bilirrubina.
Su aumento se da en colestasis intra y extra-hepática, enfermedad hepática, hemólisis,
hiperbilirrubinemia congénita, enfermedad de Crigler-Najjar, Dubin-Johnson, y
enfermedad de Gilbert. Su disminución no tiene significado clínico
45
Transaminasas: Son enzimas que actúan generando alanina, glutamato o aspartato, se
encuentran distribuidas en tejido renal, nervioso, hepático, cardiaco y muscular.
Aumentan por destrucción hepatocelular (Ej., hepatitis viral, hepatitis tóxica), infarto del
miocardio, hemólisis, enfermedad músculo-esquelética, infarto pulmonar, enfermedad
biliar obstructiva post-hepática.
Disminuyen durante el embarazo y enfermedad hepática terminal
Albúmina: Es producida en el Hígado y tiene función de transporte y mantenimiento de

la presión oncótica. Aumenta falsamente por deshidratación, disminuye principalmente
por desnutrición, enfermedad hepática, síndromes de malabsorción, pérdidas
gastrointestinales, enfermedad renal, síndrome nefrótico, inflamación, neoplasias,
embarazo.
Perfil Cardiaco
Creatinin Quinasa: (CK, CPK), su concentración es la primera en aumentar (4 horas tras

el IAM), alcanza un máximo tras 24 horas y a partir de entonces disminuye rápidamente.
Puesto que es la primera en disminuir se puede utilizar como marcador de reinfarto.
Existen varias isoenzimas: CK BB (CK-1): cerebro, CK MB (CK-2) corazón y CK MM (CK-
3) músculo esquelético y cardiaco.
CK-MB: Se utiliza para diferenciar daño muscular de daño cardiaco, sin embargo
empieza a aumentar entre 6 y 8 horas.
AST/GOT: Su liberación no es específica del IAM, así enfermedades que afectan al

hígado o al músculo esquelético también aumentan la actividad sérica de esta enzima.
Se debe medir también la ALT/GPT e interpretar así:
a) Aumentan tanto AST como ALT es Alteración hepática
b) Aumenta sólo AST y los niveles de ALT son normales hay una probable alteración
cardiaca.
Troponinas: es un complejo molecular que actúa regulando en el músculo estriado, la

interacción entre actina y miosina mediada por el ión Ca++ (contracción muscular). Está
formado por tres polipéptidos: Troponina C, I y T.
Los polipéptidos I y T presentan isoformas caractarísticas del músculo cardiaco que se
utilizan para diagnosticar el IAM. Sus concentraciones en plasma aumentan entre 4-6
horas después del inicio de la lesión y permanecen elevadas durante mucho tiempo:
·troponina T puede tardar 2 semanas en volver a los valores fisiológicos
·troponina I se normaliza tras 5-10 días. Además, es mucho más específica de músculo
cardiaco y no está influida por otras situaciones clínicas
46
Perfil Lipídico
Está conformado por el Colesterol total, Triglicéridos, HDL y LDL. El perfil lipídico es una
valoración cuyo resultado determina la existencia o no de dislipidemia y de su severidad.
4.Materiales
• Tabla de valores de referencia
Equipos
• No aplica
5. Reactivos
• No aplica
6. Procedimiento
• Realice el análisis de los casos clínicos presentados por su docente.
Preguntas de consulta
11. ¿Qué es intolerancia a la glucosa?
12. Defina Azoemia e hipercalemia
13. ¿Qué pruebas se incluyen en el ionograma?
14. ¿Qué es IAM? Explique la fisiopatología
7. Nivel de Riesgo:
• Nivel 1: Riesgo Bajo (Bata de Laboratorio Manga Larga, Zapato Cerrado Bajo, Pantalón
Largo).
Manejo de residuos:
• No aplica
8. Bibliografías
47
Asociación Española de Neuropatía y Bioterapia. Química sanguínea, significado y
valores. 2014.
http://www.apenb.org/apenbweb/quimica-sanguinea-significado-y-valores/
Universidad Royal College de Canadá. Clinical Laboratory Tests – Reference Values.

2015
http://www.royalcollege.ca/portal/page/portal/rc/common/documents/exams/normal_values_e.pd
f
Organización Panamericana de la Salud PAHO. Guías ALAD de diagnóstico, control y

tratamiento de la Diabetes Mellitus Tipo 2. 2010
http://www1.paho.org/hq/dmdocuments/2010/Guias_ALAD_2009.pdf
Manual Merck MSD. Valores normales de laboratorio: Sangre, plasma y suero.

http://www.msdmanuals.com/es/professional/ap%C3%A9ndices/valores-normales-de-
laboratorio/an%C3%A1lisis-de-sangre-valores-normales#false
Santaló M. Marcadores biológicos de necrosis miocárdica. Revista española de

cardiología. Rev Esp Cardiol. 2003;56:703-20 - Vol. 56 Núm.07 DOI: 10.1157/13049653.
http://www.revespcardiol.org/es/marcadores-biologicos-necrosis-miocardica/articulo/13049653/
9. Anexo
48
49
50
PRACTICA Nº 11
1. UROANALISIS
2.Objetivos
• Reconocer la importancia del examen de la orina como herramienta diagnostica.
• Estudiar las características, físicas, químicas y microscópicas de la orina.
• Correlacionar los resultados con las diferentes patologías.
3. Marco Teórico
El examen general de orina es una de las pruebas más solicitadas dentro del laboratorio
de análisis clínicos e incluye el análisis físico, químico y análisis microscópico. En este
último, se analiza el sedimento urinario en búsqueda de distintos elementos formes
(leucocitos, cilindros, etc.) con diferente utilidad diagnostica. El análisis de sedimento
urinario se puede valorar mediante métodos manuales y automatizados.
Nos da idea también de procesos bacterianos, gracias al urocultivo; y, también, a través
de su sedimento podemos distinguir células, cristales, y ver si existen procesos
inflamatorios.
El empleo rutinario del análisis de orina sirve para detectar determinados componentes
no presentes en individuos sanos.
Podemos obtener una información valiosa para la detección, diagnóstico y valoración de
enfermedades nefrourológicas, incluso pudiendo revelar enfermedades asintomáticas o
silenciosas.
La recolección de la muestra es muy importante, determina la fidelidad de los resultados
y su correcta interpretación. Se debe realizar en un recipiente limpio (de vidrio o plástico),
que no contenga restos de detergentes, grasas o agua oxigenada. No es necesario que
sea estéril. Es recomendable una exhaustiva higiene y enjuague de las manos y
genitales. Se debe desechar los primeros mililitros de orina y recoger el chorro medio de
la micción. Habitualmente, el análisis de orina completo se efectúa sobre la primera orina
de la mañana (de 3 hs. de retención mínima). Algunos análisis específicos requieren la
recolección durante 24 hs (orina de 24 hs.). En este caso es importante recomendar que
una vez obtenida la muestra se la debe conservar en lugar fresco. Si se debe realizar un
cultivo bacteriano de esa muestra (urocultivo), el frasco debe estar estéril.
El examen de rutina incluye 3 partes

1. examen físico
2. examen químico
3. examen microscópico
1) EL EXAMEN FISICO: comprende la descripción del color, aspecto y olor, así como la
determinación de volumen, densidad y pH.
• Aspecto, color y olor: se realiza por observación directa de la orina en un tubo limpio de
vidrio transparente. Normalmente, la orina posee:
Aspecto: límpido
Color: amarillo ámbar
Olor: sui generis
Espuma: blanca, no persistente
Pueden presentarse anomalías:
51
Aspecto turbio: debido a proteinuria, bacteriuria, precipitación de sales (fosfatos
Amónicos en orinas alcalinas o uratos en orinas ácidas.
Color:
- Rojizo: por hematuria, hemoglobinuria, mioglobinuria, ingesta de remolacha.
presencia de cristales de uratos amorfos (no patológico)
- Amarillo intenso, verde oscuro hasta amarronado: bilirrubina
- Caoba: pigmentos biliares o porfirias
- Pardo oscuro, negruzco: alcaptonuria
- Anaranjado: estado febril, tratamiento con rifampicina
- Aspecto opalescente y color blanco amarillento: pus, infección urinaria
Olor: dulce, a frutas o cetónico: cuerpos cetónicos, glucosuria
Espuma persistente: proteinuria, resto de detergente en el frasco de muestra o el tubo.
• Volumen: se determina midiéndolo en una probeta graduada, e indicando el período

de tiempo en que se recolectó la muestra. La diuresis normal es de 1500 ml/24 h. Debido
a que la cantidad de líquido que maneja el riñón es normalmente muy variable, dicha cifra
puede variar en más o en menos.
• Densidad: en condiciones normales, la densidad urinaria tiene un valor entre 1015 y

1025 g/l. Este parámetro hoy en día forma parte de las determinaciones realizadas
utilizando las tirillas reactivas (ver más abajo).
La densidad urinaria aporta información sobre la función renal de concentración dilución
de la orina. Como resultado se pueden obtener orinas de tonicidad (concentración de
solutos) variada, con el objetivo de conservar el equilibrio del agua corporal.
Orinas muy concentradas (hipertónicas con respecto al plasma) aparecen cuando el riñón
tiende a conservar agua por disminución del aporte hídrico, estados febriles, pérdidas
gastrointestinales, diabetes sacarina.
El uso de diuréticos, disminución, ausencia o falta de acción de la hormona antidiurética,
mala nutrición proteica y diabetes insípida son factores que resultan en la formación de
orinas diluidas (hipotónicas con respecto al plasma).
• pH: el riñón es uno de los órganos que junto con el pulmón interviene en la regulación
de la concentración de H+ en el líquido extracelular y lo hace fundamentalmente
regulando la concentración de HCO3 plasmático. Esta función se ejerce a través de la
recuperación de bicarbonato filtrado, producción de nuevo bicarbonato, excreción de
NH4+, H2PO4.
2) EL EXAMEN QUÍMICO: rutinariamente se analiza la presencia de proteínas,

hemoglobina, glucosa, cuerpos cetónicos, sales biliares y bilirrubina. Todas estas
pruebas están incluidas en las tirillas reactivas y normalmente la reacción debe ser
negativa. En caso de observarse reacción positiva, se informa con una a cuatro cruces
(+ a ++++), según la intensidad del color desarrollado. Cabe destacar que esta técnica
aporta resultados semicuantitativos, debiéndose procesar la muestra por métodos de tipo
cuantitativo si se desea establecer la concentración exacta de tales sustancias.
Tirillas reactivas en el laboratorio de análisis clínicos es corriente su uso para investigar
la presencia de varios elementos químicos en la orina.
Las tiras reactivas de orina consisten en unas pequeñas cintas de plástico rígido a las
que van pegados unos cuadraditos impregnados de reactivos, que son diferentes
dependiendo de lo que se quiera analizar. Si el compuesto que se quiere analizar se
encuentra en la muestra, se pone en contacto con los reactivos presentes en el
cuadradito, produciendo una reacción de color fácilmente observable. Además de ser
52
positivo (cambio de color) o negativo (sin cambio), las diferentes intensidades de color
darán idea de la cantidad de compuesto analizado presente en la muestra, permitiendo
una semicuantificación de dicho compuesto. La semicuantificación se logra por
comparación del color desarrollado por la muestra con una curva de calibración que
provee el fabricante como 5-6 recuadros con tonalidades relacionadas con la
concentración correspondiente a cada metabolito que se quiere analizar. Si el análisis de
un metabolito da positivo con las tirillas reactivas, su cuantificación exacta deberá
realizarse con otro método químico, más específico y sensible.
De esta manera se puede determinar: densidad, pH, leucocitos, nitritos, proteínas,
glucosa, cuerpos cetónicos, urobilinógenos, bilirrubina, hemoglobina y sangre.
La ventaja de este método es que es muy rápido y muy específico ya que cada tira tiene
diversos segmentos en los cuáles está el reactivo apropiado para cada determinación.
Descripción de las determinaciones incluidas en las tirillas reactivas
− pH: la tirilla contiene una mezcla de indicadores de pH que en contacto con la orina
dan una nítida graduación de colores, desde el naranja (pH 5) al azul (pH 9).
Resultado normal: 5-6 en orina fresca.
− Leucocitos: los granulocitos (un tipo de leucocitos) poseen la enzima esterasa, que
reacciona con los reactivos de la tirilla dando un producto de color violeta.
Resultado normal: negativo (no existe límite definido entre la excreción fisiológica y
patológicamente elevada de leucocitos. Mayormente se indica 10 a 20 leucocitos/ul como
síntoma sospechoso y más de 20 como hallazgo patológico).
− Nitritos: se utiliza una amina que en medio ácido reacciona con dando una sal de
diazonio, que reacciona con un cromógeno para formar color rosado.
Resultado normal: negativo.
− Proteínas: la tirilla contiene un indicador que en presencia de proteínas vira del amarillo
al verde.
Resultado normal: negativo (hasta 30 mg% en orina matinal, la tirilla no detecta esta
cantidad).
La excreción de proteínas por orina debe ser menor a 150 mg/día. Este valor da una
reacción negativa con los métodos usuales de determinación cualitativa. Si la reacción
da positiva, se debe determinar la concentración en una muestra de orina de 24 hs con
un método químico.
La proteinuria suele deberse a las siguientes causas:
- Aumento de proteínas plasmáticas normales y anormales.
- Aumento de permeabilidad glomerular
- Disminución de la reabsorción de polipéptidos y proteínas de bajo PM que normalmente
filtran por el glomérulo.
- Alteraciones hemodinámicas, entre las que cabe destacar el ejercicio, cambios de
posición de decúbito a erecta, fiebre, etc.
La proteinuria no siempre se acompaña de lesiones en el parénquima renal. Sin embargo,
la proteinuria persistente que supera los 750 mg/24 hs es un indicador de lesión en el
parénquima renal.
− Glucosa: La glucosa, por la glucosa oxidasa presente en la tira, se oxida a

gluconolactona y peróxido de hidrógeno. El agua oxigenada, en presencia de la
peroxidasa también presente en la tirilla, oxida a su vez un indicador. La cantidad de
producto formado da una gama de color entre amarillo al verde.
Resultado normal: negativo (glucosuria fisiológica hasta 15 mg% en orina matinal, la tirilla
no la detecta).
53
La glucosa filtrada en el glomérulo se reabsorbe casi completamente en el túbulo
contorneado proximal. Este proceso es realizado por un transportador de membrana que
se satura con concentraciones de glucosa superiores a 180 mg%; en estas circunstancias
la glucosa no reabsorbida permanece en líquido luminal y se excreta por orina. La causa
más común de glucosuria es la diabetes mellitus no controlada.
Dado que la glucemia normal está comprendida entre 70 y 110 mg%, la presencia de
glucosuria es indicativa de hiperglucemia en caso de indemnidad tubular. Existen un
número de entidades caracterizadas por anomalías a nivel tubular que presentan intensa
glucosuria sin la coexistencia de hiperglucemia.
− Cuerpos cetónicos: sólo el acetoacetato y la acetona reaccionan con nitroprusiato de

sodio y glicina en medio alcalino dando un complejo de color violeta. El β-hidroxibutirato
no reacciona.
Resultado normal: negativo (hasta 5 mg% en orina matinal, la tirilla no los detecta)
Los cuerpos cetónicos se forman cuando el aporte de ácidos grasos al hígado supera su
capacidad de utilización del Acetil-CoA. Se vierten entonces a sangre desde donde son
captados por órganos aeróbicos para su oxidación y obtención de energía. La acetona
se elimina por el aliento, mientras que el acetoacetato y el β-hidroxibutirato lo hacen por
orina. Su eliminación sólo ocurre en cantidades apreciables cuando su síntesis es
desmedida, como ocurre en la diabetes mellitus descompensada, en el ayuno prolongado
y procesos febriles. En estos casos se detecta cetonemia (presencia en sangre en
cantidades elevadas) y cetonuria (presencia en orina).
− Urobilinógeno: el urobilinógeno reacciona en medio ácido con una sal de diazonio,

dando un compuesto rojo.
Resultado normal: hasta 1 mg%.
Urobilina y urobilinógeno aumentan por hemólisis y trastornos hepáticos.
− Bilirrubina: la bilirrubina reacciona con una sal de diazonio en medio ácido, dando un
compuesto rosa violáceo.
Resultado normal: negativo.
La bilirrubina presente en orina es de tipo conjugada, forma hidrosoluble que se filtra en
el glomérulo renal, al que llega luego de pasar por la circulación enterohepática.
La bilirrubina está ausente en la orina en casos de ictericia hemolítica y aumentada en
casos de hepatitis, ictericia obstructiva o neoplasias de cabeza de páncreas.
− Sangre: la hemoglobina tiene actividad seudo-peroxidásica, por eso es capaz de liberar

O2 a partir del H2O2. En las tirillas reactivas se acopla esta producción de oxígeno a la
oxidación del indicador bencidina (forma oxidada azul verdoso). Si la muestra contiene
eritrocitos intactos (hematuria), se ven como puntos verdes aislados o en grupos sobre
el fondo amarillo. Si hay hemoglobinuria (hemoglobina libre en orina) el color verde es
homogéneo. Estos resultados se deben corroborar con la observación del sedimento
urinario.
Resultado normal: negativo (hasta 5 eritrocitos/ul).
En situaciones específicas y obedeciendo a patologías diagnosticadas o presuntivas
puede determinarse la concentración de ciertos componentes urinarios, como o
Electrolitos (Ionograma urinario): Na+ o No electrolitos: urea, creatinina, ácido úrico,
hormonas y sus metabolitos, enzimas, fármacos y sus metabolitos, tóxicos y sus
metabolitos, etc.
54
• Urea: es la principal forma de excreción del grupo amino de los aminoácidos. La misma
se filtra libremente por el glomérulo y es parcialmente secretada y reabsorbida a nivel de
los túbulos. Su excreción urinaria depende de las proteínas de la dieta, por tal motivo el
aclaramiento renal de la misma no es una expresión fidedigna del funcionamiento renal.
Por ello, el clearance de urea no se usa para evaluar el funcionamiento renal. Cabe acotar
que la concentración plasmática de urea se elevará recién cuando el deterioro renal
afecte a más del 50% del parénquima.
La excreción de urea se incrementa fisiológicamente por ejercicio y dietas ricas en
proteínas y patológicamente en estados febriles y catabólicos.
Durante el crecimiento, embarazo y bajo consumo de proteínas en la dieta disminuye la
concentración de urea urinaria. Estados patológicos hepáticos y renales tienen la misma
consecuencia.
• Creatinina: resultado de la transformación espontánea de la fosfocreatina muscular.

Este compuesto filtra libremente en glomérulo y prácticamente no es secretada o
reabsorbida a nivel de los túbulos. A diferencia de la urea, la excreción de creatinina no
depende de la proteína dietaría, encontrándose sujeta únicamente a la masa muscular.
Estas circunstancias hacen que el aclaramiento renal de creatinina (clearance) sea un
recurso clínico para el diagnóstico y control evolutivo de la insuficiencia renal. Sumado a
esta característica se asocia la buena relación entre la disminución del clearance de
creatinina y la elevación de su concentración en plasma.
Pacientes obesos, asténicos, hipertiroideos, insuficientes renales o con distrofias
musculares tienen una baja excreción urinaria de creatinina. Por el contrario, este
parámetro aumenta en el hipotiroidismo, diabetes y en individuos musculosos.
• Ácido úrico: producto final del catabolismo de las bases púricas, excretado por orina.
Debido a que el pKa del N9 es 5.5 y el del N1 es 10.3, a pH plasmático fisiológico se
encuentra en forma de urato monosódico. En orina, el estado iónico dependerá del pH:
si el pH urinario es menor que 5.75, se encontrará predominantemente como ácido úrico
y si es mayor en forma de urato. El ácido es soluble hasta concentraciones de 6-7 mg%,
precipitando en concentraciones mayores. En esa situación se puede precipitar en el
parénquima renal o en las vías urinarias, llevando a cambios histológicos que conducen
a nefropatías o a urolitiasis, respectivamente.
Fisiológicamente, la uricosuria aumenta con la ingesta de proteínas y disminuye con
dietas ricas en glúcidos y grasas o pobres en proteínas. En patologías hepáticas y
leucemia aumentan los valores de concentración urinaria de úrico. Durante el ataque
agudo de gota, la uricosuria está disminuida, al igual que en casos de insuficiencia renal.
3) EXAMEN MICROSCÓPICO (Sedimento urinario)

El examen del sedimento presente en una orina recién emitida o conservada
cuidadosamente puede constituirse en lo más importante del análisis de orina ya que
puede proveer datos precisos sobre la existencia de una enfermedad renal y sobre la
naturaleza y extensión de la lesión.
La orina previamente homogeneizada en forma suave se pasa a un tubo cónico y se la
centrifuga a baja velocidad, para evitar la deformación exagerada de los elementos a
investigar. Luego se elimina el sobrenadante por inversión del tubo, y se resuspende el
precipitado en la pequeña cantidad de orina que queda en el tubo. Esta muestra se coloca
entre porta y cubreobjetos limpios, observando al microscopio. La observación del
sedimento debe ser hecha en lo posible sobre la orina fresca, con no más de 6 h de
emitida, con preferencia sobre la orina de la mañana que es más concentrada. Es
55
recomendable guardar la muestra en la nevera si el examen no se realiza en forma
inmediata.
En el sedimento urinario podemos distinguir cualitativamente:
• Componentes inorgánicos: cristales inorgánicos de diferentes tipos.
• Componentes orgánicos: distintos tipos de células y cilindros, cristales orgánicos y
microorganismos.
4. Materiales, Equipos e insumos

• Tubos para centrifuga
• Cubreobjetos
• Portaobjetos
• Pipetas Pasteur
Equipos
Centrifuga
Microscopio
5. Reactivos
• Tiras reactivas
6. Procedimiento
A. Examen físico:
- Tome la orina y deposítela en un tubo para centrifuga, observe el color y anótelo en la
tabla de resultados.
B. Examen Químico
- Sumerja totalmente la tirilla hasta el último cuadro reactivo.

- Un minuto después se comparan los diferentes reactivos sometidos a la muestra con el
ítem estandarizado respectivo que aparece en el envase de las tirillas.
- Anote los resultados en la tabla.
C. Examen microscópico
56
- Posteriormente rotulamos el tubo de ensayo y lo colocamos en la centrifugadora durante
10minutos a 3000 revoluciones/minuto.
- Pasados los 10 minutos, vaciamos la orina en el grifo, y el sedimento que queda en el
fondo del tubo, lo depositamos en una lámina, cubrimos con una laminilla y queda listo
para el análisis directo al microscopio. Observe en objetivo de 10X y luego pase a 40X,
para observar mejor las estructuras.
D. Interpretación de Resultados
- El examen químico arrojo parámetros consignados en la tabla, como puede explicar

los resultados?
- Cuales fueron las estructuras que se encontraron al examen microscópico y que
interés clínico poseen?
- Observando todos los resultados que puede concluir?
Cuestionario
1. ¿Qué patologías se pueden asociar al análisis de orina?
2. ¿Cómo puede correlacionar con los resultados una infección renal?
3. ¿Qué biomarcadores se pueden obtener de la orina como una opción alterna a la
biopsia renal?
7. Nivel de Riesgo:

Manejo de residuos:
• Línea 19
8. Bibliografías
57
Laso Maria del Carmen. Interpretación del análisis de orina. Pediatria práctica. 2002.
Arch.argent.pediatr ; 100(2) / 179.
Martha E. Baños-Laredo, Carlos A. Nuñez Alvarez, Javier Cabiedes. Análisis de

sedimento urinario. Reumatología clínica. 268-272.
Campuzano Maya Germán, Arbeláez Gómez Mario. El uroanalísis, un gran aliado del
médico. Urología Colombiana. 67.92.
58

Manual de Laboratorio Bioquimica Clinica Nutri-Fisio

Cargado por

Información del documento

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Manual de Laboratorio Bioquimica Clinica Nutri-Fisio

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

MANUAL DE LABORATORIO DE

MARÍA DEL PILAR TRUJILLO

CARMEN ROSA CONTRERAS MONTAÑEZ

OMAIRA CAÑAS BERMUDEZ

Practica 2: Soluciones Buffer 8

Practica 3: Precipitación diferencial de Proteínas 12

Practica 4: Reacciones Enzimáticas 16

Practica 5: Factores que afectan las reacciones Enzimáticas 18

Practica 6: Fermentación Alcohólica 22

Practica 7: Soluciones y diluciones 26

Practica 8: Diluciones en serie 37

Practica 9: Diluciones no seriadas 41

Practica 10: Parámetros Bioquímicos de importancia clínica – casos clínicos 43

Practica 11: Uroanálisis 51

Normas de bioseguridad en el laboratorio:

• Se exige puntual asistencia.

• Nivel 1: Riesgo Bajo (Bata de Laboratorio Manga Larga, Zapato Cerrado

• Nivel 2: Riesgo Medio (Bata de Laboratorio, Guantes, Cofia, Tapabocas,

• Nivel 3: Riesgo Alto (Bata, Mascara Respiratorias, Guantes, Cofia, Gafas de

Sistema de precauciones universales.

Este sistema fue establecido por el Centro de Control de Enfermedades (C.D.C) de

Las precauciones universales parten del siguiente principio:

“Todos los pacientes y sus fluidos corporales independientemente del diagnóstico

Líquidos de precaución universal

La bioseguridad en el laboratorio se refiere a un conjunto de protocolos de trabajo que

Tipos de daños o lesiones

Señalización, signos y recomendaciones

Algunos símbolos designan peligros:

Primarias: Localizadas en torno al origen del riesgo. Ejemplo, hacer la práctica

Secundarias: Localizadas en el círculo del practicante. Ejemplo, la relacionada con la

Terciarias: Localizadas alrededor del laboratorio. Ejemplo, material tóxico del

Disponible en Internet: http://www.qo.fcen.uba.ar/normas.htm.

Sistemas de Tampón - Soluciones Buffer – Sistemas Amortiguadores

Una solución amortiguadora consiste en una mezcla de un ácido débil y su base

Las soluciones amortiguadoras pueden mantener el pH en un valor relativamente

La condición de que un amortiguador contenga cantidades apreciables tanto de ácido

Cuando estudiamos los amortiguadores en teoría, es común usar la ecuación de

La proporción de ácido fórmico/formiato necesario para mantener el ph de 4.0 se puede

Ph= pka+log base conjugada/ácido débil.

4.0=3.75 +log  HCOO / HCOOH .

Para calcular la proporción base/ácido, restamos 3.75 de 4.0, y tomamos el antilogaritmo

 HCOO / HCOOH = 100.25= 1.78

Una buena parte de la bioquímica se estudia efectuando reacciones enzimáticas en un

A. Cálculos para preparar la siguiente solución amortiguadora

pH = pKa + log A-/AH

B. Medición de pH de las soluciones sin ácido y sin base

C. Medición de pH de las soluciones con ácido

D. Medición de pH de las soluciones con base

• Nivel 2: Riesgo Medio (Bata de Laboratorio, Guantes, Cofia, Tapabocas, Zapato

Campbell, M. K, Farell, S. O. Bioquímica.4ª Ed .México. Thomson. 2004. P. -53-55.

1. PRECIPITACIÓN DIFERENCIAL DE PROTEÍNAS

La sangre está constituida por formas celulares en suspensión (eritrocitos, leucocitos y

Precipitación con fuerza iónica

Las proteínas se mantienen disueltas gracias a las interacciones no covalentes (puentes

El aumento de la fuerza iónica hasta un determinado punto aumenta la solubilidad de las

A partir de una mezcla de proteínas, en esta práctica se harán precipitaciones al 40% y

El volumen de la solución saturada de sulfato de amonio necesario para una determinada

Identificación de proteínas mediante la reacción con el reactivo de Biuret

La presencia de proteínas en una mezcla se puede determinar mediante la reacción del

A. Cálculos del volumen de la solución saturante:

Coloque en un tubo de ensayo 3 ml de solución de proteínas de saturación inicial S1 (0%)

Obtenga del sobrenadante anterior 1 ml en un tubo y márquelo como 40 %, mida el

• Nivel 2: Riesgo Medio (Bata de Laboratorio, Guantes, Cofia, Tapabocas, Zapato