Manual Bioquimica Clinica ENFERMERIA V3

Código FGA-73 v.
02
Manual de Prácticas Bioquímica
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MANUAL DE LABORATORIO DE
BIOQUIMICA CLINICA
(ENFERMERIA)
MARÍA DEL PILAR TRUJILLO

Bacterióloga y Laboratorista Clínico U. Javeriana
Maestría en Biología U. Javeriana
pilartrujillo@unipamplona.edu.co
CARMEN ROSA CONTRERAS MONTAÑEZ

Química Farmacéutica U. Nacional
Especialista Administración de Servicios de Salud U. de Antioquia
Magíster en Salud Pública U. de Antioquia
carmenrcontrerasm@unipamplona.edu.co
DIANA RIOS DIAZ

Bacterióloga y Laboratorista Clínica UP
MSc. Toxicología UN
diana.rios@unipamplona.edu.co
OMAIRA CAÑAS BERMÚDEZ

Bacterióloga y Laboratorista Clínico UDES
Magíster en Bioquímica U. de Pamplona
omairacbermudez@unipamplona.edu.co
UNIVERSIDAD DE PAMPLONA
FACULTAD DE SALUD
DEPARTAMENTO DE BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO
PAMPLONA
DEPARTAMENTO NORTE DE SANTANDER
COLOMBIA
2022
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INDICE DE CONTENIDO
Introducción
Normas de seguridad
Pág.
Práctica 1: Bioseguridad 5
Práctica 2: Reconocimiento de material de laboratorio 9
Práctica 3: Soluciones Buffer 17
Práctica 4: Gases Arteriales: Casos Clínicos 22
Práctica 5: Soluciones y Diluciones 32
Práctica 6: Diluciones en Serie 44
Práctica 7: Diluciones no Seriadas 49
Práctica 8: Precipitación de Proteínas 52
Práctica 9: Hemoclasificación 56
Práctica 10: Reacciones Enzimáticas 63
Práctica 11: Factores que afectan las reacciones enzimáticas 66
Práctica 12: Fermentación Alcohólica 70
Práctica 13: Toma de Muestras Sanguíneas 74
Práctica 14: Determinación de Lípidos por Colorimetría 81
Práctica 15: Parámetros Bioquímicos de Importancia Clínica 84
Práctica 16: Uroanálisis 91

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INTRODUCCION
En este manual se ha querido recopilar las principales pruebas y las de mayor utilidad
en el campo de la Bioquímica.
Los conocimientos aportados por la Bioquímica Clínica no sólo permiten entender mejor
la manera en la que están estructuradas las células y los tejidos, el funcionamiento del
organismo y cuáles son los fundamentos de la patogénesis existente, sino que
proporcionan las bases para el uso racional de las estrategias terapéuticas,
principalmente en el campo del descubrimiento de fármacos efectivos con un mínimo
de efectos indeseables.
Esperamos que estos ensayos básicos aporten al desarrollo de la Bioquímica Clínica
en nuestro país, pues se han escogido ensayos muy sencillos y de fácil realización en
cualquier laboratorio.
NORMAS DE SEGURIDAD
Normas sobre el manejo de reactivos químicos:
• Leer atentamente la etiqueta de identificación del reactivo.
• Verificar que se esté empleando la sustancia indicada.
• Verificar el grado de peligrosidad.
• Conocer cómo va a reaccionar (al diluir ácidos fuertes, añadir siempre el ácido
al agua, nunca lo contrario, y hacerlo lentamente).
• No pipetear con la boca. Usar dispensadores o pipetas automáticas.
• Medir solo las cantidades de reactivos necesarios para el trabajo experimental
y depositarlos en material de vidrio limpio y seco.
• No dejar los frascos destapados o abandonados sobre las mesas de trabajo.
Una vez utilizados taparlos y guardarlos o dejarlos en el lugar indicado.
• No coger los frascos de los reactivos por el cuello.
En general, si los productos no lleven señalización de seguridad, no quiere decir que

no sean peligrosos, pregunte a su profesor antes de usarlos.
Normas de bioseguridad en el laboratorio:
• Se exige puntual asistencia.

• Usar gafas de protección.
• Usar guantes.
• Evitar el uso de joyas (anillos y colgantes).
• Atarse el pelo largo para evitar accidentes con la llama del mechero.
• Usar encendedores de chispa por fricción y no fósforos.
• No cambiar de lugar equipos, materiales y reactivos.
• No comer, beber, fumar, almacenar alimentos, aplicar cosméticos, ni recibir
visitas.
• Realizar todos los procedimientos técnicos en la forma indicada.
• Usar los gabinetes de seguridad biológica, como son las campanas de
extracción cuando se realizan procedimientos que pueden formar aerosoles
infecciosos.
• Descontaminar las superficies de los mesones de trabajo inmediatamente
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después de derrames de material infeccioso.

• Desechar los productos químicos, desechos biológicos y otros desperdicios en
los lugares indicados.
• Secar bien las manos antes de iniciar el trabajo.
• No trabajar con equipos eléctricos defectuosos, o si se ha derramado unreactivo
sobre ellos.
• Lavar y secar el material antes y después de ser empleado.
• Leer la guía de trabajo correspondiente y seguir sus instrucciones
estrictamente.
• Llevar a la práctica: MANUAL DE TRABAJO, CUADERNO DE LABORATORIO,
EQUIPO DE BIOSEGURIDAD, UNA TOALLA O PAÑOS DESECHABLES,
PIPETEADOR, CINTA DE ENMASCARAR, O MARCADOR DE VIDRIO,
DETERGENTE LÍQUIDO Y DEMÁS MATERIALES QUE SE LES SOLICITEN EN
CADA PRÁCTICA. Los alumnos son responsables del material de laboratorio
que se les entregue.
• Si durante el período de prácticas, algún material es dañado por éste, se exigirá
la reposición del mismo para el siguiente período de práctica. En este sentido el
estudiante deberá llenar una planilla de Control de Material Roto.
• Una vez concluido el trabajo experimental, todo el material de vidrio utilizado
debe regresarse, limpio y seco a sus respectivos lugares.
• Usar los implementos de bioseguridad de acuerdo al riesgo de cada practica:
Niveles De Riesgo:
• Nivel 1: Riesgo Bajo (Bata de Laboratorio Manga Larga, Zapato Cerrado

Bajo, Pantalón Largo).
• Nivel 2: Riesgo Medio (Bata de Laboratorio, Guantes, Cofia, Tapabocas,

Zapato Cerrado Bajo, Pantalón Largo).
• Nivel 3: Riesgo Alto (Bata, Mascara Respiratorias, Guantes, Cofia, Gafas

de Seguridad, Zapato Cerrado Bajo, Pantalón Largo).
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PRACTICAS:
PRACTICA Nº 1
1. BIOSEGURIDAD
2. Objetivos:
• Conocer las medidas preventivas para controlar los factores de riesgo procedentes
de los agentes biológicos, físicos o químicos.
• Aplicar el concepto de bioseguridad en el laboratorio.
• Identificar las señales y símbolos relacionados con la seguridad en el laboratorio.
• Reconocer las medidas generales de seguridad en el laboratorio.
3.Marco Teórico
La Bioseguridad, se define como el conjunto de medidas preventivas, destinadas a
mantener el control de factores de riesgo laborales procedentes de agentes biológicos,
físicos o químicos, logrando la prevención de impactos nocivos, asegurando que el
desarrollo o producto final de dichos procedimientos no atenten contra la salud y
seguridad de trabajadores de la salud, pacientes, visitantes y el medio ambiente.
Sistema de precauciones universales.
Este sistema fue establecido por el Centro de Control de Enfermedades (C.D.C) de

Atlanta, en 1987, a través de un grupo de expertos quienes desarrollaron guías para
prevenir la transmisión y control de la infección por VIH y otros patógenos provenientes
de la sangre hacia los trabajadores de la salud y sus pacientes. En el cual se
recomendó que todas las Instituciones de Salud adoptaran una política de control de la
infección, que denominaron “Precauciones Universales”. Se entienden como
Precauciones Universales al conjunto de técnicas y procedimientos destinados a
proteger al personal que conforma el equipo de salud de la posible infección con ciertos
agentes, principalmente Virus de la Inmunodeficiencia Humana, Virus de la Hepatitis B,
Virus de la Hepatitis C, entre otros, durante las actividades de atención a pacientes o
durante el trabajo con sus fluidos o tejidos corporales.
Las precauciones universales parten del siguiente principio:
“Todos los pacientes y sus fluidos corporales independientemente del

diagnóstico de ingreso o motivo por el cual haya entrado al hospital o clínica,
deberán ser considerados como potencialmente infectantes y se debe tomar las
precauciones necesarias para prevenir que ocurra transmisión.” Es así que el
trabajador de la salud debe asumir que cualquier paciente puede estar infectado por
algún agente transmisible por sangre y que, por tanto, debe protegerse con los medios
adecuados.
Líquidos de precaución universal

Los líquidos que se consideran como potencialmente infectantes son:
· Sangre.
· Semen.
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· Secreción vaginal.
· Leche materna.
· Líquido cefalorraquídeo.
· Líquido sinovial.
· Líquido pleural.
· Líquido amniótico.
· Líquido peritoneal.
· Líquido pericárdico.
· Cualquier otro líquido contaminado con sangre.
Las heces, orina, secreción nasal, esputo, vómito y saliva, no se consideran líquidos
potencialmente infectantes, excepto si están visiblemente contaminados con sangre.
Para que la transmisión del VIH pueda ser efectiva es necesario que el virus viable,
procedente de un individuo infectado, atraviese las barreras naturales, la piel o las
mucosas. Esto ocurre cuando las secreciones contaminadas con una cantidad suficiente
de partículas virales libres y de células infectadas, entran en contacto conlos tejidos
de una persona a través de una solución de continuidad de la piel (cómo úlceras,
dermatitis, escoriaciones y traumatismos con elementos cortopunzantes) o contacto
directo con las mucosas.
El Virus de la Hepatitis B posee una mayor capacidad de infección que el VIH; se estima
que un contacto con el virus a través de los mecanismos de transmisiónocupacional,
pinchazos con agujas contaminadas con sangre de pacientes portadores,desarrollan la
infección hasta un 30 - 40% de los individuos expuestos, mientras que con el VIH es
menor del 1% el riesgo ocupacional. Sin embargo, el riesgo de adquirir accidentalmente
y desarrollar la enfermedad con el VIH y el VHB existe.1
Bioseguridad en el laboratorio
La bioseguridad en el laboratorio se refiere a un conjunto de protocolos de trabajo que

suministra el conocimiento del riesgo, las normas de prevención y las indicaciones de
actuación para cuando ocurra un accidente. La seguridad incluye dos factores
determinantes: el factor objetivo relativo al riesgo y el factor humano, quien es el que lo
maneja y toma las respectivas precauciones.
Tipos de daños o lesiones

Los daños que se pueden presentar incluyen, los de efecto inmediato, por ejemplo, la
quemadura por un ácido y los indirectos, es decir, que no se manifiestan en el momento;
por ejemplo, la exposición a una sustancia tóxica, la contaminación por mal manejo de
material biológico.
Señalización, signos y recomendaciones

La señalización normalizada es necesaria para la seguridad, pues indica de manera
inmediata los posibles peligros de carácter general. Existen múltiples señales
reconocidas internacionalmente que informan aspectos diferentes. Uno de ellos es la
NFPA (National Fire Protection Association) que utiliza una escala numérica para indicar
el peligro de un producto, 0 (sin peligro) a 4 (peligro máximo). Estos números clasifican
diferentes colores así:
1MINISTERIO DE SALUD. Conductas Básicas En Bioseguridad: Manejo Integral. Santa Fe de Bogotá. 1997. P. 8-9.
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• Riesgos para la salud-color azul.

• Inflamable-color rojo.
• Grado de inestabilidad de compuestos-color amarillo.
• Por su parte, en la sección blanca puede haber indicaciones especiales para algunos
materiales, indicando que son oxidantes, corrosivos, reactivos con agua o
radiactivos.
Algunos símbolos designan peligros (Pictogramas de Seguridad)
Existen otras señales como las del sistema globalmente armonizado SGA, para la
clasificación y etiquetado de las sustancias químicas:
• Atención a sustancias explosivas.

• Materias que aumentan la combustibilidad.
• Atención a sustancias inflamables.
• Veneno.
• Sustancias agresivas.
• Perjudicial para la salud.
• Atención sustancias radiactivas.
Precauciones de importancia
Llevar guantes puestos.
Uso de máscaras anti-gas.
Señales de salvamento
• Se deben colocar en las salidas de emergencia.
• Productos que no llevan señalización de seguridad, no quiere decir que no sean
peligrosos.
• Normas de seguridad para el personal de laboratorio.
• La seguridad como prevención viene definida por una serie de barreras:
Primarias: Localizadas en torno al origen del riesgo. Ejemplo, hacer la práctica

adecuadamente.
Secundarias: Localizadas en el círculo del practicante. Ejemplo, la relacionada con la

higiene personal (pelo recogido para evitar que se queme con los mecheros, o que
provoque la caída de tubos de ensayo y reactivos).
Terciarias: Localizadas alrededor del laboratorio. Ejemplo, material tóxico del

laboratorio.2
Nota: Los laboratorios de la Universidad de Pamplona se rigen por el manual MLA - 01

V.01
4. Materiales
No aplica.
5. Reactivos
No aplica.
2
Disponible en Internet: http://www.ecomed.org.ar/notas/articulos/varios/down/articulos_bioseguridad.pdf
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6. Procedimiento
• Organice grupos de trabajo.
• Lea detenidamente las normas de seguridad escritas en la guía e información
anexa y socialice las normas.
Cuestionario
• Dibuje los símbolos que indican peligros, señales de prohibición y precauciones
importantes.
• Consulte cuál es la utilidad de las claves R-S.
• Consulte los riesgos relativos al manejo de los siguientes equipos:
• Centrífugas.
• Espectrofotómetros.
• Baños serológicos.
• Campanas extractoras.
• Balanzas.
7. Nivel de Riesgo:
• Nivel 1: Riesgo Bajo (Bata de Laboratorio Manga Larga, Zapato Cerrado Bajo,
Pantalón Largo).
Manejo de residuos:
• No aplica
8. Bibliografías
MINISTERIO DE SALUD. Conductas Básicas En Bioseguridad: Manejo Integral.
Bogotá D.C. 1997. P. 8-9.
Disponible en Internet:
http://www.ecomed.org.ar/notas/articulos/varios/down/articulos_bioseguridad.pdf
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PRACTICA Nº 2
1. RECONOCIMIENTO DE MATERIAL DE LABORATORIO
2. Objetivos:
•Reconocer y manejar adecuadamente el material de laboratorio

•Clasificar el material de acuerdo a su utilidad
3. Marco Teórico:
Es prioritario que antes de cada práctica, el material de trabajo a utilizar sea reconocido,
para identificar que clase se requiere en cada una de ellas, el uso equivocado provocará
errores de precisión, exactitud, entre otras, así como un riesgo latente en el laboratorio.
De acuerdo a lo anterior, los materiales de laboratorio se clasifican de la siguiente manera:
• Volumétrico: Dentro de este grupo se encuentran los materiales de vidrio calibrados a

Una temperatura dada, permite medir volúmenes exactos de sustancias (matraces,
pipetas, buretas, probetas graduadas).
• Calentamiento o sostén: son aquellos que sirven para realizar mezclas o reacciones y
que, además pueden ser sometidos a calentamiento (vaso de precipitado, erlenmeyer,
cristalizador, vidrio de reloj, balón, tubo de ensayo).
• Equipos de medición: es un instrumento que se usa para comparar magnitudes

físicas
mediante un proceso de medición. Como unidades de medida se utilizan objetos y
sucesos previamente establecidos como estándares o patrones y de la medición resulta
un número que es la relación entre el objeto de estudio y la unidad de referencia. Los
instrumentos de medición son el medio por el que se hace esta conversión. Ejs: balanza,
pHmetro, termómetro.
• Equipos especiales: Equipos auxiliares para el trabajo de laboratorio. Ejs: centrífuga,

estufa, baño termostático, etc.3-4
3
Disponible en Internet: https://www.coursehero.com/file/15755151/lab1/
4
Disponible en Internet: https://tecnologicocomfenalco.edu.co/wp-
content/uploads/librosinvestigacion/LABORATORIO%20DE%20QUIMICA_0.pdf
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GRÁFICO USOS NOMBRE

- Permite contener sustancias BALÓN
- Se puede calentar
Tiene fondo redondo y seutiliza
con otros materiales, formando
equipos.
- Son balones con un tubo

lateral que permite la
circulación de vapores en la BALÓN DE
destilación (donde se usa con DESTILACIÓN
el refrigerante). Está diseñado
para calentamiento uniforme.
- Material de contención de
sustancias.
- Se puede calentar.
- Se emplea en las ERLENMEYER
titulacionespor su forma
cónica.
- Hay de distintas
capacidades.
- Material volumétrico usado
para preparar soluciones.
- Presentan marca o aforo en
el cuello, que indica el volumen
del líquido contenido. Miden un MATRAZ
volumen único. AFORADO
- Calibrados, no se pueden
calentar.
Hay de diversas medidas: 100
mL, 250 mL, 500 mL, etc.
- Se usa con papel de filtro

parafiltrar sustancias.
- Puede utilizarse para EMBUDO
trasvasarlíquidos. CÓNICO DE
- Hay de vidrio o plástico 60°
- Metálico
- Sostiene materiales que
seráncalentados. TRÍPODE
- Se usa con una tela
deamianto.
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- Material de
contención. TUBOS DE ENSAYO
- Se puede calentar
- Para realizar
reacciones en
pequeña escala.
- Hay en varias
medidas.
- Sistema de
circulación de agua
a contracorriente, REFRIGERANTE
utilizado para
condensar vapores
en la destilación.
- Igual que el
anterior pero con REFRIGERANTE
bolas en el tubo GRAHAM
interior queaumentan
superficie de
contacto.
(refrigerante a bolas)
Material de metal usado
para sujetar otros
materiales como aros, DOBLE NUECES
agarraderas, pinzas al
pieuniversal.
Es una pieza que posee
2 agujeros con dos
tornillos opuestos. Uno
de los agujeros se utiliza
para ajustar la doble
nuez al soporte
universal, mientras que
en el otro se coloca y
ajusta la pieza a sujetar
- Recipiente que
contiene aguadestilada,
para limpieza del PISETAS
material, o enrasado de
matraces con
soluciones.
- Pueden usarse con
alcohol.
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- Contiene los tubos de GRADILLAS

ensayo. METÁLICASO
- Hay metálicas o de DE MADERA
madera.
- Conducción de
agua en elequipo
de destilación TUBOS DE GOMA
- Para realizar
conexiones alarmar
distintos equipos.
- Permiten la limpieza
del material de
laboratorio: tubos de CEPILLOS
ensayo, matraces, LIMPIADORES
balones, etc.
- Hay de distintos
tamaños
- Es una tela de
alambre con el centro
de asbesto, que TELA METÁLICA
permite concentrar o CONCENTRO DE
distribuir mejor el calor. AMIANTO
- Se usa junto al
trípode o aros
metálicos para
calentar.
- Permite el
calentamiento de
sustancias a alta CAPSULAS
temperatura.
- Generalmente
son de
porcelana.
- Permiten sujetar
el refrigerante al
pie universaljunto AGARRADERAS
con la doble nuez.
- Se utiliza para
evaporar solvente y CRISTALIZADOR
cristalizar sustancias
aprovechando su
extensa superficie de
contacto.
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- Trituración de sólidos
conpilón.
- Para mezclar sustancias.
- Se fabrican de MORTEROS
vidrio o
porcelana.
- Recipiente de
contención.
- Para disolución de
sustancias, VASO DE
- realizar reacciones PRECIPITADOS
químicas.
- Se pueden calentar.
- Hay de vidrio o de
plástico yde diferentes
volúmenes.
- Material volumétrico
(permitemedir distintos
volúmenes)
- Amplio rango de PROBETA
capacidades(5 mL,
100mL, 1 L)
- De vidrio o plástico
- No se pueden calentar
- Son pinzas para buretas

que se utilizan para sujetar DOBLE SOPORTE
dos buretas a la vez, FISHER
durante una titulación.
- Es un cilindro de vidrio,
graduado, provisto de un
robinete o llave en el
extremo inferior que BURETAS
regula la salida del líquido.
- Se utiliza en las
experiencias de titulación
junto con elerlenmeyer
- Permiten medir
volúmenesvariables de un
líquido (de acuerdo a su
capacidad) que luego será PIPETAS
vertido en otro recipiente. GRADUADAS
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- Permiten medir un
volumen fijo de
acuerdo a su
capacidad. PIPETAS VOLUMETRICAS
- Hay de simple o doble
aforo.
- De distinta capacidad.
- Permite sostener
diversosmateriales junto
con doblenueces. PIE UNIVERSAL
- Unido a pinzas permite
el armado de diferentes
equipos.
- Para calentar
sustancias.
- Para lograr MECHERO BUNSEN
calentamientos
adecuados es necesario
regular la entrada de
aire, para lograr llama
bien oxigenada (llama
azul).
- Para calentamiento de
sustancias a mayor
temperatura que con MECHERO FISHER
Mechero Bunsen.
- Permite tomar
sustancias sólidas, para ESPÁTULA
pesar o colocar en otro
recipiente.
- Hay metálicas o
plásticas
- Para separar
sustancias líquidas de AMPOLLA DE
distinta densidad, que DECANTACIÓN
no se mezclan entre sí
(no miscibles).
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- Se usa para contener

sustancias, para
evaporar el solvente VIDRIO DE RELOJ
(secar).
- Para pesar sustancias
sólidas.
- Permiten sujetar
material caliente. PINZAS Y
- Los broches de BROCHES
madera se utilizan para DEMADERA
calentar tubos de
ensayo.
Se trata de accesorios
fabricados en goma y
especialmente PROPIPETA,
diseñados para PIPETEADOR
asegurar transferencia O PERA
de líquidos corrosivos,
tóxicos u odoríferos.
4. Materiales, Equipos e Insumos:
No aplica.
5. Reactivos:
No aplica.
6. Procedimiento:
1. Organice grupos de trabajo
2. Haga una lectura del marco teórico y socialice con los compañeros de trabajo
3. Haga mediciones en el material volumétrico con agua
4. Inspeccionar la balanza y realizar diferentes pesajes, observando la lectura de cada
uno.
5. Encender el mechero según las indicaciones del docente.
Cuestionario
✓ Investigue el manejo del mechero, balanza analítica, balanza de plato.
✓ Investigue como se hace la lectura de volúmenes
✓ Investigue como se hace la medición con pipeta
✓ Consulte que es una micropipeta y para que se utiliza
✓ Consulte cuál es la utilidad de las probetas
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7. Nivel de Riesgo:
Nivel 1: Riesgo Bajo (Bata de Laboratorio Manga Larga, Zapato Cerrado

Bajo,Pantalón Largo).
Manejo de residuos:
No aplica
8. Bibliografías:
https://www.coursehero.com/file/15755151/lab1/
https://tecnologicocomfenalco.edu.co/wp-
content/uploads/librosinvestigacion/LABORATORIO%20DE%20QUIMICA_0.pdf
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PRACTICA Nº 3
1. SOLUCIONES BUFFER
2. Objetivos
• Determinar la capacidad amortiguadora de una solución buffer.

• Analizar la importancia de las soluciones buffer en diversos sistemas biológicos
3. Marco Teórico
Sistemas de Tampón - Soluciones Buffer – Sistemas Amortiguadores
Una solución amortiguadora consiste en una mezcla de un ácido débil y su base

conjugada. Las soluciones amortiguadoras tienden a resistir cambios de pH cuando se
agregan cantidades moderadas de ácidos o bases fuertes
Las soluciones amortiguadoras pueden mantener el pH en un valor relativamente

constante gracias a la presencia de cantidades considerables tanto del ácido como de
su base conjugada. Esta condición se satisface a valores de pH cercanos al pKa del
ácido. Si se añade OH-, estará presente en solución una cantidad apreciable de la forma
ácida del amortiguador que puede reaccionar con la base agregada. Si se añade H+
también habrá una cantidad apreciable de la forma básica del amortiguador que puede
reaccionar con el ácido añadido. 5
Tenemos el ejemplo del ácido fosfórico, un ácido débil (H2PO -) que4 al disociarse forma
su base conjugada (HPO -) el pH 4 al cual este ácido comienza a disociarse es de 7.2, es
decir este es su pKa, por lo tanto, las dos formas ácido débil como base conjugada se
mantienen a concentraciones adecuadas para amortiguar soluciones a este pH. A
valores de pH por debajo del pKa predomina la forma ácida, y a valores de pH por arriba
del pKa predomina la forma básica.
La condición de que un amortiguador contenga cantidades apreciables tanto de ácido

débil como de base conjugada aplica tanto a la proporción de las dos formas como a la
cantidad absoluta de cada una presente en la solución. Un amortiguador que contienen
cantidades más altas tanto de ácido como de base tiene una mayor capacidad
amortiguadora.
5
MATHEWS, et al. Bioquímica. 3a. Editorial Mac Graw Hill. 2000. P.50-53.
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Elaboración de Amortiguadores :
Cuando estudiamos los amortiguadores en teoría, es común usar la ecuación de

Henderson- Hasselbalch y efectuar muchos cálculos de proporciones base conjugada:
ácido. En la práctica, preparar un amortiguador es mucho más sencillo. Para tener un
amortiguador, lo único que se necesita es incluir cantidades razonables de las dos
formas del amortiguador en la solución. Esto puede lograrse añadiendo cantidades
predeterminadas de la forma básica conjugada(A-) a la forma ácida (HA), o bien,
podríamos partir de una y crear la otra. Para hacer un amortiguador podríamos partir de
la forma HA y añadir NAOH hasta tener el pH correcto, lo que se determina con un
medidor de pH también podríamos partir de la forma A- y añadir HCl hastallegar al
pH correcto. Dependiendo de la relación entre el pH deseado y el pKa del amortiguador,
podría ser más conveniente partir de una forma o de la otra. Por ejemplo, si vamos a
hacer un amortiguador de ácido acético/acetato a pH 5.7, sería más lógico partir de la
forma A- y añadir un poco HCl para bajar el pH a 5.7, que a partir de HA y tener que
añadir mucho más NaOH para subirle pH hasta rebasar el Pka. 5
Desde otro punto de vista supóngase que un bioquímico desea estudiar una reacción
de pH 4.0, puede tratarse de una reacción que genere o consuma protones. Para evitar
que el pH se modifique demasiado durante la reacción, el investigador debe utilizar una
solución amortiguadora consiste en una mezcla determinada de un ácido débil y su base
conjugada. En este ejemplo, una selección sería utilizar un amortiguador ácido
fórmico/formiato, puesto que su el pKa del ácido fórmico es de 3.75
está cerca del valor de pH requerido. Una mezcla de ácido acético/acetato no sería tan
adecuada porque el pKa del ácido acético que es de 4.6. 5
La proporción de ácido fórmico/formiato necesario para mantener el ph de 4.0 se

puede calcular a partir de la ecuación de Henderson- Hasselbalch así:
Ph= pka+log base conjugada / ácido
débil . 4.0=3.75 +log HCOO /
HCOOH .
Para calcular la proporción base/ácido, restamos 3.75 de 4.0, y tomamos el antilogaritmo

de ambos lados de la ecuación (1):
HCOO / HCOOH = 100.25= 1.78 6
Este amortiguador puede obtenerse, por ejemplo, mezclando volúmenes iguales de

ácido fórmico 0.1 M y formiato 0.178 M. También se puede prepararse una solución
amortiguadora titulando una solución de 0.1 M de ácido fórmico hasta pH 4.0 con
hidróxido de sodio. 5
5
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CAMPBELL, M. K, Farell, S. O. Bioquímica.4ª Ed .México. Thomson. 2004. P. -53-55.
Selección de amortiguadores
Una buena parte de la bioquímica se estudia efectuando reacciones enzimáticas en un

tubo de ensayo (in Vitro) o, sea en vidrio. Tales reacciones suelen amortiguarse para
mantener un pH constante pues las enzimas al ser proteínas con grupos ionizables
necesitan mantenerlos en determinadas formas (ionizados o no) para su correcta y
eficaz función. Debido a que esta ionización depende del pH celular, es importante que
existan compuestos que ayuden a amortiguarlo. Así mismo, prácticamente todos los
métodos para aislar enzimas y otras proteínas e incluso para cultivar tejidos utilizan
soluciones amortiguadoras. 6
Los criterios siguientes se aplican por lo común al seleccionar un amortiguador para una
reacción bioquímica:
• pka apropiado para el amortiguador
• Ninguna interferencia con la reacción o la detección del ensayo
• Concentración iónica apropiada del amortiguador
• Aspectos de solubilidad
• Naturaleza no biológica del amortiguador.
4. Materiales
• 1 vidrio de reloj.
• 1 espátula.
• 4 vasos de precipitado de 100 ml.
• 1 pipeta graduada de 25ml.
• 1 pipeta graduada de 1ml.
• 1 balón aforado de 100 ml.
• 1 frasco lavador.
• 1 churrusco.
Equipos
• Balanza.
• Potenciómetro.
5. Reactivos
• K2HPO4.
• KH2PO4.
• Na2HPO4.
• NaH2PO4.
• Agua destilada.
• HCl 1 M.
• NaOH 1M.
6. Procedimiento
6
CAMPBELL, M. K, Farell, S. O. Bioquímica.4ª Ed .México. Thomson. 2004. P. -53-55.
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• Cálculos para preparar la siguiente solución amortiguadora

Prepare 100ml de una solución amortiguadora de:
• Fosfatos (Na2HPO4 NaH2PO4) 0.25 M a pH 7.3. Tenga en cuenta que el pKa
de este ácido es de 7.21.
• Fosfatos (k2HPO4 kH2PO) 0.25 M a pH 7.3. Tenga en cuenta que el pKa de
esteácido es de 6.80.
Ecuación de Henderson Hasselbalch
pH = pKa + log A- / AH
• Medición de pH de las soluciones sin ácido y sin base

En dos vasos por separado mida 50 ml de la solución de fosfatos que usted preparó y
en otros dos vasos mida 50 ml de agua desionizada en cada uno. Luego mida en el
potenciómetro el pH de cada una de las soluciones.
• Medición de pH de las soluciones con ácido

Con una pipeta graduada de 1 ml mida 0.5 ml de HCl 1M agregue en cada uno de los
vasos (agua y solución amortiguadora) esta cantidad de ácido. Mida el pH de cada
solución. Anote los resultados.
• Medición de pH de las soluciones con base

Con una pipeta graduada de 1 ml mida 0.5 ml de NaOH 1M agregue en cada uno de
los vasos (agua y solución amortiguadora) esta cantidad de base. Mida el pH de cada
solución. Anote los resultados.
• Análisis de Resultados
Compare los resultados de las mediciones y explique brevemente.
Preguntas de consulta
• Defina solución amortiguadora y sus componentes
• ¿Qué se entiende por ácido y su base conjugada?
• Consulte la fórmula química o molecular del sistema amortiguador ácido carbónico
en la célula.
• Identifique: ¿cuál es el ácido y la base conjugada? Y ¿por qué?
• Escriba la ecuación de equilibrio para el sistema buffer anterior.
• ¿Cuál es el pKa de este sistema buffer? Defina que es Pka y qué importancia
tiene.
• Explique por qué es importante para la célula la existencia de sistemas
amortiguadores.
• Cite ejemplos en donde se ponga en evidencia la importancia biológica de las
soluciones amortiguadoras a nivel celular.
• ¿Cómo participan el aparato respiratorio y el riñón en el control del pH sanguíneo?
• Consulte cuales sistemas amortiguadores comúnmente utilizados en el laboratorio
de bioquímica
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7. Nivel de Riesgo:
• Nivel 2: Riesgo Medio (Bata de Laboratorio, Guantes, Cofia, Tapabocas, Zapato

Cerrado Bajo, Pantalón Largo).
Manejo de residuos:
• Línea 8
8. Bibliografías
CAMPBELL, M. K, Farell, S. O. Bioquímica.4ª Ed .México. Thomson. 2004. P. -53

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PRACTICA Nº 4
1. CASOS CLÍNICOS – GASES ARTERIALES
2. Objetivos
• Reconocer los valores normales acido-básicos y comprender su importancia

• Interpretar los gases arteriales como una medida útil en la evaluación de la función
respiratoria y del equilibrio ácido-básico.
• Analizar los mecanismos de regulación que permiten mantener el equilibrio ácido-
básico.
• Reconocer los diferentes trastornos que se presentan en el equilibrio ácido-básico.
3. Marco Teórico
Con el paso del tiempo, investigadores como Henderson, Hasselbalch, Stewart,

Siggaard y Andersen entre otros, han aportado fundamentos para el entendimiento del
equilibrio ácido-base y aún continúan las discusiones sobre cuál debe ser el enfoque
en la práctica clínica; una aproximación simple, fácilmente reproducible o una compleja
con múltiples parámetros de laboratorio. Debido a que el enfoque clínico para abordar
al paciente finalmente termina teniendo implicaciones diagnósticas, pronósticas y
terapéuticas, es imperativo ser precisos y rápidos en el proceso.
El ion hidrógeno libre (H+) en sangre arterial se encuentra a una concentración entre
35 y 45nmoles/L lo que equivale a mantener un pH entre 7,45 y 7,35; el pH es definido
como el logaritmo negativo (en base 10) de la concentración sanguínea de estos. La
concentración de iones hidrógeno (H+) es uno de los parámetros más importantes de

equilibrio acido-base, y esta depende de las interacciones entre la presión arterial de
dióxido de carbono (PaCO2), la concentración plasmática del ion bicarbonato (HCO3−),
la disociación constante del ácido carbónico y la solubilidad del dióxido de carbono como
lo determinó la ecuación de Henderson y Hasselbalch. El dióxido de carbono (CO2) se
combina de manera reversible con el agua para formar ácido carbónico, posteriormente
este se disocia en HCO3. Esta reacción es 3 catalizada2 por la2 enzima
2 anhidrasa
3 carbónica
3
presente en los eritrocitos, las nefronas, el intestino, el páncreas, el músculo estriado y

el endotelio de los capilares pulmonares.
Para mantener el equilibrio ácido-base en el fluido extracelular, la compensación de
los cambios son realizados por:
• El sistema respiratorio elimina o retiene CO2 a través de cambios en ventilación
alveolar (hiperventilando o hipoventilando respectivamente en respuesta a cambios
censados por quimiorreceptores), generando cambios en la PaCO2, gas que debido
al bajo peso molecular y alta solubilidad pasa fácilmente entre las diferentes
membranas y compartimientos biológicos de manera que altera la [H+]. El sistema
renal por medio del túbulo proximal aumenta o disminuye la secreciónde H+ (ácido)
y reabsorbe cerca del 80%del HCO − filtrado, el 16% 3 se reabsorbe en el segmento
ascendente grueso y en el túbulo contorneado distal, mientras otro 4% se reabsorbe
en el túbulo colector; pero además produce nuevo bicarbonatopor 2 mecanismos:
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• 1) A partir de glutamina en el túbulo proximal, por de aminación, resultando alfa-

cetoglutarato que es metabolizado con CO2 y H2O para formar HCO − mientras el
amonio (NH 4+) se disocia en amoniaco (NH3) para ser transportado a la luz tubular.
• A partir de fosfatos en forma de sales neutras que se filtran por el glomérulo
uniéndose a los H+ de la luz y generando HCO3− en las células del túbulo proximal,
distal y ducto colector en relación 1 a 1, aunque representan apenas una pequeña
fracción (acidez titulable). El bicarbonato se constituye entonces como el factor
principal del control metabólico (no respiratorio) del equilibrio ácido-base. Los
cambios agudos en el pH sanguíneo inducen efectos regulatorios en la estructura y
función de las proteínas y enzimas, lo que a su vez genera cambios en las funciones
celulares tales como la glucólisis, la gluconeogénesis, la mitosis, lasíntesis de ADN,
entre otras. Por lo anterior es fundamental entender la concurrencia de los
elementos que gobiernan el mantenimiento del pH dentro delos límites fisiológicos,
tales como: HCO3 −, H+, fosfatos, albúmina, + + −
3 Na , K , Cl , lactato, uratos, cetoácidos
entre otros; y permitiendo que se conserven, en lo que respecta a equilibrio ácido-
base, las complejas y eficientes funciones celulares.
ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE LOS GASES ARTERIALES
La determinación de la gasometría es la mejor manera de evaluar el equilibrio ácido-

base. Los valores de los gases arteriales son considerados normales al nivel del mar
(76 mmHg), con aire ambiental (21% de oxígeno) y a una temperatura de la sangre de
37°C.
• pH: mide la concentración de H+ libres en la sangre y refleja el estado ácido-base de
la sangre. Los valores indican si el pH es normal 7,40, ácido <7,40 o alcalino >7,40.
Valores límites normales 7,35 ‐ 7,45.
• PaCO2: presión parcial del anhídrido carbónico en sangre arterial, el valor normal
es de 40 mmHg. Valores límites 35 - 45mmHg. Los pulmones controlan la eliminación
o retención de CO2 a través de la ventilación alveolar. La PaCO2 >45 mmHg
(hipercapnia) indica hipoventilación alveolar y acidosis respiratoria. La PaCO2
<35mmHg (hipocapnia) indica hiperventilación alveolar y alcalosis respiratoria.
CO3H: representa la concentración de CO3H en sangre. El valor normal es de 24
mmHg.Valores límites 22 - 26 mmHg. Los niveles disminuidos de bicarbonato (<22
mEq/l) indican acidosis metabólica.
Los niveles elevados de bicarbonato (>26 mEq/l) indican alcalosis metabólica, bien
como un trastorno metabólico primario o como una alteración compensatoria en
respuesta a una acidosis respiratoria.
Exceso o déficit de bases: indica, en términos generales, la cantidad de tampón
sanguíneo (hemoglobina y bicarbonato plasmático) presente. El valor normal es de
+/– 2. Los valores elevados (> +2) reflejan alcalosis; los bajos (< –2), acidosis.
• PaO2: presión parcial de oxígeno disuelto en sangre arterial, el valor normal es de
95 mmHg. Valores límites entre 80 y 100 mmHg. No desempeña un papel importante
en la regulación ácido-básica si se encuentra dentro de los límites normales. La
presencia de hipoxemia con una PaO2 < 60 mmHg a veces da lugar a un metabolismo
anaeróbico y provoca aumento del ácido láctico y acidosis metabólica.
• Saturación (SatO2): mide el porcentaje de oxígeno combinado con la hemoglobina.
El valor normal es entre 95 - 99%. Cuando la PO2 desciende por debajo de 60 mmHg,
se da una caída importante de la saturación, según la curva de disociación de la
hemoglobina.
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La interpretación de gases arteriales abarca la determinación del estado ácido-base, el

nivel de compensación y el estado de oxigenación. Para la interpretación correcta de
una gasometría, se puede establecer seis pasos:
• 1º Paso: determinar si el pH es normal. Si se desvía de 7,40, observar el alcance
de la desviación. A efectos de interpretación se deben considerar todos los valores
superiores a 7,40 como alcalinos y todos los valores inferiores a 7,40 como acidosis.
Valorar si el pH se encuentra dentro de los límites normales de 7,35 a 7,45 o está
dentro de los límites críticos >7,55 ó< 7,25.
• 2º Paso: controlar la PaCO2. ¿Cuánto se desvía de 40 mmHg? El pH y la PaCO2

se deben mover en direcciones opuestas. Por ejemplo, a medida que la PaCO2
aumenta, el pH debe descender (acidosis); y a medida que la PaCO2 desciende,
el pH debe aumentar (alcalosis).
• 3º Paso: determinar el valor del CO3H–. ¿Cuánto se desvía de 24 mmHg? El CO3H–

yel pH se deben mover en la misma dirección. Por ejemplo, si el CO3H– disminuye, el
pH debe disminuir (acidosis); y a medida que el CO3H– aumenta, el pH debe aumentar
(alcalosis).
• 4º Paso: valorar qué componente individual (CO3H–) ó (PaCO2) concuerda con el

estado pH ácido-base. El valor que esté más relacionado con el pH y presente una
mayor desviación de la normalidad señalará cuál es la principal alteración responsable
de ese pH. Ejemplo, un pH de 7,21 (ácido), PaCO2 de 60 mmHg (ácido) y un CO3H–
de 22 mEq/l (normal). Interpretación: pH y PaCO2 concuerdan (ácidos). Así el trastorno
es una acidosis respiratoria.
• 5º Paso: Determinar el nivel de compensación.

* Descompensado: el pH es anormal debido a que el tampón y los mecanismos
reguladores no han comenzado a corregir el desequilibrio. En estas situaciones uno de
los componentes, el ácido o la base es anormal.
Ej.: pH= 7,30; CO2= 60; CO3H= 24.
* Parcialmente compensado: el pH es anormal pero los mecanismos reguladores

han comenzado a corregir el desequilibrio. En estas situaciones los dos componentes,
el ácido y la base son anormales.
Ej.: pH= 7,34; CO2= 49; CO3H=27.
*Compensado: el pH está normal. El desequilibrio ácido-‐base ha sido neutralizado,
pero no corregido. En esta situación, los componentes ácidos y bases son anormales
pero equilibrados.
Ej.: pH= 7,36; CO2=48 CO3H= 30.
•6º Paso: comprobar la PaO2 y la saturación de oxígeno (SatO2)
para determinar si son bajas o normales.
ALTERACIONES DEL EQUILIBRIO ÁCIDO-•BASE

Acidosis respiratoria Se caracteriza por hipoventilación alveolar y se manifiesta por
una PaCO2 superior a 45 mmHg y un pH< 7,35, y, por lo tanto, un aumento de la
concentración de H+.
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La causa de la acidosis respiratoria es la insuficiencia respiratoria aguda producida por

neumonía, edema agudo de pulmón, paro cardiaco, laringoespasmo o una excesiva
sedación con medicamentos que deprimen el centro respiratorio (narcóticos, sedantes,
hipnóticos y anestésicos). La acidosis respiratoria crónica normalmente está asociada a
enfermedades pulmonares obstructivas crónicas como la bronquitis crónica. Para
compensar la acidosis respiratoria los valores iniciales de bicarbonato son normales,
pero posteriormente el riñón intenta compensar con la reabsorción de bicarbonato. En
la acidosis respiratoria aguda esta compensación lenta es insuficiente y el pH
desciende. En la acidosis respiratoria crónica el pH se mantiene a costa de una tasa de
bicarbonatos muy elevada. El tratamiento de la acidosis está dirigido a corregir la causa
de la hipoventilación alveolar. Los riñones conservan los iones CO3H– y eliminan los
iones H+ a través de la orina ácida
Las acidosis respiratorias se dividen según la presencia o ausencia del ANION GAP
aumentado:
Anión gap = [ Na+] - ( [Cl-] + [CO3H-] )
El anión gap es la diferencia entre los aniones plasmáticos que habitualmente no se
miden (proteínas, sulfatos, fosfatos y ácidos orgánicos como lactato y piruvato) y
cationes plasmáticos que habitualmente no se miden (K+, Ca2+, Mg2+). El anión gap
normal es entre 8 - 12 mEq/l.
El incremento del anión gap puede producirse por el aumento de los aniones no
medidos (administración de soluciones que contengan albúmina, administración de
carbenicilina, sulfatos, fosfatos) o bien por un descenso de los cationes no medidos
(magnesio, calcio, potasio).
El anión gap bajo puede encontrarse en situaciones con disminución de los aniones no
medidos (hipoalbuminemia reduce 2.5 mEq/l el anion gap por cada 1g/dl de disminución
de la albúmina, o aumento de los cationes no medidos (hiperpotasemia, hipercalcemia,
hipermagnesemia, intoxicación por litio, mieloma múltiple, artritis reumatoide). Un anión
gap excesivamente bajo puede reflejar artefactos del laboratorio (hipernatremia,
intoxicación por bromo o fármacos que contengan bromo como la piridostigmina, y la
hiperlipemia marcada). En estas situaciones el paciente puede no tener el anión gap
alto en situaciones que habitualmente lo producen.
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Alcalosis respiratoria
Se caracteriza por hiperventilación y se manifiesta por un descenso de la PaCO2 inferior
a 35 mmHg y un pH> 7,45, y por lo tanto, una disminución de la concentración de H+.
Las causas de la alcalosis respiratoria aguda son la ansiedad, dolor y los episodios
agudos de hipoxia causados por trastornos pulmonares (neumonía, tromboembolismo
pulmonar, edema agudo de pulmón), intoxicación por salicilatos (por la estimulación
del centro respiratorio a nivel central), fiebre y traumatismo en el centro respiratorio. Las
causas de la alcalosis respiratoria crónica son los trastornos cerebrales (encefalitis y
tumores), hepatopatías crónicas y embarazo, en el que el aumento de progesterona
incrementa la sensibilidad del centro respiratorio al CO2.
El bicarbonato sérico se intenta reducir, pero rara vez llega a compensar la alcalosis
respiratoria. Los riñones conservan los iones H+ y eliminan los iones CO3H– a través
de la orina básica La administración endovenosa de soluciones de cloruro sódico, ya
que los iones Cl– sustituyen a los iones bicarbonato. Si la causa es la ansiedad,
tranquilizar al paciente y si no se consigue, hacer que el paciente respire en una bolsa
de papel para que inhale mayor concentración de CO2. Si la causa es la hipoxia
habrá que administrar oxígeno.
Acidosis metabólica
Se caracteriza por un déficit de bases y se manifiesta por un CO3H– <22 mEq/l y un
pH <7,35. Se puede producir por cuatro situaciones diferentes:
• Aumento de la producción de ácidos, como ocurre por ejemplo en enfermos con mayor
metabolismo anaeróbico (acidosis láctica), casos de shock, o mayor producción de
ácidos cetónicos en el ayuno o en la diabetes mellitus descompensada.
• Disminución de la eliminación normal de ácidos, en casos de insuficiencia renal.
• Pérdidas patológicas de bicarbonato, en enfermos con diarrea,
fístulasgastrointestinales, pérdida de fluidos corporales por drenajes por debajo de la
zona umbilical y abuso de laxantes que produce una pérdida de sustancias alcalinas.
• Intoxicación con sustancias que generen ácidos, como el ácido acetilsalicílico y el
metanol. Cuando hay una disminución de bicarbonato, el organismo intentará
compensarlo en una primera fase hiperventilando (respiración profunda, denominada de
Kussmaul) y en una segunda fase, el riñón responderá con un aumento de la
reabsorción tubular de bicarbonato y un aumento en la eliminación de H+ (orina ácida).
La administración endovenosa de soluciones que contengan lactato sódico también
ayuda, ya que los iones lactato son metabolizados por las células hepáticas y
transformados en iones bicarbonato.
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Alcalosis metabólica
Se caracteriza por un exceso de bases y se manifiesta por un CO3H– >26 mEq/l y
un pH >7,45. Se puede producir, entre otros mecanismos, por:
• Pérdidas patológicas de ácido, como se observa en algunos casos de vómitos
profusos.
• Uso exagerado de diuréticos, que determina un exceso de retención de carbonato
y aumento de las pérdidas de potasio. La hipopotasemia, que también puede deberse
a otros mecanismos, promueve una mayor pérdida de H+ por el riñón.
• Aumento de mineralocorticoides (aldosterona, desoxicorticosterona) que incrementan
la excreción de H+.
• Ingesta exagerada de álcali. Puede acompañarse de un incremento compensador de
PaCO2 en un intento de elevar el nivel de ácido carbónico y por tanto el de H+,
produciendo hipoventilación. Si los riñones funcionan bien responden excretando
bicarbonato sódico CO3NaH por la orina y reabsorbiendo H+. El tratamiento de la
alcalosis metabólica está dirigido a corregir la causa subyacente. En caso de pérdidas
gástricas, se utilizará cloruro potásico y suero salino normal para compensarlas, a no
ser que el paciente esté en insuficiencia cardíaca. En los cuadros hipopotasémicos está
indicada la administración de K+.
TOMA DE MUESTRA DE SANGRE ARTERIAL
Indicaciones:
- Excluir o diagnosticar una alteración respiratoria o metabólica. Valorar la evolución y
gravedad de dichas alteraciones.
Contraindicaciones:
- Presencia de infección local en el sitio de la punción.
- Alteración de la hemostasia.
- Circulación colateral inadecuada de las extremidades.
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Material
- Antiséptico: Clorhexidina al 2% (de elección), povidona yodada, alcohol 70%.
- Torundas o gasas estériles.
- Guantes, estériles si es preciso.
- Rodillo (toalla enrollada o similar).
- Anestésico 1% o 2% sin vasoconstrictor (sin adrenalina).
- Jeringa y aguja 24G a 27G (para administrar anestesia local).
- Set estéril extracción sangre arterial (jeringa plástica con heparina litio liofilizada, aguja
seguridad 22G para arteria radial y braquial y tapón hermético). Aguja 20G (si punción
arteria femoral).
- Contenedor rígido de objetos punzantes.
- Recipiente con hielo para transporte o frigo, si se retrasa el envío a laboratorio.
Técnica de la instalación del catéter venoso periférico.

1. Comprobar identidad del paciente y la indicación médica de la prueba.
2. Preparar el material necesario (heparinizar la jeringa).
3. Lavado de manos clínico.
4. Informe al paciente en relación al procedimiento y solicitar su colaboración.
5. Acomode al paciente en una posición que sea confortable de preferencia en decúbito
supino.
6. Seleccione la arteria a puncionar, evite cicatrices y lesiones en la piel. NO puncione
las arterias de extremidades paréticas por accidente cerebrovascular o con
mastectomía.
La arteria radial a nivel del túnel carpiano, es de 1ª elección, es la más accesible

y con menos riesgos post-punción. En 2º lugar arteria braquial, en fosa
antecubital; ésta tiene más riesgo de punción de vena y nervio. La arteria femoral
en zona inguinal, se utilizará si no hay otra opción, en parada cardiaca, shock sin
pulsos periféricos, etc. 7-11
7
Raúl E. Aristizábal-Salazara, L. Felipe Calvo-Torresb, Luis Alfonso Valencia- Arangoc, Mauricio Montoya-Cañonb, Oscar
Barbosa-Gantivac y Vanessa Hincapié- Baenad. Equilibrio ácido-base: el mejor enfoque clínico, Revisión; rev colomb
anestesiol. 2015; 43(3):219–224.
8
Halperin ML, Goldstein MB. Acid, electrolyte, and acid-base emergencies.Philadelphia: WB Saunders, 1988: 2-119.
9
Emmett M, Narins R. Clinical use of anion gap. Medicine 1977; 56: 38-54
10
Kruse JA. Clinical utility and limitations of the anion gap. Int J Intens Care 1997; 4:51-66.
11
Enfermeria clínica 1, Universidad de Cantabria, http://ocw.unican.es/ciencias-de-la-salud/enfermeria-clinica-i-
2011/material-de-clase/bloque- i/Tema%201.2.2%20Desequilibrios%20acidobasicos.pdf
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El objetivo es identificar a los pacientes con alteración en la circulación colateral de la

mano:
- Explicar el procedimiento y el propósito al paciente.
- Colocar la mano del paciente hacia arriba y pedir al paciente que cierre el puño o
usando los dedos índices y medio, comprimir al mismo tiempo las arterias radial y cubital
produciendo isquemia.
- Pedir al paciente que abra y cierre la mano varias veces.
- Al abrir la mano, la palma aparece pálida, al no tener flujo arterial.
- Liberar la presión de la arteria cubital, y vigilar que la mano recupera el color normal
en 10 segundos. Si esto es así, la arteria cubital es permeable y significa que la prueba
de Allen es positiva y se puede realizar la punción de la arteria radial.
- Puncione sobre el punto en que palpa el pulso y obtenga 3 cc de muestra de sangre.

Observe que la sangre fluya sin necesidad de aspirarla, se aprecia su
coloración rojo brillante.
- Retire la jeringa y comprima fuertemente por 5 minutos el sitio de punción con

algodón seco; puede solicitarle al paciente que lo haga, sí está en condiciones.
- En caso de no localización o pérdida de la arteria, extraer la aguja hasta justo por

debajo de la piel cambiando el ángulo de penetración. Nunca variar de ángulo en
capas profundas, podemos lesionar vasos y nervios.
- Retirar aguja y jeringa y presionar con una torunda la zona de punción durante 5 min.
en arteria radial; de 7 a 10 min. en arteria braquial y 10 min. en arteria femoral. En
pacientes con alteraciones en la coagulación aumentar el tiempo de compresión al
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doble. No efectuar compresión de manera circular, para evitar efecto torniquete.
4.Materiales
- No aplica
Equipos
- No aplica
6. Procedimiento
- No aplica
Cuestionario
Gases Arteriales. Interpretar.
PaCO2 HCO3 pH
1. 30 18 7.39
2. 40 18 7.26
3. 40 24 7.39
4. 20 16 7.51
5. 24 10 7.23
6. 50 21 7.23
7. Nivel de Riesgo:
• Nivel 1: Riesgo Bajo (Bata de Laboratorio Manga Larga, Zapato Cerrado Bajo,
Pantalón Largo).
Manejo de residuos:
- No aplica
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6. Bibliografías
Raúl E. Aristizábal-Salazara, L. Felipe Calvo-Torresb, Luis Alfonso Valencia- Arangoc,
Mauricio Montoya-Cañonb, Oscar Barbosa-Gantivac y Vanessa Hincapié- Baenad.
Equilibrio ácido-base: el mejor enfoque clínico, Revisión; rev colomb anestesiol. 2015;
43(3):219–224.
Halperin ML, Goldstein MB. Acid, electrolyte, and acid-base emergencies.Philadelphia:
WB Saunders, 1988: 2-119.
Emmett M, Narins R. Clinical use of anion gap. Medicine 1977; 56: 38-54
Kruse JA. Clinical utility and limitations of the anion gap. Int J Intens Care 1997; 4:
51-66.
Enfermeria clínica 1, Universidad de Cantabria, http://ocw.unican.es/ciencias-de-la-

salud/enfermeria-clinica-i-2011/material-de-clase/bloque-
i/Tema%201.2.2%20Desequilibrios%20acidobasicos.pdf.
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PRACTICA Nº 5
1. SOLUCIONES Y DILUCIONES
2. Objetivos
• Reproducir los conceptos teóricos de soluciones y diluciones en la vida práctica del
laboratorio.
• Identificar, seleccionar, y emplear las fórmulas adecuadas para diferentes
procesos de dilución.
• Practicar de manera hábil la preparación de soluciones y diluciones.
• Mejorar la habilidad y destreza en el manejo de las unidades de concentración
mediante la preparación de soluciones utilizado diluciones en serie.
3.Marco Teórico
Soluciones
Una solución es la mezcla homogénea de dos o más sustancias. Para que dos más
sustancias formen una solución se necesita que estas sean solubles o miscibles. La
solubilidad de un soluto o un solvente, está indicada por la máxima cantidad de soluto
que se disuelve en una determinada cantidad de solvente.
Dilución:
Proceso por el cual una solución concentrada es con vertida en una menos concentrada
(diluida), por la adición de solvente.
Unidades de concentración
Cada sustancia tiene una solubilidad que es la cantidad máxima de soluto que puede
disolverse en una disolución, y depende de condiciones como la temperatura, presión,
y otras substancias disueltas o en suspensión. 12
La concentración es la magnitud física que expresa la cantidad de un elemento o un

compuesto por unidad de volumen.13
El término solubilidad se utiliza tanto para designar al fenómeno cualitativo del proceso
de dilución como para expresar cuantitativamente la concentración de las soluciones.
Puede expresarse en moles por litro, en gramos por litro, o en porcentaje de
soluto/disolvente.
En química, para expresar cuantitativamente la proporción entre un soluto y el disolvente
en una disolución se emplean distintas unidades: molaridad, normalidad, molalidad,
formalidad, porcentaje en peso, porcentaje en volumen, fracción molar, partes por
millón, partes por billón, partes por trillón, etc. También se puede expresar
cualitativamente empleando términos como diluido, para bajas concentraciones, o
concentrado, para altas.
La concentración de una solución se expresa como relaciones en peso, en volumen o

peso-volumen.
12
TORRENEGRA, Rubén. Introducción al Análisis Químico Moderno. Bogotá D.C. Publicaciones Universidad
Javeriana. Pontificia Universidad Javeriana.1990. P. 9-25.
13
Disponible en Internet: http://es.wikipedia.org/wiki/Concentraci%C3%B3n.
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Relaciones en peso
Estas son: porcentaje en peso, partes por millón, molalidad, fracción molar. Las dos
primeras son unidades físicas y las dos últimas son relaciones entre unidades químicas
y físicas.
Las unidades físicas utilizadas son: el gramo (g) y sus múltiplos y submúltiplos:
miligramo (mg), nanogramo (ng), kilogramo (Kg), microgramo (µg).
Las unidades denominadas químicas son: la mol-gramo y sus submúltiplos mili y micro
mol (mmol, µmol respectivamente).
• Porcentaje en peso (% p/p): lo indica el número de gramos de soluto presentes en

cien gramos de la solución.
• Partes por millon (ppm): indica las partes de soluto presentes en un millón de
partes de solución (g por tonelada o mg por Kg).
Para expresar concentraciones muy pequeñas, trazas de una sustancia muy diluida en
otra, es común emplear las relaciones partes por millón (ppm), El millón equivale a 106,
el billón estadounidense, o millardo, a 109 y el trillón estadounidense a 1012.
Partes por millón (abreviado como ppm) unidad empleada usualmente para valorar la
presencia de elementos en pequeñas cantidades (traza) en una mezcla. Generalmente
suele referirse a porcentajes en peso en el caso de sólidos y en volumen en el caso de
gases. Se abrevia como ppm. También se puede definir como "la cantidad de materia
contenida en una parte sobre un total de un millón de partes."
Ejemplo: Supongamos que tenemos un cubo homogéneo de un metro de arista, cuyo
volumen es un metro cúbico (m³). Si lo dividimos en 'cubitos' de un centímetro de lado,
obtendríamos un millón de 'cubitos' de un centímetro cúbico, (cm³ o cc). Si tomamos uno
de esos 'cubitos', del millón total de 'cubitos', tendríamos una parte por millón.
• Molalidad (m): representa las moles de soluto en cada kilogramo de solvente.
• Fracción molar (X): relaciona las moles de soluto con las moles totales en la
solución (moles totales son las moles del soluto más las moles del solvente). Por
ejemplo, en una mezcla binaria de 6 moles de etanol y 4 moles de agua, lo que da
un total de 10 moles, la fracción molar del etanol es de 6/10 = 0,6; mientras que la
fracción molar del agua es 4/10 = 0,4. La suma de todas las fracciones molares de
una mezcla da como resultado la unidad.
Xsoluto=nsoluto/ntotal,
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Relaciones en volumen
• Porcentaje en volumen (%v/v): Indica las partes en volumen de soluto por cada
cien partes de solución. Por ejemplo, ml de soluto por cada cien mililitros de solución.
Relaciones Peso A Volumen
Indica las partes del soluto expresadas en alguna unidad de peso entre el volumen de
la solución.
Gramos por litro (g/l): Se pueden usar también las mismas unidades que para medir
la densidad aunque no conviene confundir ambos conceptos. La densidad de la mezcla
es la masa de la solución entre el volumen de esta mientras que la concentración en
dichas unidades es la masa de soluto entre el volumen de la disolución. Se suelen usar
los gramos por litro (g/l).
Porcentaje peso a volumen (%p/v):
• Gramos por ciento (%g): Indica el número de gramos de soluto que estén
contenidos en cien mililitros de la solución.
• Miligramos por ciento (%mg): representa el número de miligramos de soluto

contenidos en cien mililitros de solución o los mg de soluto por decilitro (mg/dl).
• Molaridad (M)
La molaridad (M) es el número de moles de soluto contenidas en un litro de solución.
Por ejemplo, si se disuelven 0,5 moles de soluto en 100 mL de disolución, se tiene una
concentración de ese soluto de 5,0 M (5,0 molar). Para preparar una disolución de
esta concentración normalmente se disuelve primero el soluto en un volumen menor,
por ejemplo 30 mL, y se traslada esa disolución a un matraz, para después rellenarlo
con más disolvente hasta los 100 mL.
Es el método más común de expresar la concentración en química sobre todo cuando

se trabaja con reacciones químicas y relaciones estequiométricas. Sin embargo, tiene
el inconveniente de que el volumen cambia con la temperatura
• Normalidad (N)
La normalidad (N) es el número de equivalentes (n) de soluto (es la unidad de masa
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que representa a la mínima unidad que puede reaccionar) contenidas en un litro de

solución.13
Diluciones
Tanto en un laboratorio clínico como en un stand de enfermería, como en cualquier
área de la salud se presentan diariamente situaciones en que se realizan diluciones de
diferentes solucione. Frente a esto se hace necesario entender que lo que se está
diluyendo son soluciones y que estas soluciones se expresan en términos de
concentración, es por esto que es importante en primera instancia, conocer y manejar
estos dos términos; y en segundo lugar conocer que al diluir se disminuye la
concentración de una solución determinada, es decir, diluir es agregar un solvente a una
solución y así obtener una concentración menor de sólido en la solución.
Una de las soluciones que se diluyen con más frecuencia en un laboratorio clínico es
el plasma o suero o líquidos biológicos en los cuales encontramos todos los analitos a
determinar cuantitativamente, actuando estos como solutos diluidos en el agua celular.
Otras soluciones a diluir son aquellos reactivos utilizados como preservativos de
algunas de estas muestras biológicas, tales como el ácido clorhídrico o nítrico entre
otros pues sus concentraciones elevadas no los hacen aptos para cumplir su función.
Por otra parte, un enfermero(a) cuando maneja sustancias cuyas cantidades
necesarias para ver un efecto son extremadamente pequeñas (por ejemplo, un
fármaco para tratar una enfermedad, una hormona para estudiar su efecto en un
animal de experimentación, etc.) y difícilmente se pueden pesar o medir en esas
proporciones tan pequeñas, también tiene que diluir.
En esas situaciones es necesario recurrir a la preparación de una solución de alta
concentración (o solución de stock o solución madre) y hacer diluciones seriadas a partir
de ésta. A continuación, realizamos un esquema que muestra el proceso de dilución:
Vd = Vs+Vc( 1) Vs
Vc
Vd
Cc Cd
Cc=Concentración de la solución concentrada
Cd=Concentración de la solución diluída
Vd=Volumen de la solución diluída (1)
Vc= Volumen de la alícuota de solución concentrada, es decir el volumen que se
extrae de la solución concentrada para realizar la dilución.
Como mencionamos anteriormente, dilución es el proceso por el cual una solución
concentrada es convertida en una menos concentrada (diluida), por adición de una
solvente.
13
Disponible en Internet: http://es.wikipedia.org/wiki/Concentraci%C3%B3n
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En una solución la cantidad de soluto que el volumen de solución diluida (Vd); pues el
solvente añadido (Vs) no contendrá soluto alguno. Entonces si la cantidad de soluto
por unidad de volumen se puede determinar por:
Cantidad de Soluto = Volumen de la Solución x Concentración Solución.
Para la solución concentrada tenemos:

Cantidad de soluto en Vc = Vc x Cc
Para la solución diluida será:

Cantidad de soluto en Vd = Vd x Cd
Si la cantidad de soluto es igual, entonces:
Cc x Vc = Cd x Vd (1)
La anterior ecuación es la base para todos los cálculos que se efectúan para las
diluciones.
La concentración de la solución diluida puede ser calculada a partir de la concentración
de la solución concentrada, teniendo en cuanta el factor de dilución (fd). Esta es una
expresión que resulta de manejar la ecuación (1):
Cd = fdCc. .............. (2)
Así que fd = Cd/Cc
Y relacionando con (1)

fd = Vc/Vd ya que Vc/Vd = Cd/Cc
fd también es igual a Vc , ya que Vd es igual a Vs + Vc

Vs + Vc
El factor de dilución se expresa generalmente como una relación en función del volumen
final y así un factor de dilución (fd) 1/10 indica que una solución que tenía una
determinada concentración, se ha diluido diez veces y que la relación entra el (Vc) y
(Vd) es de 1:10. De aquí también se desprende que la relación entre el (Vc) y el (Vs)
es de 1:9.
Para preparar soluciones muy diluidas se recurre a las diluciones en serie; las cuales se
hacen sacando volúmenes o alícuotas de la solución anterior para preparar la siguiente.
Para obtener la concentración de una solución determinada, se puede aplicar la
ecuación:
Cn = fd1 x fd2 x fd3 x fd4 x.......x fdn x Cc......... (3)
Como se puede observar, un enfermero, bacteriólogo, o cualquier profesional de la salud

se puede enfrentar a diversas situaciones en la rutina diaria en las cuales tiene que
diluir. Principalmente se puede enumerar 3 situaciones básicas tales como:
1. Concentraciones elevadas de determinado analito en una muestra biológica.
2. Diluciones de reactivos químicos con concentraciones conocidas.
3. Preparación de patrones para elaboración de curvas de calibración.
A cada una de estas situaciones debemos enfrentarnos e identificar los pasos a seguir
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para desempeñarnos de una manera ágil y hábil.
1. Concentraciones elevadas de determinado analito en una muestra biológica

Cuando el equipo no reporta ningún resultado esto es debido a las altas
concentraciones del analito (sustancia a analizar en la sangre del paciente: glucosa,
triglicéridos proteínas etc) que se está determinando en la muestra, o simplemente
disminuir la concentración de alguna solución:
• Muestra con concentraciones elevadas de analitos:

Vc
Fd
Vd
Muestra de
sangre o
medicamento a
diluir
¿Se tiene el tubo de la muestra a analizar experimentalmente nos preguntamos cual es
la cantidad de muestra que debo tomar y cómo voy a realizar la dilución? Para esto se
necesitan de dos datos con los cuales se pueden realizar todas las diluciones fácilmente,
primero: conocer a que volumen final al cual voy a realizar la dilución, y segundo
determinar el factor de dilución a mi criterio. En este momento somos autónomos de
elegir tanto el volumen final como el factor dilución.
Ejemplo Nº 1
Podemos escoger un factor de dilución de ½ y un volumen final de 5 ml. Aplicamos la
fórmula que nos indica que volumen de la solución concentrada en este caso de la
muestra biológica vamos a medir.
Vc = Vd x fd
Vc= 5ml x ½
Vc= 2.5 ml del suero sanguíneo o medicamento a diluir
Es decir, medimos 2.5 ml de suero lo agregamos a otro tubo y adicionamos el volumen

que hace falta para completar 5ml del volumen final de la solución; es decir 2.5ml de
agua destilada u otro disolvente.
En este momento usted puede procesar su muestra y no olvidar que el resultado que
calcule con esta dilución no es el real, es necesario multiplicar por el factor de dilución
así: la muestra diluida arrojó una concentración de 200mg/dl la verdadera concentración
es: 400mg/dl ya que se multiplica por el denominador del factor de dilución en este caso
es 2.
Se pude presentar otra situación en la que aún la muestra sigue muy concentrada y es
necesario seguir realizando diluciones en este caso acudimos a realizar diluciones en
serie.
Diluciones en serie o seriadas

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Vc Vc Vc
fd fd fd fd
Vc Vd1 Vd2 Vd3 Vd4
Se denominan en serie porque la dilución anterior ahora es la solución concentrada de

la siguiente y así sucesivamente como se muestra en el esquema. Para realizar
diluciones en serie al igual que para realizar cualquier dilución se necesita conocer el
factor de dilución y el volumen final (Vd), para así conocer el volumen que debemos
extraer de la muestra concentrada (Vc). Al realizar estas diluciones se pueden presentar
dos situaciones a saber:
• EL factor de dilución utilizado en todas las diluciones es el mismo, por lo tanto, el
volumen de la solución concentrada para extraer de cada tubo es el mismo y el del
solvente también lo es.
• El factor de dilución varía de un tubo a otro y por lo tanto el volumen de la solución
concentrada es diferente y por lo tanto el volumen del solvente varía para cada tubo.
En este ejemplo vamos a utilizar un ejemplo para la situación A:
La muestra del ejemplo Nº 1 que se diluyó debe diluirse más, si seguimos utilizando el
mismo factor de dilución ½ y utilizando un volumen final de 5ml, siempre debemos medir
del tubo anterior 2.5 ml y en todos los tubos adicionar 2.5ml del solvente ver esquema.
Si se requiere conocer las concentraciones de cada tubo se pueden presentar dos
situaciones:
• Que se conozca la concentración de la solución stock.
• Desconocer la contracción de la solución stock y sólo conocer la contracción de la
última solución.
Se desea conocer la concentración de las diluciones siguientes a la solución stock a la

cual se le conoce la concentración:
Para solucionar el primer caso recurrimos a la fórmula:
Cd= Cc x fd
Para el tubo Nº 1
Cd= *400mg/dl x ½ Cd= 200mg/dl
Para el tubo Nº 2
Cd = 200mg/dl x ½ Cd= 100mg/dl
Para el tubo Nº 3
Cd = 100mg/dl x ½ Cd = 50mg/dl
Para el tubo Nº 4
Vd= 50mg/dl x ½ Vd = 25mg/dl
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*Recuerde que esos datos provienen del ejemplo Nº 1
Si vamos a resolver la segunda situación en donde se desconoce la contracción de la

solución stock y sólo se conoce la contracción de la última solución. que en este caso
sería de 25mg/dl se procede así:
Cc = Cd
fd
Cc = 25
½
25 x 2 = 50 mg/dl
* En este caso recuerde que al dividir por un fraccionario se multiplica por su

denominador.
2. Diluciones de reactivos químicos con concentraciones conocidas.

En este caso partimos de reactivo de concentración conocida y se requiere preparar o
llegar a otra concentración.
Se desea preparar una solución de HCl 5% y se parte de una solución de 10%. Para
este caso es necesario conocer cuál es el volumen que necesito medir de la solución
concentrada, debo definir los dos parámetros el factor de dilución y el volumen final, a
diferencia de los otros problemas en el caso experimental el factor de dilución no lo
defino yo, en este caso debe hallarse teniendo en cuanta las dos concentraciones así:
fd = Cd
Cc
fd= 5%
10%
fd=1/2
Teniendo el factor de dilución entonces podemos fijar un volumen final cualquiera por
ejemplo 2 ml, entonces hallamos el volumen de la solución concentrada así:
Vc = Vd x fd
Vc= 2ml x ½
Vc= 1 ml de la solución de HCl al 10%
Y adicionamos 1 ml de solvente para completar el volumen final
3. Preparación de patrones para elaboración de curvas de calibración
El primer ejemplo que veremos es una proteína. La albúmina sérica bovina es la proteína
que más usualmente se emplea como patrón para calcular la cantidad de proteínas
totales en una muestra incógnita. Las unidades que habitualmente se usan para la
solución de stock son mg/ml, y en general una solución de 10 mg/ml puede resultar
adecuada para realizar diluciones seriadas y medir luego la concentración de proteínas
en una muestra. En este caso se pueden presentar dos situaciones:
a. Diluciones NO en serie o no seriadas a partir siempre de la solución stock conociendo
las concentraciones a las que queremos llegar
b. Diluciones en serie sin conocer las concentraciones a las que se desea llegar.
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Diluciones no seriadas: es decir que el volumen inicial siempre se extrae de la

solución stock
Para el primer caso se procede así: Las diluciones se harán al medio en una serie de
tubos rotulados con las concentraciones 5 mg/ml; 2 mg/ml; 1 mg/ml; 0.5 mg/ml; hallamos
el factor de dilución con la fórmula del ejemplo Nº 3 para conocer el volumen a tomar de
la solución stock (Vc) en cada dilución y fijamos un volumen final de 1ml; aplicamos la
fórmula del ejemplo Nº1
Tubo Concentración ml de H2O ml solución x Dilución

1 5 mg/ml 0.5 ml 0.5ml solución stock 1/2
2 2mg/ml 0.8 ml 0.2 ml de la solución stock 1/5
Diluciones en serie: cuyo volumen inicial se extrae de la dilución anterior

Para el segundo caso se van a preparar 4 patrones y se van a realizar 4 diluciones en
serie a partir de la misma solución stock anterior de 10 mg/dl. En este caso yo decido
el factor de dilución y el volumen final de cada dilución. Para este caso determiné que
voy a diluir a ½ y el volumen final es de 2 ml aplico la fórmula del ejemplo Nº 1.
Vc = Vd x fd.
Vc= 2ml x ½.
Vc= 1 ml de la solución concentrada.
Como es el mismo factor de dilución para todos los tubos entonces voy a extraer del
tubo anterior a la siguiente dilución 1 ml. y adiciono 1ml del solvente.
Tubo Concentración ml de H2O ml de solución x Dilución

1 1ml 1ml 1/2
2 1ml 1ml 1/2
3 1ml 1ml 1/2
4 1ml 1ml 1/2
Para determinar las concentraciones entonces aplico la fórmula Cd = Cc x fd, teniendo

en cuenta que siempre la dilución anterior al último tubo que le voy a hallar la
concentración es la solución concentrada respecto a esta. Así como se hizo en el
ejemplo Nº 2.
4.Materiales
1 Vaso de precipitado de 50 ml.
1 Balón aforado de 50ml.
1 Vidrio d reloj
1 Espátula.
1 Agitador.
1 Pipeta graduada 5 ml.
1 Pipeta graduada de 1 ml.
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6 Tubos de ensayo.
1 Pera.
1 Churrusco.
1 Gradilla.
Equipos
Balanza analítica
5. Reactivos
Agua destilada.
NaOH.
KOH
NaCl.
Glucosa.
Sacarosa.
Azul de metileno.
Procedimiento
A. Preparación de soluciones.
• Preparar 50ml de una solución de glucosa 0.1 M. Exprese la concentración en
%p/v.
• Preparar 50ml de una solución de sacarosa 0.5 M. Exprese la concentración en
%p/v.
• Preparar 50ml de una solución de NaOH 0.25 M. Exprese la concentración en
%p/v.
• Preparar 50ml de una solución de NaCl 0.2 M. Exprese la concentración en %p/v.
• Preparar 50ml de una solución de KOH 0.15 M. Exprese la concentración en %p/v.
• Preparar 50ml de una solución de glucosa 0.5 M. Exprese la concentración en
%p/v.
• Preparar 50ml de una solución de sacarosa 0.1 M. Exprese la concentración en
%p/v.
• Preparar 50ml de una solución de NaOH 0.2 M. Exprese la concentración en %p/v.
• Preparar 50ml de una solución de NaCl 0.15 M. Exprese la concentración en %p/v.
• Preparar 50ml de una solución de KOH 0.25 M. Exprese la concentración en %p/v.
B. Diagrama de proceso de trabajo

Una vez realizada la lectura del problema realice un esquema donde se observe paso
a paso la preparación de la solución y los cálculos correspondientes.
C. Reproducción experimental del problema propuesto

Por cada grupo de trabajo prepararán las soluciones de forma experimental.
Ejercicios de aplicación
Lea atentamente los siguientes ejercicios que se presentan a continuación:
• Se necesita inyectarle al paciente un antibiótico que contiene 250.000 unidades

internacionales (U.I) Usted lo encuentra en su mesa. El médico ordena que se le
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debe suministrar sólo una concentración de 250 U.I. Realice la dilución adecuada
esta concentración teniendo en cuenta que se disuelve en agua esterilizada hasta
5 ml. Si se mezclan 5 ml de la solución anterior con 5ml de agua (solución 2).
¿Cuál es la concentración de esta última solución?
• En un laboratorio clínico se necesita preparar un patrón de glucosa. Cuántos gramos

tiene que pesar para preparar 10 ml de una solución stock o patrón de glucosa de
0.15M:
• Prepare la solución, calcule y redacte como la hace mediante un esquema
• Exprese la solución preparada en % (P/V)
• A partir de solución stock preparar cuatro diluciones en serie aplicando un factor de
dilución 1/2 y con un volumen final de 5 ml: Hacer los cálculos respectivos y hallar
las concentraciones de cada dilución
• Realice una dilución 1/5, 1/8, 1/10 del antibiótico anterior halle las concentraciones
de cada una.
• Usted encuentra una muestra de suero de un paciente que se observa lechosa y

muy viscosa debido a la alta cantidad de triglicéridos de la muestra, para el análisis
es necesario realizar 4 diluciones en serie aplicando un factor de dilución de 1/10 y
con un volumen final de 4.5 ml en cada una. ¿Cuántos ml tiene que sacar del suero
para poder obtener la primera dilución: es la misma cantidad para las demás
diluciones? Determine las concentraciones de cada dilución teniendo en cuenta
que las primeras tienen una concentración de 500mg/dl
• Se necesita conocer la concentración de proteínas en el suero de un paciente: para

esto diluya el suero 1/3 y este a su vez ½. Cómo realiza las diluciones. Si la última
dilución presenta una concentración de 8mg/dl de proteínas; ¿Cuál es la
concentración de proteínas en la segunda dilución y en la muestra original?
• Se le entrega la muestra de orina de un paciente con elevada concentración de

nitrógeno ureico, el equipo no la puede procesar, debido a la alta concentración. Por
lo tanto, usted de diluir la muestra. Mezcle 5ml de orina con 15 ml de agua y 5 ml de
HNO3. ¿Qué dilución se realizó? A partir de esta dilución prepare dos diluciones en
serie 1:9 tenga en cuenta que la concentración de nitrógeno en la orina es de
200mg%. ¿Cuál será la concentración de la última dilución?
• Preparar 100ml de una solución de NaOH 0.2 N.

a. A partir de la anterior solución preparar 50ml de otra solución con una concentración
de 0.3g/dl.
b. A partir de la anterior solución realizar 4 diluciones. Realice un esquema y los
cálculos respectivos para cada dilución.
c. Determine las concentraciones de cada dilución.
8. Cuántos ml de Ácido Clorhídrico concentrado de densidad 1,12 y concentración
36,5% (P/P) debe medir para preparar 50ml una solución 0.3 N. Realice los cálculos
respectivos y explique mediante un esquema.
a. A partir de esta solución prepare 10ml de una solución de ácido clorhídrico cuya
concentración sea de 0.75 g/dl.
b. A partir de la anterior solución realizar 4 diluciones. Realice un esquema y los
cálculos respectivos para cada dilución.
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c. Determine las concentraciones en molaridad (M) de cada dilución.
7. Nivel de Riesgo:
• Nivel 2: Riesgo Medio (Bata de Laboratorio, Guantes, Cofia, Tapabocas, Zapato

Manejo de residuos:
• Línea 8
• Línea 4
8. Bibliografías
TORRENEGRA, Rubén. Introducción al Análisis Químico Moderno. Bogotá D.C.

Publicaciones Universidad Javeriana. Pontificia Universidad Javeriana.1990. P. 9-25.
Disponible en Internet: http://es.wikipedia.org/wiki/Concentraci%C3%B3n.

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PRACTICA Nº 6
1. DILUCIONES EN SERIE O SERIADAS
2. Objetivos
• Aplicar unidades de concentración en la preparación de soluciones patrón.

• Preparar en forma correcta una solución patrón de concentración conocida.
• Identificar, seleccionar, y emplear las fórmulas adecuadas para diferentes procesos
de dilución.
mediante la preparación de soluciones utilizado diluciones en serie.
3. Marco Teórico
Preparación de patrones para elaboración de curvas de calibración
A. Diluciones en serie sin conocer las concentraciones a las que se desea llegar.
B. Diluciones NO en serie o no seriadas a partir siempre de la solución stock
conociendo las concentraciones a las que queremos llegar.
A. Diluciones en serie o seriadas

Se denominan en serie porque la dilución anterior ahora es la solución concentrada de
la siguiente y así sucesivamente como se muestra en el esquema. Para realizar
diluciones en serie al igual que para realizar cualquier dilución se necesita conocer el
factor de dilución y el volumen final (Vd), para así conocer el volumen que debemos
extraer de la muestra concentrada (Vc). Al realizar estas diluciones se pueden presentar
dos situaciones a saber:
• EL factor de dilución utilizado en todas las diluciones es el mismo, por lo tanto, el
volumen de la solución concentrada para extraer de cada tubo es el mismo y el del
solvente también lo es.
El factor de dilución varía de un tubo a otro y por lo tanto el volumen de la
solución concentrada es diferente y por lo tanto el volumen del solvente varía
para cada tubo
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Vc Vc Vc Vc
fd fd fd fd
Vd1 Vd2 Vd3 Vd4
En este ejemplo vamos a utilizar un ejemplo para la situación A:
La muestra del ejemplo Nº 1 que se diluyó debe diluirse más, si seguimos utilizando el
mismo factor de dilución ½ y utilizando un volumen final de 5ml, siempre debemos medir
del tubo anterior 2.5 ml y en todos los tubos adicionar 2.5ml del solvente ver esquema.
Si se requiere conocer las concentraciones de cada tubo se pueden presentar dos
situaciones:
• Que se conozca la concentración de la solución stock.
• Desconocer la contracción de la solución stock y sólo conocer la contracción de la
última solución.
Se desea conocer la concentración de las diluciones siguientes a la solución stock a la

cual se le conoce la concentración:
Para solucionar el primer caso recurrimos a la fórmula:
Cd= Cc x fd
Para el tubo Nº 1
Cd= *400mg/dl x ½ Cd= 200mg/dl
Para el tubo Nº 2
Cd = 200mg/dl x ½ Cd= 100mg/dl
Para el tubo Nº 3
Cd = 100mg/dl x ½ Cd = 50mg/dl
Para el tubo Nº 4
Vd= 50mg/dl x ½ Vd = 25mg/dl
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*Recuerde que esos datos provienen del ejemplo Nº 1 presentado en soluciones

y diluciones
Si vamos a resolver la segunda situación en donde se desconoce la contracción de la

solución stock y sólo se conoce la contracción de la última solución. que en este caso
sería de 25mg/dl se procede así:
Cc = Cd
fd
Cc = 25
½
25 x 2 = 50 mg/dl
* En este caso recuerde que al dividir por un fraccionario se multiplica por su

denominador.
Diluciones en serie: cuyo volumen inicial se extrae de la dilución anterior

Se van a preparar 4 patrones y se van a realizar 4 diluciones en serie a partir de la
misma solución stock anterior de 10 mg/dl. En este caso yo decido el factor de dilución
y el volumen final de cada dilución. Para este caso determiné que voy a diluir a ½ y el
volumen final es de 2 ml aplico la fórmula del ejemplo Nº 1.
Vc = Vd x fd.
Vc= 2ml x ½.
Vc= 1 ml de la solución concentrada.
Como es el mismo factor de dilución para todos los tubos entonces voy a extraer del
tubo anterior a la siguiente dilución 1 ml. y adiciono 1ml del solvente.
Tubo Concentración ml de H2O ml de solución x Dilución

1 1ml 1ml 1/2
2 1ml 1ml 1/2
3 1ml 1ml 1/2
4 1ml 1ml 1/2
Para determinar las concentraciones entonces aplico la fórmula Cd = CC x fd, teniendo

en cuenta que siempre la dilución anterior al último tubo que le voy a hallar la
concentración es la solución concentrada respecto a esta. Así como se hizo en el
ejemplo Nº 2.
4.Materiales
1 Vidrio d reloj
1 Espátula.
1 Agitador.
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6 Tubos de ensayo.
1 Pera.
1 Churrusco.
1 Gradilla.
Equipos
Balanza analítica
5. Reactivos
Agua destilada.
NaOH.
NaCl.
HCl.
Glucosa.
Sacarosa.
Azul de metileno.
6. Procedimiento
• Preparar 50ml de una solución de glucosa 0.1 M. A partir de la anterior solución
realizar 2 diluciones, factor de dilución (fd) de 1/2, volumen final de 5ml.
• Preparar 50ml de una solución de sacarosa 0.5 M. A partir de la anterior solución
• Preparar 50ml de una solución de NaOH 0.25 M. A partir de la anterior solución
• Preparar 50ml de una solución de NaCl 0.2 M. A partir de la anterior solución
• Preparar 50ml de una solución de KOH 0.15 M. A partir de la anterior solución
• Preparar 50ml de una solución de glucosa 0.5 M. A partir de la anterior solución
• Preparar 50ml de una solución de sacarosa 0.1 M. A partir de la anterior solución
• Preparar 50ml de una solución de NaOH 0.2 M. A partir de la anterior solución
• Preparar 50ml de una solución de NaCl 0.15 M. A partir de la anterior solución
• Preparar 50ml de una solución de KOH 0.25 M. A partir de la anterior solución


Por cada grupo de trabajo se prepararán las soluciones de forma experimental.
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7. Nivel de Riesgo:

Manejo de residuos:
• Línea 8
• Línea 4
8. Bibliografías


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PRACTICA Nº 7
1. DILUCIONES NO SERIADAS
2. Objetivos
• Aplicar unidades de concentración en la preparación de soluciones patrón.

• Preparar en forma correcta una solución patrón de concentración conocida.
• Identificar, seleccionar, y emplear las fórmulas adecuadas para diferentes
procesos de dilución.
mediante la preparación de soluciones utilizado diluciones no seriadas.
3. Marco Teórico
Preparación de patrones para elaboración de curvas de calibración
A. Diluciones en serie sin conocer las concentraciones a las que se desea llegar.
B. Diluciones NO en serie o no seriadas a partir siempre de la solución stock
conociendo las concentraciones a las que queremos llegar
Diluciones no seriadas: es decir que el volumen inicial siempre se extrae de la

solución stock
Para el primer caso se procede así: Las diluciones se harán al medio en una serie de
tubos rotulados con las concentraciones 5 mg/ml; 2 mg/ml; 1 mg/ml; 0.5 mg/ml; hallamos
el factor de dilución con la fórmula del ejemplo Nº 3 para conocer el volumen a tomar de
la solución stock (Vc) en cada dilución y fijamos un volumen final de 1ml; aplicamos la
fórmula del ejemplo Nº1
Tubo Concentración ml de H2O ml solución x Dilución

1 5 mg/ml 0.5 ml 0.5ml solución stock 1/2
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4.Materiales
1 Vidrio d reloj
1 Espátula.
1 Agitador.
6 Tubos de ensayo.
1 Pera.
1 Churrusco.
1 Gradilla.
Equipos
Balanza analítica
5. Reactivos
Agua destilada.
NaOH.
NaCl.
HCl.
Glucosa.
Sacarosa.
Azul de metileno.
6. Procedimiento
• Preparar 50ml de una solución de glucosa a una concentración de 5 g/l. A partir de
la solución stok realizar 2 diluciones de 1g/l y de 2g/l, volumen final de 5ml.
• Preparar 50ml de una solución de sacarosa a una concentración de 10 g/l. A partir
de la solución stok realizar 2 diluciones de 2g/l y de 3g/l, volumen final de 5ml.
• Preparar 50ml de una solución de NaOH a una concentración de 15 g/l. A partir de
• Preparar 50ml de una solución de NaCl a una concentración de 20 g/l. A partir de
• Preparar 50ml de una solución de KOH a una concentración de 25 g/l. A partir de
• Preparar 50ml de una solución de glucosa a una concentración de 30 g/l. A partir
de la solución stok realizar 2 diluciones de 6g/l y de 7g/l, volumen final de 5ml.
• Preparar 50ml de una solución de sacarosa a una concentración de 35 g/l. A partir
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Página
• de la solución stok realizar 2 diluciones de 7g/l y de 8g/l, volumen final de 5ml.

• Preparar 50ml de una solución de NaOH a una concentración de 10 g/l. A partir de
• Preparar 50ml de una solución de NaCl a una concentración de 15 g/l. A partir de
• Preparar 50ml de una solución de KOH a una concentración de 20 g/l. A partir de


Por cada grupo de trabajo se prepararán las soluciones de forma experimental.
7. Nivel de Riesgo:

Manejo de residuos:
• Línea 8
• Línea 4
8. Bibliografías


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PRACTICA Nº 8
1. PRECIPITACIÓN DIFERENCIAL DE PROTEÍNAS
2.Objetivos
• Reconocer la importancia de la fuerza iónica como método de separación de
proteínas.
• Separar proteínas de una mezcla mediante precipitación diferencial con sulfato de
amonio.
• Observar las proteínas totales de la mezcla y de las fracciones mediante método
cualitativo colorimétrico de Biuret.
3. Marco Teórico
Las proteínas biológicamente activas son polímeros formados por aminoácidos que se
eslabonan mediante enlaces peptídicos covalentes.
Proteínas plasmáticas
La sangre está constituida por formas celulares en suspensión (eritrocitos, leucocitos y

plaquetas) en un medio líquido llamado plasma. El plasma se obtiene cuando,
inmediatamente después de extraer la sangre, se le agregan anticoagulantes como
oxalato, citrato, EDTA o heparina y se centrifuga. Si se recoge sangre sin anticoagulante
y se deja que ésta coagule, el líquido que se separa se llama suero. El suero carece de
células y de factores de la coagulación incluyendo la proteína fibrinógeno, pues ésta ha
sido transformada en fibrina insoluble en el proceso de la coagulación. El fibrinógeno
constituye sólo de 3 a 6% del total de las proteínas en plasma.
El agua constituye 92 a 93% del plasma o suero y en ella encontramos electrolitos,
metabolitos, nutrientes, hormonas y proteínas en una proporción de 7 a 8%; de estos
solutos presentes, las proteínas son las que están en máxima proporción,
aproximadamente 6 a 8 g/dl de suero y este valor es 0.2 a 0.4 g/dl mayor en plasma
por la presencia de fibrinógeno.
Las proteínas plasmáticas son un grupo de más de 100 moléculas distintas con
características y funciones muy diversas, aunque para fines prácticos el término
"proteína plasmática" se usa para todas aquellas proteínas cuya concentración en el
plasma sea mayor a 10 mg/dl y que cumplan con alguna función específica dentro de
él. Aproximadamente son 20 las proteínas que cumplen con ambas definiciones. Todas
estas proteínas, a excepción del fibrinógeno, se encuentran tanto en plasma como en
suero.
Precipitación con fuerza iónica
Dado que una célula contiene miles de proteínas distintas la tares de separarlas y
determinar la estructura de una sola proteína es en extremo difícil pero no imposible. 6
Para separar las moléculas el bioquímico aprovecha las diferencias que existen entre
ellas. Tales diferencias pueden ser solubilidad, tamaño, masa, carga eléctrica o afinidad
por otras moléculas.5
Para pasar desde los tejidos a un material purificado, solemos utilizar diversas técnicas
distintas de modo secuencial. Una de las formas más antigua, más simple u aún
bastante eficaz para llevar a cabo la separación de una mezcla de proteínas es utilizar
la solubilidad diferente en disoluciones salinas concentradas.
6
CAMPBELL, M. K, Farell, S. O. Bioquímica.4ª Ed .México. Thomson. 2004. P. 116 -119.
5
MATHEWS, et al. Bioquímica. 3a. Editorial Mac Graw Hill. 2.000. P. 54-57; 166-167.
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Las proteínas se hacen insolubles en presencia de concentraciones elevadas de sales

y esta solubilidad varía mucho entre una proteína y otra y en disoluciones concentradas
varía rápidamente con la fuerza iónica.
Una proteína por ser un anfólito tienen muchos grupos ionizables ácidos y básicos; las
moléculas pueden tener una carga positiva, cero o negativa, dependiendo del pH de la
solución.
Por otro lado, al ser un polieléctrolito tienen múltiples grupos ionizables con una sola
clase de carga. Es decir, al comportarse como un anfólito o polieléctrolito depende del
pH y de la presencia de pequeños iones, que apantallan los macroiones de las otras
cargas.
Las proteínas se mantienen disueltas gracias a las interacciones no covalentes (puentes

de hidrógeno) con el agua. Al agregar a una solución de proteínas una sal esta se disocia
formando iones, estos iones hacen una fuerza que puede ser débil o fuerte. Cuando la
fuerza iónica es débil, la atmósfera contraiónica es muy extensa o grande, (en este
caso el de las proteínas) y el apantallamiento de la sal es ineficaz, la fuerza iónica
aumenta, la atmósfera contraiónica se contrae y se concentra alrededor del macroión, y
las interacciones de los grupos negativos y positivos se apantallan con eficacia.
El aumento de la fuerza iónica hasta un determinado punto aumenta la solubilidad de

las proteínas. Este efecto de disolver las proteínas incrementando la concentración
salina se denomina “saltin in”. Si este nivel se sobrepasa causa el efecto opuesto, en
soluciones salinas muy concentradas, gran parte del agua que normalmente solvata a
la proteína y ayuda a solubilizarlas está enlazada a los iones de la sal, impidiendo
una hidratación suficiente de la proteína y precipitan. Este efecto se denomina “saltin
out”.11. Estas proteínas se separan posteriormente por centrifugación.
El sulfato de amonio se emplea con frecuencia para estas precipitaciones selectivas o
diferenciales debido a que pueden conseguirse fuerzas iónicas bastantes altas sin dañar
las proteínas
A partir de una mezcla de proteínas, en esta práctica se harán precipitaciones al 40%

y al 70% de saturación con sulfato de amonio y se cuantificará la concentración de
proteínas de la mezcla y de cada uno de los sobrenadantes obtenidos después de
efectuada la precipitación.
El volumen de la solución saturada de sulfato de amonio necesario para una

determinada saturación se calcula mediante la siguiente ecuación:
Vs = Vp * (S2-S1)
(1-S2)
En donde:
Vs = volumen de la solución saturada de sulfato de amonio
Vp= Volumen de la mezcla de proteínas
S1= Saturación inicial expresada como
fracciónS2 = Saturación final expresada como
fracción.
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Identificación de proteínas mediante la reacción con el reactivo de Biuret
La presencia de proteínas en una mezcla se puede determinar mediante la reacción

del Biuret. El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solución acuosa alcalina (gracias a
la presencia de NaOH o KOH). La reacción se basa en la formación de un compuesto
de color violeta, debido a la formación de un complejo de coordinación entre los iones
Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los
enlaces peptídicos.
O C C O
HN NH
HC
R CH Cu2+ R
O O
HN NH
R CH HC R
La reacción debe su nombre al biuret, una molécula formada a partir de dos de urea
(H2N-CO-NH-CO-NH2), que es la más sencilla que da positiva esta reacción, común a
todos los compuestos que tengan dos o más enlaces peptídicos consecutivos en sus
moléculas.14
4. Materiales
• 1 vaso de precipitados de 250 ml.
• 2 tubos de centrífuga plásticos.
• 8 tubos de ensayo.
• 3 pipetas de 5 ml.
• 3 pipetas de 1 ml.
Equipos
• Centrífuga.
5. Reactivos
• Solución de proteínas plasmáticas.
• Sulfato de amonio saturado al 50%.
• Reactivo de Biuret.
• Hielo.
6. Procedimiento
• Cálculos del volumen de la solución saturante:
Aplique la ecuación para el cálculo del volumen de la sustancia saturante, calcule el
volumen del sulfato de amonio necesario para precipitar el 40% y el 70% de proteínas.
14
http://www.uam.es/personal_pdi/ciencias/bolarios/BiologiaCCAA/Guiones/Practica1.htm
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• Precipitación al 40 %:
Coloque en un tubo de ensayo 3 ml de solución de proteínas de saturación inicial S1
(0%) en el vaso de precipitado grande y que contenga hielo. Agregue lentamente la
solución de sulfato de amonio necesaria para precipitar proteínas al 40% de saturación
(S2). Deje en reposos durante 10 minutos y centrifugue por 10 minutos a 3.500 rpm. Si
el sobrenadante no es claro, repita el procedimiento. Obtenga de éste 1 ml y deposítelo
en un tubo marcado como 40% y añádale 2 ml de reactivo de Biuret. (Márquelo como
40%).
En otro tubo coloque 1 ml de la solución de proteínas al 100% y añádale 2ml de
reactivo de Biuret. (Márquelo como 100%).
• Precipitación al 70 %:
Obtenga del sobrenadante anterior 1 ml en un tubo y márquelo como 40 %, mida el
volumen restante, deposítelo en un tubo de centrífuga mantenido en hielo y agregue
lentamente el volumen de sulfato de amonio necesario para precipitar proteínas al 70%
de saturación. Deje en reposo durante 10 minutos y centrifugue por 10 minutos a
3.500 rpm. Si el sobrenadante no es claro no siga el procedimiento con este. Separe el
sobrenadante deposítelo en otro tubo y añádale 2ml de reactivo de Biuret y márquelo
como 70%.
D. Interpretación de resultados
¿Qué porcentaje de proteína se encuentra en el sobrenadante de cada tubo?
¿A qué porcentaje de precipitación corresponde cada tubo?
¿Represente con un dibujo como la fuerza iónica está afectando la solubilidad de las
proteínas en cada tubo?
Cuestionario
• ¿Cómo se clasifican las proteínas según su solubilidad?
• ¿Qué se entiende por fuerza iónica? Indique con un dibujo.
• ¿Qué se entiende por electroforesis?
• Consulte como se separan electroforéticamente las proteínas del plasma
sanguíneo. Realice un dibujo.
• ¿Qué importancia tiene este examen a nivel clínico?
7. Nivel de Riesgo:

Zapato Cerrado Bajo, Pantalón Largo)
Manejo de residuos:
• Línea 8
8. Bibliografías
CAMPBELL, M. K, Farell, S. O. Bioquímica.4ª Ed .México. Thomson. 2004. P. 116
-119.
13. MATHEWS, et al. Bioquímica. 3a. Editorial Mac Graw Hill. 2.000. P. 54-57; 166- 167.
http://www.uam.es/personal_pdi/ciencias/bolarios/BiologiaCCAA/Guiones/Practica1.htm
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PRACTICA Nº 9
1. HEMOCLASIFICACIÓN
2. Objetivos
• Comprender el concepto de grupo sanguíneo y conocer los tipos sanguíneos más

importantes.
• Conocer la importancia de determinar el grupo sanguíneo en la terapia transfusional
y el sistema de compatibilidades e incompatibilidades transfusionales.
• Determinar el grupo sanguíneo ABO y Rh del alumno.
3. Marco Teórico
Las membranas de las células del organismo humano incluyendo los eritrocitos están
formadas por varias capas de moléculas lipídicas, proteicas, y carbohidratos distribuidos
en tal forma que permiten una separación entre el medio intracelular y el medio
extracelular. Los carbohidratos se encuentran formando oligosacáridos y polisacáridos
que en su mayor parte están ligados a lípidos y proteínas.
Muchas de estas sustancias, es decir, glicolípidos y glicoproteínas tienen capacidad
antigénica y constituyen los llamados grupos sanguíneos. Se cree también que algunos
grupos sanguíneos son proteínas puras, pero es posible que dichas sustancias solo
sean las portadoras de los determinantes antigénicos y que siempre necesiten de lípidos
o carbohidratos para efectuar como antígenos completos. Estos antígenos de la
membrana están determinados genéticamente. Los genes que controlan la estructura
de un antígeno en particular, ocupan un lugar correspondiente (loci) en un par de
cromosomas homólogos, en esta forma para todos los genes que se encuentran en
cromosomas autosómicos un individuo puede ser homocigoto o heterocigoto.
Estos antígenos pueden formar parte de la membrana del glóbulo rojo como ser el
antígeno Rh que es una lipoproteína o estar adherido a la superficie de los glóbulos
rojos, como los antígenos ABO que químicamente son lipopolisacáridos.
Algunos antígenos sanguíneos (Ej. ABO) están presentes en la mayoría de los tejidos
y líquidos corporales y otros como el Rh, K, etc. limitados y formando parte de las
membranas de los glóbulos rojos. La frecuencia con que ocurren los grupos sanguíneos
en poblaciones es variable. Algunos se encuentran casi universalmente ("Antígenos
públicos"). Además, existen antígenos propios de los leucocitos y plaquetas, pero estos
generalmente no se consideran en lo que se refiere comúnmente como pruebas
pretransfusíonales. Las diferencias entre la sangre de una persona y la de otra están
determinadas genéticamente en cuanto se refiere a su individualidad de grupos
sanguíneos. El descubrimiento de Landsteiner del grupo ABO fue seguido del
descubrimiento de los grupos M, N, P en 1918 y luego por el Rh en 1939. Hoy en día se
conocen más de 15 sistemas de grupos sanguíneos distintos como muchas variantes
dentro de cada sistema, la mayoría tienen 2 o 3 alelos, pero por ejemplo el Rh tiene por
lo menos 28 alelos.
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Algunos de estos grupos ocurren en las personas en forma natural, otros pueden no
existir del todo. Algunos se acompañan de anticuerpos naturales, otros sistemas solo se
acompañan de anticuerpos cuando estos se desarrollan como resultado de
transfusiones o isoinmunización.
ANTICUERPOS SANGUÍNEOS
La mayoría de las pruebas serológicas en inmunohematología dependen de reacciones
entre antígenos en los glóbulos rojos y anticuerpos en el suero. Los anticuerpos
sanguíneos son usualmente Ig G y/o IgM y en casos raros IgA. Lascapacidades de fijar
complemento por algunos de estos anticuerpos son también importantes para el
entendimiento de algunos fenómenos en vitro y en vivo. Usualmente los anticuerpos IgG
tienen mayor significado clínico y en Enfermedad Hemolítica del recién nacido son los
anticuerpos IgG los responsables de la enfermedad. Por otro lado, reacciones
hemolíticas transfusionales causadas por anticuerpos IgM con fijación de complemento
pueden causar hemolisis intravascular severa (ej. incompatibilidad de grupo ABO) y
reacciones transfusionales hemolíticas causadas por anticuerpos IgG pueden causar
hemolisis extravascular y reacción menos severa (Ej. incompatibilidad Rh).
REACCIONES ANTIGENO ANTICUERPO. En la combinación de un anticuerpo con su
antígeno específico en los eritrocitos, el azúcar terminal del antígeno se combina con el
anticuerpo. Esta combinación es específica así por ejemplo los anticuerpos anti A solo
reaccionarán con el antígeno A. En inmunohematología la respuesta inmunológica de
importancia es la humoral o mediada por linfocitos B, caracterizada por producción de
anticuerpos por células plasmáticas como respuesta a estímulo antígeno específico.
Existen dos tipos de respuesta inmune: a) Respuesta primaria a la primera exposición
al antígeno, caracterizada por elevación transitoria de anticuerpos AgM (y a veces IgG).
En tal reacción el antígeno proporciona la información necesaria para la "memoria" a
dichos anticuerpos, de tal forma que la nueva exposición a dicho antígeno produciría
reconocimiento y rechazo al mismo. Debe recordarse que dicha protección es específica
(solo contra el antígeno original), b) Respuesta secundaria que ocurre con segunda
exposición al antígeno, usualmente es una respuesta inmune severa con aparición
principalmente de IgG que una vez producido pueden persistir en la circulación en
niveles detectables por muchos años, incluso toda la vida o en algunos casos
desaparecer rápidamente después de su aparición.
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No todas las personasresponden a determinados antígenos, algunos no responden aún

con exposición repetida y prolongada a determinados antígenos y son incapaces de
formar anticuerpos (Ej. 30o/o de personas Rho (D) negativo, aún con múltiples
exposiciones a eritrocitos no producen anti-D).
GRUPOS SANGUÍNEOS
Es necesario conocer y entender bien los principios básicos de la inmunología en lo que

respecta a la reacción antígeno anticuerpo si se quiere entender la inmunología de los
grupos sanguíneos. Por una parte, los grupos sanguíneos son antígenos y pueden
conducir a la producción de anticuerpos específicos si son inoculados en forma de
sangre en una persona distinta. Algunos anticuerpos existen fisiológicamente cuando
la persona carece del antígeno correspondiente (Anticuerpos naturales).
ANTICUERPOS "COMPLETOS" E "INCOMPLETOS”

El término "anticuerpos completos" o de ocurrencia natural" se utiliza para indicar
anticuerpos IgM capaces de producir aglutinación visible de glóbulos rojos suspendidos
en solución salina, ej. anti A, anti B, Se les ha llamado también de "ocurrencia natural"
nombre que probablemente es incorrecto ya que aparentemente son producidos por
estimulación antigénica. Anticuerpos "incompletos" usualmenteIgG son capaces de
adherirse al antígeno, pero son incapaces de aglutinar glóbulos rojos suspendidos en
salina y para demostrar la presencia de las mismas es necesario utilizar soluciones o
medios potenciadores, como ser: albúmina, enzimas, suero antiglobulina, etc. Estos
anticuerpos solo aparecen con estimulación antigénica.
Los glóbulos rojos están rodeados de cargas electronegativas, las que sirven para
mantener los eritrocitos constantemente separados unos de otros evitando así,
agregación espontánea y permitiendo que los glóbulos rojos tengan mayor área de
superficie y así adecuado transporte de oxígeno. También los eritrocitos están rodeados
de cationes, formando así una capa doble o nube iónica que rodea al eritrocito y viaja
con este como que formara parte del mismo. Esta carga eléctrica que mantiene los
eritrocitos aparte el uno del otro es medida en el margen de la nube iónica y este
punto se llama "plañe of shear". La carga eléctrica media en este punto se denomina
potencial Zeta. Esta carga eléctrica mantiene los eritrocitos separados unos de los otros
a una distancia mayor de 25 Nanómetros. La longitud de la molécula de IgM es
aproximadamente de 100 Nanómetros y por lo tanto puede aglutinar glóbulos rojos
suspendidos en solución salina. La molécula de IgG es menor de 25 Nanómetros y por
lo tanto, aunque se adhiere al antígeno (sensibilización) no produce aglutinación visible.
Para poder demostrar dichos anticuerpos IgG es necesario disminuir el potencial zeta y
esto se logra con el uso de: suero antiglobulina o suero de Coombs, albúmina, enzimas,
etc.
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SISTEMA ABO
El sistema ABO fue el primer grupo sanguíneo descubierto. Landsteiner en 1900

descubrió que los glóbulos rojos pueden clasificarse en A, B y O, de acuerdo a la
presencia o ausencia de antígenos reactivos en la superficie de los glóbulos rojos.
Dichos antígenos son de mucha importancia en transfusión sanguínea, trasplante de
tejidos y enfermedad hemolítica del recién nacido. Compatibilidad de grupo ABO es
esencial en toda prueba serológica pretransfusional. Naturaleza de los antígenos A y
B. Los antígenos A y B son glicoproteínas, producidas por genes alelicos en un locus
único, localizados en la parte proximal del brazo corte del cromosoma 9. Los antígenos
correspondientes se encuentran aparentemente adheridos a la membrana de los
glóbulos rojos. La especificidad antigénica es conferida por el azúcar, terminal; Ej.
azúcar N-ace- teilgalactosamina proporciona la especificidad antigénica A y el azúcar
galactosa determina la actividad B. Los antígenos ABO están presentes en todos los
tejidos excepto el sistema nervioso central, de donde se deduce la importancia de dicho
sistema en transfusión de eritrocitos, leucocitos, plaquetas y transplantes de tejidos,
también se encuentran presentes en las secreciones, como polisacáridos solubles. El
polisacárido presente en las secreciones es químicamente idéntico al presente en los
glóbulos rojos. Existen cuatro genes o sistemas genéticos hereditables que, aunque
diferentes, interaccionan internamente entre sí, que son: se, H, ABO y Lewis. Los
productos finales o antígenos son los que son capaces de detectar mediante pruebas
serológicas. El sistema Lewis probablemente no es un grupo sanguíneo como tal, sino
más bien substancias en el plasma que son absorbidas secundariamente a los glóbulos
rojos. El 8O0/0 de la población tiene gen Secretor (Se/Se, Se/se) y por lo tanto capaces
de secretar ABH y Lewis en las secreciones (Ej: saliva) y son llamados secretores. "El
20o/o restante (se/se) son llamados "no secretores" por lo tanto incapaces de secretar
en líquidos corporales dichos polisacáridos con especificidad antigénica.
LANDSTEINER descubrió la existencia de dos factores hereditarios en los hematíes: los
aglutinógenos o antígenos A y B, y en el plasma aglutininas o anticuerpos específicos
para antígenos del mismo sistema. Los eritrocitos de algunos individuos poseen el
antígeno A, otros individuos tienen en sus eritrocitos el antígeno B, un tercer grupo de
personas posee ambos antígenos y, finalmente, hay un cuarto grupo cuyos hematíes no
tienen en su membrana ninguno de estos antígenos. Existen, por lo tanto, cuatro tipos
sanguíneos de este sistema que denominamos sistema A B 0, estos son: A, B, AB y 0
(cero), los cuales están determinados genéticamente. Dado que este sistema de
antígenos no está, exclusivamente, distribuido en las membranas de los hematíes, sino
que, bien al contrario, este tipo de antígenos se encuentra en multitud de secreciones
y/o células, los contactos interespecíficos permiten que se desarrolle actividad
inmunitaria contra los antígenos que no se poseen. Ello permite que se produzca la
situación siguiente:
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SISTEMA Rh
Además de los antígenos del sistema ABO, existen otros innumerables aglutinógenos
en los eritrocitos. Los del sistema Rh tienen importancia clínica En este sistema los
individuos se clasifican como Rh positivos o Rh negativos, perteneciendo el 85% de la
población española al primer tipo.
A diferencia del sistema de grupos anterior su distribución en las células y secreciones
orgánicas está menos extendida, lo que significa que para que en el plasma de una
persona Rh negativa existan anticuerpos Rh se hace necesario un primer contacto, que
active el sistema inmunitario.
En realidad, el sistema Rh está determinado genéticamente por tres pares de alelos
(C, c, D, d, E y e), los cuales determinan la expresión en la membrana de los hematíes
de los antígenos correspondientes (C, D y E). El más importante es, con mucho, el
aglutinógeno D.
Cuando se inyectan glóbulos rojos que contienen el factor Rh, en una persona Rh
negativa, las aglutininas anti-Rh se desarrollan lentamente alcanzando su máxima
concentración de 2 a 4 meses después.
La respuesta inmune es mucho más potente en unas personas que en otras. Si se
producen más exposiciones al antígeno la persona puede quedar sensibilizada al factor
Rh.
En una transfusión de células Rh positivo a un individuo Rh negativo puede no
observarse una reacción inmediata, sin embargo, al cabo de unas 2-4 semanas se ha
sintetizado suficiente cantidad de aglutininas para eliminar la totalidad de las células
Rh positivas que se encontraban circulantes. Se produce, por tanto, una reacción
retardada, aunque habitualmente débil. En subsiguientes transfusiones, cuando la
persona está inmunizada, la reacción puede ser inmediata y potente, del mismo tipo que
las provocadas por el sistema AB0. 15-16
4. Materiales
Lancetas estériles para punción
Portaobjetos
Algodón
Alcohol
Palillos
15
. Salomón Grispan. GRUPOS SANGUÍNEOS ABO Y Rh. MEDICA HONDUR. VOL.16. 51-1983, 103-114.
16
http://ocw.unican.es/ciencias-de-la-salud/fisiologia-humana-2011-g367/material-de- clase/bloque-tematico-2.-
fisiologia-de-la-sangre/tema-3.-grupos- sanguineos/grupos_sanguineos.pdf
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Equipos
No aplica
5. Reactivos
1.- sangre total

2.- suero anti-A
3.- suero anti-B
4.- suero anti-D
6. Procedimiento
1. Desinfectar con alcohol el pulpejo del dedo pulgar de un voluntario y puncionar
con la lanceta estéril. Con presión suave hacer salir una gota gruesa de sangre sobre
el dedo.
2. Mediante la parte gruesa de un palillo de madera tomar una pequeña cantidad

de sangre y agregarla a la gota del suero anti-A que está en el portaobjetos; mezclar
perfectamente, con otro palillo diferente en otro portaobjetos repetir esta misma
maniobra con la gota de suero anti-B mezclando perfectamente. Por último, en otra
lámina portaobjetos añadir una gota de anti-D y mezclar nuevamente.
3. Después de mezclar perfectamente cada suero con los glóbulos rojos, se hace
girar la solución sobre el portaobjetos y se observa para apreciar
macroscópicamente las reacciones de aglutinación. La temperatura no debe ser
mayor que la ambiental. Las reacciones de aglutinación se producen en unos
cuantos segundos. El tiempo máximo para llevar a cabo la lectura de la reacción
es de tres minutos.
Observamos los resultados: si hay agregación se formarán pequeños grumos.
Interpretación de los resultados
• La sangre problema es del grupo A si aglutina a los 3 minutos con el suero anti A
y no aglutina con el suero anti-B.
• La sangre problema es del grupo B si aglutina a los 3 minutos con el suero anti B
y no aglutina con el suero anti-A.
• La sangre problema es del grupo AB si aglutina con el suero anti A y anti B.
• La sangre problema es del grupo 0 si no aglutina ni con el suero anti A ni con
anti-B.
La sangre problema es del grupo Rh+ si aglutina a los 3 minutos con el suero anti-
D.
• La sangre problema es del grupo Rh- si no aglutina a los 3 minutos con el suero
anti-D.
Compatibilidades transfusionales del grupo AB0.-
• Un individuo del grupo Rh + es receptor de sangre del grupo Rh + y del grupo Rh-
• Un individuo del grupo Rh- es receptor de sangre del grupo Rh- y no del grupo
Rh+.
• Anotar los resultados: El signo menos (-) indica que no hay aglutinación; el signo
(+) significa la presencia de aglutinación.
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Nombre Grupo A Grupo B Grupo AB RH + RH-
Cuestionario
1. ¿Investiga que es un antígeno y anticuerpo, respectivamente?

2. ¿Por qué razón el grupo AB es denominado receptor universal?
3. ¿Por qué razón el grupo O es denominado donante universal?
4. Las personas Rh negativas, al no presentar el factor Rh, pueden donar a las personas
Rh positivas sin causar problemas, pero habitualmente no se hace. ¿Cuál es la razón?
5. Investiga en qué consiste la enfermedad hemolítica del recién nacido.
7. Nivel de Riesgo:
Nivel 3: Riesgo alto (Bata de Laboratorio, Guantes, Cofia, Tapabocas, Zapato

8. Manejo de residuos:
• Línea 8
• Línea 4
9. Bibliografías
Salomón Grispan. GRUPOS SANGUÍNEOS ABO Y Rh. MEDICA HONDUR. VOL.16.
51-1983, 103-114.
http://ocw.unican.es/ciencias-de-la-salud/fisiologia-humana-2011-g367/material-de-
clase/bloque-tematico-2.-fisiologia-de-la-sangre/tema-3.-grupos-
sanguineos/grupos_sanguineos.pdf
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PRACTICA Nº 10
1. REACCIONES ENZIMÁTICAS
2. Objetivos
• Reconocer a las enzimas como proteínas que aceleran y controlan las reacciones
químicas en los seres vivos.
• Identificar la presencia de diversas clases de enzimas en tejidos animales y
vegetales.
• Aplicar los componentes teóricos en las reacciones enzimáticas observadas.
• Discutir la presencia de inhibidores enzimáticos que pueden preservar algunos
alimentos.
3.Marco Teórico
Un automóvil obtiene su energía de la oxidación del hidrocarburo gasolina a dióxido de
carbono y agua en una explosión controlada dentro de un motor en el que los gases
pueden alcanzar temperaturas de 2200 ºC. En contraste, la célula viva obtiene energía
oxidando el carbohidrato glucosa a dióxido de carbono y agua a una temperatura (en
el ser humano) de 37ºC. 6
El ingrediente secreto en los organismos vivos es la catálisis, un proceso llevado a

cabo por enzimas proteínicas. Una reacción que requiere muchas horas para
completarse no puede ser útil, desde el punto de vista metabólico, para una bacteria que
ha de reproducirse en 20 minutos, o para una célula nerviosa humana que debe
responder a un estímulo de forma instantánea.
De hecho, la vida aprovecha hábilmente el hecho de que la mayoría de las reacciones

deban estar catalizadas.
Un catalizador es una sustancia que aumenta la rapidez o la velocidad de la reacción
química, sin verse alterada ella misma en el proceso global. La sustancia sobre la que
actúa una enzima se denomina sustrato de esa enzima. Y lo que se obtiene es
denominado producto de la reacción.
Podemos apreciar el poder de la catálisis enzimática con un ejemplo: la descomposición
del peroxido de hidrógeno en agua y oxígeno:
2H2O2 a 2H2O +O2
Esta reacción, aunque muy favorecida termodinámicamente, es muy lenta, a menos que
sea catalizada. Se puede comprar una botella de una solución de H2O2 (agua
oxigenada) y guardarla en un armario durante muchos meses antes de que se degrade.
Sin embargo, si añadiera un trocito de ión férrico, observaría que la velocidad de la
reacción aumenta unas 1000 veces. La proteína hemoglobina que contienen hierro, es
aún más eficaz para incrementar la velocidad de esta reacción.
6
CAMPBELL, M. K, Farell, S. O. Bioquímica.4ª Ed. México. Thomson. 2004. P. -134-135
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Si uno aplica la solución de peróxido de hidrógeno a un corte de un dedo, se observa

un burbujeo inmediato del O2 liberado: la reacción se está produciendo ahora
aproximadamente un millón de veces más rápidamente que el proceso sin catalizar.
Pero pueden alcanzarse velocidades aún. La catalasa una enzima presente en muchas
células, aumenta la velocidad de descomposición del H2O2 sin catalizar
aproximadamente 1000 millones de veces. Algunas reacciones celulares producen
peróxido de hidrógeno que es un oxidante peligroso, por lo que la catalasa se ha
perfeccionado para defenderse de él.
Este ejemplo muestra que la velocidad de una reacción favorable depende en gran
medida, de que exista o no un catalizador y de la naturaleza del mismo. 5
4. Materiales
Papa.
Cuchillo.
Manzana.
Mortero.
Cuchara o espátula.
Portaobjetos.
Pipeta Pasteur.
1 Vaso de precipitados 50 ml.
5. Reactivos
100 ml de peróxido de hidrógeno o “agua oxigenada” comercial.
1 Pastilla de vitamina C.
6. Procedimiento
A. Presencia de polifenol oxidasa de manzana
• Moler una pastilla de vitamina C hasta que quede un polvo fino - Cortar una
manzana por la mitad.
• Colocar en una mitad de la manzana el polvo de la vitamina C, procurando que
quede bien esparcido.
• Dejar ambas mitades de manzana a temperatura ambiente durante 60 minutos y
observar los cambios de coloración.
B. Presencia de catalasa de papa

• Cortar una rebanada de papa y colocarla sobre un portaobjetos.
• Agregar 3 gotas de agua oxigenada sobre la rebanada de papa.
• Ver la actividad de la catalasa por el burbujeo de oxígeno que se desprende.
• Observar el tiempo en el cual se llevan a cabo la reacción.
C. Interpretación de resultados
Después de efectuar todos los experimentos en cada caso:
• ¿Cómo evidencia que se produjo una reacción enzimática?
• ¿A qué se debe la presencia del color marrón en la manzana que no tiene vitamina
C?
• ¿Qué papel desempeña la vitamina C sobre la manzana expuesta al oxígeno?
• ¿A qué se debe la producción de burbujas en el experimento de la catalasa?
• ¿Y cuando dejan de formarse?
5
MATHEWS, et al. Bioquímica. 3a. Editorial Mac Graw Hill. 2.000. P. 404-405
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• ¿Qué es lo que estamos midiendo en ese caso?

• ¿Cómo comprobar que el gas desprendido en el experimento con catalasa es
oxígeno?
Cuestionario
• Diseñe un experimento para averiguar cómo varía la velocidad de la reacción. Y
así poder determinar qué tan veloz y afín es la enzima por su sustrato en el caso
de los experimentos realizados en clase. Realice un esquema.
• ¿Cómo calculan la velocidad total de cada una de las reacciones realizadas en el
laboratorio?
• ¿Cuál es el efecto de agregar diferentes cantidades de sustrato sobre la velocidad
de esta reacción? Justifiquen sus conclusiones.
7. Nivel de Riesgo:

Manejo de residuos:
• Línea 19
8. Bibliografías
CAMPBELL, M. K, Farell, S. O. Bioquímica.4ª Ed .México. Thomson. 2004. P. -

134- 135
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PRACTICA Nº 11
1. FACTORES QUE AFECTAN LAS REACCIONES ENZIMÁTICAS
2.Objetivos
• Reconocer que las reacciones enzimáticas dependen de factores como:
temperatura, pH y la presencia de sales.
• Comprobar que el pH es un factor que altera o modifica la actividad enzimática.
• Reconocer que las enzimas son catalizadores orgánicos que sólo se encuentran
en los seres vivos.
3. Marco Teórico
Las enzimas al ser proteínas contienen grupos ionizables, cuyo comportamiento
depende del pH y de las moléculas con carga que se encuentran a su alrededor. Es bien
sabido que la función biológica de las proteínas está directamente relacionada con su
estructura y si tenemos en cuenta la influencia del medio externo sobre las proteínas es
de pensar que es necesario mantenerlas en un ambiente adecuado para que su
estructura no se modifique y por lo tanto pueden cumplir biológicamente su función.
Otra variable que influye también sobre la estructura de las proteínas, es la temperatura.
Esta junto con el pH influyen como se describe a continuación:
Influencia de la temperatura:
La temperatura puede causar un incremento de la velocidad de la reacción o el efecto

contrario así:
• Incremento de la velocidad con la temperatura: En general, la velocidad de la

reacción se incrementa con la temperatura hasta que un punto máximo es
alcanzado. Este incremento se debe a que aumenta el número de moléculas ricas
en energía que pueden pasar la barrera energética de estado de transición, para
formar a los productos.
• Decremento de la velocidad con la temperatura: la elevación excesiva de la
temperatura del medio que contiene a las enzimas, resulta en un decremento de la
velocidad como resultado de la desnaturalización, es decir, la pérdida de la
estructura tridimensional de las enzimas.17 En este momento se rompen enlaces de
tipo no covalente como los puentes de hidrógeno que estabilizan las estructuras
secundarias e incluso terciarias.
La mayor parte de las enzimas presentan su actividad máxima en el intervalo

de 30 a 40 °C y por encima de 45°C comienzan a desnaturalizarse. La
desnaturalización de una proteína se ha definido como:
“Un cambio de importancia en la estructura original, sin rotura de ninguno de los enlaces
químicos primarios que unen entre sí a los aminoácidos “.18 Es decir, solo hay
rompimiento de los enlaces no covalente tipo puentes de hidrógeno.
El término inactivación de una enzima se refiere a la pérdida de la actividad. Las
temperaturas de refrigeración, congelación, escaldado, blanqueado también inactivan
a las enzimas.
Influencia del pH:
17
http://laguna.fmedic.unam.mx/~evazquez/0403/velocidad%20reaccion%20enzimatica.html
18
http://www.csgastronomia.edu.mx/profesores/calimentos/quimica2/Capitulo%20VI/enzimas%20siguiente.htm.
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El sitio activo de la enzima puede contener aminoácidos ionizables, la concentración de

H+ afecta la velocidad de la reacción en muchas formas. Primero el proceso catalítico
usualmente requiere que la enzima y el sustrato tengan grupos químicos en una forma
iónica particular para poder interactuar. Por ejemplo, la actividad catalítica puede
necesitar a un grupo amino, por ejemplo, de una lisina en estado protonado (- NH +)
+ 19
o no3 (-NH ), el pH2 modifica este estado y por tanto a la velocidad de la reacción. Esto
puede causar efectos como:
• Desnaturalización de la enzima: pH extremos pueden ocasionar la

desnaturalización de las enzimas, debido a que la estructura con estos cambios es
posible modificar las interacciones iónicas que intervienen en la estabilidad de la
enzima en su estado nativo.
• El pH óptimo varía para las diferentes enzimas: El pH al cual las enzimas

adquieren su máxima actividad al que se le denomina “pH óptimo”. es diferente para
cada una de ellas y depende de la secuencia de aminoácidos que las conforman,
por supuesto, también está relacionado con el microambiente celular en el cual
desarrollan su catálisis. La mayor parte de las enzimas presentan su actividad
máxima a pH entre (4,5 - 8). Pero existen enzimas como Por ejemplo la pepsina que
es una enzima digestiva que actúa en el estómago, posee un pH óptimo de alrededor
de 2 unidades, por el contrario, otras enzimas que actúan a pH neutro, o la arginasa
cuyo pH es de 10 otras se desnaturalizan a pH alcalino o ácido.
Al comprobar experimentalmente la influencia del pH y la temperatura en la velocidad

de las reacciones enzimáticas se obtienen curvas que indican que los enzimas
presentan un pH y una temperatura óptima de actividad. (Ver figura abajo).18
• En general el pH puede afectar:

• Al centro activo que puede contener aminoácidos con grupos ionizados que
pueden variar con el pH.
• La ionización de aminoácidos que no están en el centro activo puede provocar
modificaciones en la conformación de la enzima.
• El sustrato puede verse afectado por las variaciones del pH.
4. Materiales
Portaobjetos.
1 papa.
1 hoja de planta.
1 corazón de pollo.
18
http://www.csgastronomia.edu.mx/profesores/calimentos/quimica2/Capitulo%20VI/enzimas%20siguiente.htm.
19
http://laguna.fmedic.unam.mx/~evazquez/0403/velocidad%20reaccion%20enzimatica.html
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Polvo de levadura.
1 champiñón.
Pinzas.
Vasos desechables.
Limón.
Cuchara.
Mechero.
Malla.
Trípode.
Equipos
Baño serológico.
5. Reactivos
100 ml de peróxido de hidrógeno.
HCl concentrado.
Papel de pH.
Azúcar .
Sal.
Limadura de hierro.
Hielo.
6.Procedimiento
A. Factores que afectan la catalasa

En una cuadrícula organiza dos portaobjetos con el material indicado, como se
muestra en el dibujo:
Azúcar Sal Papa Hoja Corazón Levadura Champiñón Limadura
SR-sin reacción L-lento R-rápido MR-muy rápido
Un portaobjetos es para evidenciar la actividad enzimática sin agregarle HCl; y el otro

para evidenciar la reacción enzimática agregando HCl:
• Mida el pH de cada material sin agregar HCl con el papel indicador de pH.
• Adicione una gota de peróxido de hidrógeno a cada material. Observe la presencia
de burbujas.
• Agregue una gotica de HCl y con el papel indicador vuelva a medir el pH agregue
una gotica de peróxido de hidrógeno.
• Observe y anote lo que ocurrió en cada uno de los portaobjetos, antes y después
de agregar el peróxido de hidrógeno, marca la reacción a “ojo” de acuerdo al pH=5
y pH=1.
B. Factores que afectan de las enzimas del metabolismo de la levadura

• Marcar los vasos con los siguientes títulos: control, caliente, frío, ácido y sal.
• Colocar en 5 vasos desechables transparentes una cantidad igual del polvo de
levadura, azúcar y 50 ml de agua tibia.
• El vaso denominado control debe contener solo la mezcla anterior.
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• Mida el tiempo desde que le agregue el azúcar a la levadura y la aparición de

burbujas en el vaso control.
• Al vaso marcado como frio colocarlo sobre el hielo. Compare con el vaso control.
• Al vaso marcado como caliente colocarlo sobre el baño serológico. Compare con el
vaso control.
• Al vaso marcado como ácido añadirle jugo de limón. Compare con el vaso control.
• Al vaso marcado como sal añadirle una cucharada de sal.
• Dejar todos los vasos durante 60 minutos y al final observar la actividad de las
enzimas por la producción de bióxido de carbono que se ve en la formación de
espuma.
C. Interpretación de los resultados
Con base en los siguientes parámetros.
SR-sin reacción L-lento R-rápido MR-muy rápido
Cuestionario
• ¿Cómo la temperatura el pH y las sales afectan la estructura química de las
enzimas?
• ¿Cómo se verán afectados los parámetros cinéticos de las enzimas?
• ¿Podrían esos factores ser inhibidores enzimáticos?
• ¿Cuál de los materiales de la práctica se clasifican como vivos y no vivos?
Justifique su respuesta
• Identifique la o las enzimas con las cuales usted evidenció la reacción en cada
tejido vivo. ¿En cuál material de la práctica se encuentran estas enzimas?
• ¿Cuál es la reacción que efectúa cada enzima?
• En la reacción bioquímica que describe cada proceso. Identifique sustrato, enzima
producto coenzima.
• ¿Cuáles factores afectaron el metabolismo de las células de cada tejido? Dé una
explicación química.
• ¿Qué indica el tiempo durante el cual salen burbujas? Consulte la actividad de una
enzima de la levadura, en otras frutas o verduras.
• ¿Por qué la limadura de hierro siendo un elemento sin vida se observa la
presencia de burbujas?
7. Nivel de Riesgo:

Manejo de residuos:
• Línea 18
• Línea 1
8. Bibliografías
http://laguna.fmedic.unam.mx/~evazquez/0403/velocidad%20reaccion%20enzimatica.
html
http://www.csgastronomia.edu.mx/profesores/calimentos/quimica2/Capitulo%20VI/enzi
mas%20siguiente.htm.
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PRACTICA Nº 12
1. FERMENTACIÓN ALCOHÓLICA
2. Objetivos
• Reconocer el proceso de fermentación como un proceso metabólico realizado por
diversos microorganismos a partir de compuestos orgánicos como los carbohidratos.
• Obtener alcohol etílico a partir de sustancias fermentables: azúcares, panela y fruta.
• Conocer y aplicar el método de separación de compuestos llamado destilación.
• Realizar pruebas para identificación de alcoholes.
3.Marco Teórico
La mayoría de los organismos consumimos glucosa y la oxidamos para obtener energía,
un producto de esta oxidación es el piruvato, este tiene números destinos alternativos
en los microorganismos anaerobios. Por ejemplo, las bacterias del ácido láctico reducen
el piruvato a lactato en un solo paso. En cambio, las levaduras convierten el piruvato en
etanol en una ruta de dos pasos. Esta fermentación alcohólica comienza por el piruvato
decarboxilasa. Que va seguida de la reducción del acetaldehído a etanol, que depende
del NADH, catalizada por la enzima alcohol deshidrogenasa. (Ver figura abajo).5
La primera reacción requiere la presencia como coenzima de pirofosfato de tiamina.
Esta coenzima, procedente de la vitamina B1, interviene en varias reacciones de
transferencia de grupos que implican una porción aldehído activada.
Glucosa
Pi
1, 3 Bifosfoglicerato
Gliceraldehído ADP
NAD+ NADH+ H+ Piruvato ATP

Piruvato decarboxilasa
Etanol Acetaldehído
Alcohol deshidrogenasa
La producción industrial del etanol ha adquirido una importancia tremenda cuando la

humanidad intenta considerar dos problemas serios:
La sustitución del petróleo, no renovable, por fuentes de energía renovables; y la
utilización de los materiales biológicos de desecho. Los esfuerzos en estos campos
necesitan de la bioingeniería para generar cepas bacterianas que puedan convertir
sustancias como la celulosa de los desechos humanos a animales a hexosas.
Los tejidos animales también tienen alcohol deshidrogenasa, a pesar de que el etanol
5
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no es un producto metabólico importante en los animales.

Algunas de las consecuencias metabólicas importantes de la intoxicación por etanol se
deben a la oxidación del etanol a acetaldehído por esta enzima en el hígado. Primero
se reduce excesivamente el NAD+ a NADH, que agota el flujo que transcurre por la
generación de energía. En segundo lugar, el acetaldehído es bastante tóxico, y muchos
de los efectos desagradables de las resacas son consecuencia de las acciones del
acetaldehído y sus metabolitos posteriores.
La obtención del etanol a partir de una sustancia fermentada se realiza mediante la
técnica de destilación, que consiste en la evaporación parcial de un líquido (teniendo
en cuanta su punto de ebullición), con la transferencia de estos vapores y la subsiguiente
condensación y colección. 5
4.Materiales
1 Erlenmeyer de 250 ml.
6 Tubos de ensayo
1 Balón de 250 ml para destilación.
1 Gradilla.
2 pipetas graduadas de 5 ml.
1 Mechero.
2 Soportes.
2 Pinzas
1 Pera
1 Churrusco
1 Termómetro
2 Perlas de ebullición.
1 Capsula de porcelana.
1 Aro
1 Malla.
2 Mangueras
1 capsula de porcelana
1 Panela.
5
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1 Libra de Azúcar.
Cáscara de piña.
Uvas
Levadura.
Equipos
Equipo para destilación.
5. Reactivos
Etanol.
2 Propanol.
Terbutanol.
Reactivo de Lucas.
6. Procedimiento
A. Proceso de fermentación
Coloque en un recipiente de 1L una panela rallada, 2 papeletas de levadura (o pesas

25g), agua hasta alcanzar las ¾ partes del volumen del recipiente. Coloque en el frasco
una tapa con un orificio por donde coloque un pitillo sin tocar la solución. (Si es posible
adicione una mínima cantidad de sulfato de amonio) deje durante aproximadamente
8 días.
B. Destilación de alcoholes
Decante el producto fermentable y páselo a través de una gasa para filtrar, transfiera
la solución obtenida al balón o erlenmeyer del equipo de destilación y acondicione el
equipo para destilación, tal como se ilustra en la figura.
Ajuste el equipo de destilación simple e inicie el proceso prendiendo la llama en el
mechero. Controle la temperatura para que no sobrecargue los 78ºC. Recoja el destilado
que se produzca en un erlenmeyer.
C. Propiedades químicas de reconocimiento:
1 Combustibilidad: Coloque 1 ml de alcohol obtenido en una cápsula de porcelana y

acerque un fósforo encendido. Observe el tipo de combustión. Repita el procedimiento
con etanol.
2 Prueba de Lucas: tome 4 tubos de ensayo y márquelos, en el primero agregue 1 ml

de alcohol destilado, en los restantes adicione la misma cantidad de los alcoholes:
etanol, 2 propanol y terbutanol, en orden estricto agregue 2 ml del reactivo de Lucas.
Observe que sucede y en cuanto tiempo se produce la reacción. Anote los resultados
y obtenga conclusiones.
7. Nivel de Riesgo:

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Manejo de residuos:
• Línea 1
• Línea 18
Cuestionario
• ¿En el proceso de destilación para la obtención de etanol? ¿Por qué se
agrega sulfato de amonio?
• ¿Por qué es necesario realizar un orificio a la tapa del recipiente que contiene la
mezcla fermentadora? ¿Cómo se explica?
• ¿Por qué es necesario controlar la temperatura en el proceso de destilación? ¿Y
cuál es la razón que sea controlada entre el rango de 75-80 ºC específicamente?
• Investigue bajo qué procesos metabólicos se puede oxidar los alcoholes y
justifíquelos.
• Consulte qué otros estilos de destilación se conocen y en qué tipo de separación
deban ser utilizados.
8.Bibliografías
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PRACTICA N° 13
1. TOMA DE MUESTRA SANGUINEA – MANEJO Y CONSERVACIÓN DE LA

MUESTRA
2. Objetivos:
• Reconocer el correcto procedimiento para la toma de muestras sanguíneas por
venopunción.
• Identificar y utilizar correctamente los tubos según las pruebas requeridas.
• Conservar adecuadamente las muestras tomadas hasta su entrega en el
laboratorio.
3.Marco Teórico
Los resultados de un análisis de laboratorio están sujetos a diferentes factores que
pueden generar valores alejados de la realidad del paciente.
Estos factores se presentan en diferentes etapas del proceso como son la fase pre-
analítica, analítica y post-analítica.
Las variaciones pre-analíticas están asociadas a factores fisiológicos, técnicos o de
procedimiento, que pueden afectar la concentración de un analito, previo a su
determinación o medición en el laboratorio.
Dentro de los factores fisiológicos se deben considerar la edad, embarazo, sexo,
medicamentos, estado nutricional, ejercicio, etc. Es necesario entrevistar al paciente y
considerar esta información.
Las prácticas óptimas en flebotomía implican los factores siguientes:

• Planificación anticipada
• Uso de un lugar adecuado, tranquilo y limpio.
• Control de todos los materiales e insumos
• Personal entrenado y procedimientos estandarizados
• Uso de EPP
• Garantizar la calidad de la muestra
Registro de los eventos adversos.
Elección del sitio de punción

Las muestras sanguíneas pueden ser obtenidas por punción capilar, sangre venosa
o sangre arterial.
Los resultados entre estas muestras no son comparables, por lo que la muestra más
usada es la obtenida por punción venosa o flebotomía.
Las venas más usadas son:
Vena Cubital: Es la más larga y gruesa de todas y es la preferida por bordear
la musculatura del brazo.
• Vena Cefálica: Tiene iguales características de la anterior, pero es un poco menos gruesa.
• Vena Basílica: Es más pequeña que las anteriores. Esta vena está cerca de la arteria
braquial, por lo que su punción es riesgosa y su área es más sensible y dolorosa para el
paciente.
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Sistemas de Extracción
Se dispone de varias clases de sistemas de extracción de sangre para flebotomías:

• Sistemas cerrados – Los sistemas más comúnmente utilizados para la extracción de
muestras de sangre son una jeringuilla y aguja hipodérmica o un sistema de tubos de
extracción al vacío.
• Sistemas abiertos – Los sistemas abiertos son, por ejemplo, una jeringuilla y una
aguja hipodérmica, y una aguja de acero con aletas (de tipo ‘palomita’) unida a una
jeringuilla.
•
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Página
Elección del calibre de la aguja

Este depende del paciente y la cantidad de muestra a extraer.
PROCEDIMIENTO
1. Revisar que se tenga todo el material necesario: Tubos, gradillas, algodón,

antiséptico, torniquete, EPP; guardián, agujas, marcadores, camisa de toma de muestra.
2. Verifique la identidad del paciente, pregúntele nombres y apellidos, si es necesario
debe mostrar su documento de ID.
3. Revise la orden médica
4. Marque los tubos
5. Entreviste al paciente sobre las condiciones de ayuno o medicamentos en uso que
puedan afectar el resultado. Tranquilícelo
6. Lave sus manos correctamente y colóquese los guantes
7. Elija el sitio de punción que debe ser una vena de tamaño adecuado que sea visible,
palpable, derecha y clara.
8. En pacientes con líquidos, se debe elegir una vena en un miembro contrario, lo ideal
es tomar las muestras previo a la administración de líquidos.
9. Aplique el torniquete a unos 4 ó 5 dedos de distancia por encima de la zona de
venopunción elegida y vuelva a examinar la vena. Para la toma de pruebas como Calcio
no se debe usar torniquete.
10. Realice profunda asepsia con Alcohol al 70% del sitio elegido así:
• Aplique una presión firme, pero suave. Comience desde el centro del lugar de la
punción venosa y proceda radialmente hacia afuera de forma de cubrir una zona de 2
cm o más durante 30 segundos. Si el tiempo de contacto es insuficiente el riesgo de
contaminación aumentará.
• Deje secar la zona por lo menos durante 30 segundos.
• NO toque el lugar desinfectado, y sobre todo: NO ponga el dedo sobre la vena para
guiar el eje de la aguja expuesta. Si ha tocado el lugar, repita la desinfección.
11. Realice la punción así:
• Sujete la vena sosteniendo el brazo del paciente con el pulgar colocado por DEBAJO
del lugar de la punción venosa.
• Pinche la vena rápidamente a un ángulo de 30º o menor y a continuación introduzca
la aguja en la vena con el ángulo de ingreso más fácil.
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• Una vez que haya extraído la cantidad de sangre necesaria, afloje el torniquete
ANTES de retirar la aguja. Algunas directrices sugieren quitar el torniquete en cuanto se
ha establecido el flujo sanguíneo y siempre antes de que transcurran dos minutosde
su aplicación.
• Retire la aguja con delicadeza y presione el lugar ligeramente con una gasa limpia o
una torunda seca de algodón hidrófilo. Pida al paciente que sostenga la gasa o el
algodón hidrófilo en el lugar, con el brazo extendido y levantado. Dígale que NO doble
el brazo, pues eso puede provocar un hematoma.
12. Llenado de los tubos: siga el orden recomendado por la OMS.

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• Para la obtención de varios tubos de sangre, use tubos al vacío con aguja y
portatubos.
• Si se usa una jeringuilla o un equipo de venopunción con aguja con aletas, lo mejor
es colocar el tubo en una gradilla antes de llenarlo.
• Perfore el tapón del tubo de laboratorio con la aguja emplazada directamente arriba
del tubo, ejerciendo una presión lenta, pero constante. No presione el émbolo de la
jeringuilla, pues la presión adicional aumenta el riesgo de hemólisis.
• En la medida de lo posible, mantenga los tubos en la gradilla y acerque la gradilla
hacia usted. Perfore el tapón del color apropiado para inyectar la muestra. NO retire el
tapón pues ello romperá el vacío.
• Si el tubo para muestras carece de un tapón de goma, inyecte la muestra muy
lentamente dentro del tubo para reducir el riesgo de hemólisis (cuando trasvase sangre
a través de la aguja de la jeringuilla, disminuya el mínimo la presión y la velocidad de
trasvasado de la muestra para reducir el riesgo de hemólisis). NO recubra la aguja con
el capuchón y deséchela.
• Invierta los tubos con aditivos el número de veces que sea necesario, vea el siguiente
cuadro con las recomendaciones del CLSI Clinical and Laboratory Standards Institute.
Los tubos deben mezclarse suavemente de un lado a otro.
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13. Deseche la aguja y la jeringuilla utilizada o el dispositivo de extracción de sangre

utilizado en un recipiente para objetos punzocortantes a prueba de pinchazos.
14. Verifique la exactitud de las etiquetas y los formularios.
15. Descarte los elementos utilizados como guantes y algodones y lávese nuevamente
las manos.
16. Verifique el estado del paciente antes que se retire.
Transporte y conservación de las muestras:
Luego de ser obtenida la muestra de sangre, debe colocarse en un recipiente seguro

(gradillas)
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Deben llegar al laboratorio en una caja termo-refrigerada o nevera de icopor con

gradillas para tubos en su interior, provista de una unidad refrigerante, se debe
garantizar una temperatura de 4 a máximo 8°C cuando requieren enfriamiento. Otras
muestras deben ir a temperatura ambiente. Se debe coordinar con el laboratorio los
protocolos de envío.20-23
4. Materiales
Algodón
Tubos vacutainer
Agujas
Torniquete
Guardianes
Guantes
Marcadores
Camisa para toma de muestras
5. Reactivos
Alcohol antiséptico
6. Procedimiento
Observe el procedimiento realizado por el docente
Cuestionario
• ¿Cuándo está contraindicado el uso de alcohol etílico para limpiar el sitio de
punción y qué alternativas hay?
• ¿Para qué se utiliza la sangre arterial?
• Indique cuáles son los riesgos tanto para el paciente como para la persona que
toma muestras de sangre.
7. Nivel de Riesgo:
Nivel 3: Riesgo Medio (Bata de Laboratorio, Guantes, Cofia, Tapabocas, Zapato

Manejo de residuos:
• No aplica
8. Bibliografías
Organización Mundial de la Salud OMS/SIGN: Carpeta de material sobreseguridad

de las inyecciones y los procedimientos conexos. 2012
World Health Organization. WHO guidelines on drawing blood: best practices in

phlebotomy. 2010
http://www.euro.who.int/ data/assets/pdf_file/0005/268790/WHO-guidelines-on-
drawing-blood-best-practices-in-phlebotomy-Eng.pdf?ua=1
BD Vacutainer® Catálogo de productos 2012

20
Organización Mundial de la Salud OMS/SIGN: Carpeta de material sobreseguridad de las inyecciones y los
procedimientos conexos. 2012
21
World Health Organization. WHO guidelines on drawing blood: best practices inphlebotomy. 2010
22
http://www.euro.who.int/ data/assets/pdf_file/0005/268790/WHO-guidelines-on-drawing-blood-best-
practices-in-phlebotomy-Eng.pdf?ua=1
23
BD Vacutainer® Catálogo de productos 2012
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PRACTICA Nº 14
1. DETERMINACION DE LIPIDOS POR COLORIMETRIA
1. Objetivo
• Determinar lípidos en suero mediante la utilización de kits comerciales por

colorimetría enzimática
• Reconocer la importancia clínica de las lipoproteínas y su asociación a riesgo
cardiovascular.
2. Marco teórico
Lípidos
Son biomoléculas solubles en solventes orgánicos no polares e insolubles en agua, su
naturaleza es hidrocarbonada, y por lo tanto apolar. Incluyen los triglicéridos, esteroles
y fosfolípidos.
Los lípidos tienen varias funciones biológicas, entre las que se encuentran:
a. Estructural: constituyen el material fundamental de todas las membranas celulares
mediante la bicapa fosfolipídica. Son de gran importancia en el sistema nervioso.
b. Nutrición: forman la mayor reserva de energía de los organismos, permitiendo
obtención de energía a largo plazo. Aportan alrededor del 30 % de las kilocalorías de
la dieta y como fuente de los ácidos grasos indispensables como el linoleico y el
araquidónico.
c. Temperatura: las grasas funcionan como aislante térmico muy efectivo para proteger
a los organismos del frío ambiental.
d. Control: son constituyentes de hormonas, prostaglandinas y segundos mensajeros
hormonales y también como las vitaminas liposolubles A, D, E y K.
c. Transporte: las lipoproteínas ayudan al transporte de colesterol y triglicéridos
Colesterol
Es un esterol esencial para nuestro organismo, ya que es un constituyente de la
membrana celular, es el precursor en la síntesis de sustancias como la vitamina D y
las hormonas sexuales, entre otras, e interviene en numerosos procesos metabólicos.
Lo obtenemos en su mayoría como producto endógeno (el hígado fabrica unos 800
a 1500 mg de colesterol al día) y una pequeña parte en la dieta al consumir alimentos
de origen animal. El colesterol es indispensable para la vida, sin embargo, un exceso
en el organismo está asociado a riesgo cardiovascular.
Triglicéridos
Son compuestos formados por una molécula de glicerol esterificado con tres ácidos
grasos, cuya función principal es el aporte energético, pueden ser producidos en el
hígado o proceder de la dieta, el hígado puede cambiar cualquier fuente de exceso de
calorías en triglicéridos.
Su aumento está asociado a diabetes y pancreatitis.
HDL: Lipoproteína encargada de la salida del colesterol del vaso arterial, por eso las
mujeres en edad fértil tienen una incidencia menor de ECV directamente relacionado
con unos niveles más elevados de HDL. Esto se debe a la acción de los estrógenos que
elevan el HDL.
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LDL: Es el principal implicado en la entrada de colesterol en la pared arterial,

es decir lleva el colesterol hacia los tejidos extrahepáticos. por lo que su incremento está
asociado a ECV.
Dislipidemia
Es el aumento de lípidos en sangre, este trastorno favorece la aterosclerosis
y sus secuelas, principalmente las cardiopatías isquémicas. Se asocian a malos
hábitos alimenticios y sedentarismo (dislipidemias secundarias), sin embargo,
también tienen origen genético (primarias).
Esta condición tiene alta morbi-mortalidad por lo que se requiere un manejo
adecuado.Es necesario conocer el riesgo de enfermedad cardiovascular
asociada a dislipidemias, por lo que la cuantificación de lípidos es de gran
importancia en la rutina clínica.
La dislipidemia puede definirse como valores de colesterol total, LDL, TG,
por encima del percentil 90, o niveles de HDL inferiores al percentil 10 para la
población general. 24-27
3. Materiales, Equipos e insumos
Materiales
• Muestra suero o plasma con heparina no hemolizado
• Pipeta automática 100-1000 ul
• Puntas azules
• Pipeta automática 10-100 ul
• Puntas amarillas
• Tubos de vidrio
• Gradilla
Equipos
• Centrífuga
• Espectrofotómetro
• Baño maría a 37°C
4. Reactivos
• Reactivo para triglicéridos
• Reactivo colesterol total
• Estándares y controles
24
Universidad Nacional Autónoma de México UNAM, Guía Interactiva de BioquímicaEstructural.
Disponible en:http://laguna.fmedic.unam.mx/~3dmolvis/lipido/index.html
25
Carbajal A. Manual de Nutrición y Dietética. Universidad Complutense de Madrid.https://www.ucm.es/data/cont/docs/458-
2013-07-24-cap-6-grasas.pdf
26
Miguel P. Dislipidemias. ACIMED v.20 n.6 Ciudad de La Habana dic. 2009.Disponible
en:http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1024-94352009001200012
27
Segundo Consenso Nacional sobre Detección, Evaluación y Tratamiento de lasDislipoproteinemias en Adultos.
Revista Colombiana de Cardiología Junio 2005.
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6. Procedimiento
Seguir las instrucciones del inserto técnico según el reactivo utilizado

Procesar bajo las mismas condiciones los sueros valorados para el control de calidad
1. ¿Qué son y cómo se forman los ateromas?
2. Indique qué condiciones debe cumplir el paciente para la toma de triglicéridos
3. Explique qué son lipoproteínas, cuáles son las principales y cuál es su función
4. ¿Qué es un perfil lipídico y cuáles son los valores de referencia?
7. Nivel de Riesgo:
Nivel 3: Riesgo Medio (Bata de Laboratorio, Guantes, Cofia, Tapabocas, Zapato

Manejo de residuos:
• Línea 1
8. Bibliografía
Universidad Nacional Autónoma de México UNAM, Guía Interactiva de Bioquímica

Estructural. Disponible en:
http://laguna.fmedic.unam.mx/~3dmolvis/lipido/index.html
Carbajal A. Manual de Nutrición y Dietética. Universidad Complutense de Madrid.

https://www.ucm.es/data/cont/docs/458-2013-07-24-cap-6-grasas.pdf
Miguel P. Dislipidemias. ACIMED v.20 n.6 Ciudad de La Habana dic. 2009.

Disponible en:
http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1024-94352009001200012
Segundo Consenso Nacional sobre Detección, Evaluación y Tratamiento de las

Dislipoproteinemias en Adultos. Revista Colombiana de Cardiología Junio 2005.
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PRACTICA Nº 15
1. PARÁMETROS BIOQUÍMICOS DE IMPORTANCIA CLÍNICA
2. Objetivos
• Identificar los principales parámetros bioquímicos analizados en la rutina clínica
• Reconocer los valores de referencia de los parámetros bioquímicos críticos en la
salud y vida del paciente.
• Analizar diferentes casos clínicos con base en los valores de referencia descritos y
concluir sobre la posible condición del paciente.
3. Marco Teórico
Análisis sanguíneos
Aunque existen diferentes matrices para el análisis de los diferentes parámetros

bioquímicos, tales como orina u otros líquidos corporales, es la sangre (total, suero y
plasma) la muestra más utilizada en la rutina.
Cuando se obtiene un resultado, se compara dentro de unos límites establecidos como
“normales”, llamados valores de referencia. Estos valores permiten comparar un
individuo con lo que en general refleja una población sana, sin embargo, no
necesariamente la alteración de estos parámetros indica presencia de enfermedad, ni
estar dentro del rango indica ausencia de la misma.
Al tomar estos valores como guía, en la interpretación se deben tener en cuenta factores
como la edad, sexo, raza, técnica analítica, muestra, etc. Es necesario que los valores
de referencia sean establecidos en cada laboratorio, siguiendo los estándares
internacionales.
Nota: Tenga en cuenta al momento de leer los resultados las unidades que lo
acompañan.
Glucosa
Es el principal Tipo de azúcar que contiene la sangre la forma de adquirirla es mediante
los alimentos que ingerimos y es la principal fuente de energía
Se aumenta en diabetes mellitus, pancreatitis, desordenes endocrinos, (Ej.,acromegalia,
síndrome de Cushing, feocromocitoma, hiperaldosteronismo), insuficiencia renal
crónica, Stress y tras el consumo de alimentos. Disminuye en enfermedad hepática
severa, hiperinsulinemia, hipoglicemia reactiva, ingestión de etanol, insuficiencia
adrenocortical.
Se consideran unos valores normales de Glucosa en sangre de 70 a 105 mg/dl, sin
embargo, la PAHO ha propuesto los criterios para diabetes como se muestra a
continuación:
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Perfil Renal
Nitrógeno Uréico (BUN): Es el producto del metabolismo de las proteínas, valores

normales (19-36 mg/dl), su aumento en sangre se da por enfermedad renal, hemorragia
GI, shock, deshidratación, dieta alta en proteínas y algunos medicamentos como los
corticoesteoides y tetraciclinas.
Disminuye tras falla hepática, desnutrición o por sobrehidratación.
Creatinina: Es el producto de la degradación de la creatina muscular, su eliminación

indica un buen funcionamiento renal. Valores Normales: (0.7 1.3 mg/dl para el hombre
y para la mujer de 0.5 a 1.1. mg/dl)
Se aumenta en insuficiencia renal, daño muscular severo. Su disminución no tiene
significado clínico importante.
Ácido Úrico: se forma como resultado de catabolismo de las purinas. Valores

Normales 3.4-7.2 mg/dl en hombres y en mujeres de 2.6 – 6 mg/dl
Se aumenta en enfermedades como la Gota, enfermedad renal crónica, trastornos

hematológicos, ingestión de etanol, necrosis tisular, dieta alta en proteínas. Disminuye
en el tratamiento con ACTH, fármacos uricosúricos, enfermedad de Wilson, alcoholismo
severo con daño hepático.
Perfil Hepático:
Bilirrubinas: Se forman tras la destrucción de los glóbulos rojos que libera la

hemoglobina y esta es transformada hasta bilirrubina.
Su aumento se da en colestasis intra y extra-hepática, enfermedad hepática, hemólisis,
hiperbilirrubinemia congénita, enfermedad de Crigler-Najjar, Dubin-Johnson, y
enfermedad de Gilbert. Su disminución no tiene significado clínico.
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Transaminasas: Son enzimas que actúan generando alanina, glutamato o aspartato,

se encuentran distribuidas en tejido renal, nervioso, hepático, cardiaco y muscular.
Aumentan por destrucción hepatocelular (Ej., hepatitis viral, hepatitis tóxica), infarto del
miocardio, hemólisis, enfermedad músculo-esquelética, infarto pulmonar, enfermedad
biliar obstructiva post-hepática. Disminuyen durante el embarazo y enfermedad hepática
terminal.
Albúmina: Es producida en el Hígado y tiene función de transporte y mantenimiento

de la presión oncótica. Aumenta falsamente por deshidratación, disminuye
principalmente por desnutrición, enfermedad hepática, síndromes de malabsorción,
pérdidas gastrointestinales, enfermedad renal, síndrome nefrótico, inflamación,
neoplasias, embarazo.
Perfil Cardiaco
Creatinin Quinasa: (CK, CPK), su concentración es la primera en aumentar (4 horas

tras el IAM), alcanza un máximo tras 24 horas y a partir de entonces disminuye
rápidamente. Puesto que es la primera en disminuir se puede utilizar como marcador de
reinfarto.
Existen varias isoenzimas: CK BB (CK-1): cerebro, CK MB (CK-2) corazón y CK MM
(CK-3) músculo esquelético y cardiaco.
CK-MB: Se utiliza para diferenciar daño muscular de daño cardiaco, sin embargo,
empieza a aumentar entre 6 y 8 horas.
AST/GOT: Su liberación no es específica del IAM, así enfermedades que afectan al

hígado o al músculo esquelético también aumentan la actividad sérica de esta enzima.
Se debe medir también la ALT/GPT e interpretar así:
a) Aumentan tanto AST como ALT es Alteración hepática
b) Aumenta sólo AST y los niveles de ALT son normales hay una probable alteración
cardiaca.
Troponinas: es un complejo molecular que actúa regulando en el músculo estriado, la

interacción entre actina y miosina mediada por el ión Ca++ (contracción muscular).
Está formado por tres polipéptidos: Troponina C, I y T.
Los polipéptidos I y T presentan isoformas caractarísticas del músculo cardiaco que se
utilizan para diagnosticar el IAM. Sus concentraciones en plasma aumentan entre 4-6
horas después del inicio de la lesión y permanecen elevadas durante mucho tiempo:
·troponina T puede tardar 2 semanas en volver a los valores fisiológicos
·troponina I se normaliza tras 5-10 días. Además, es mucho más específica de músculo
cardiaco y no está influida por otras situaciones clínicas.
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Perfil Lipídico
Está conformado por el Colesterol total, Triglicéridos, HDL y LDL. El perfil lipídico es una
valoración cuyo resultado determina la existencia o no de dislipidemia y de su severidad
28-32
.
4. Materiales
• Tabla de valores de referencia
Equipos
• No aplica
5. Reactivos
• No aplica
6. Procedimiento
• Realice el análisis de los casos clínicos presentados por su docente
1. ¿Qué es intolerancia a la glucosa?
2. Defina Azoemia e hipercalemia
3. ¿Qué pruebas se incluyen en el ionograma?
4. ¿Qué es IAM? Explique la fisiopatología
7. Nivel de Riesgo:
Nivel 1: Riesgo Bajo (Bata de Laboratorio Manga Larga, Zapato Cerrado Bajo,
Pantalón Largo).
Manejo de residuos:
• No aplica
8. Bibliografías
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Asociación Española de Neuropatía y Bioterapia. Química sanguínea, significado y

valores. 2014.
http://www.apenb.org/apenbweb/quimica-sanguinea-significado-y-valores/
Universidad Royal College de Canadá. Clinical Laboratory Tests – Reference

Values. 2015
http://www.royalcollege.ca/portal/page/portal/rc/common/documents/exams/normal_val
ues_e.pdf
Organización Panamericana de la Salud PAHO. Guías ALAD de diagnóstico,

control y tratamiento de la Diabetes Mellitus Tipo 2. 2010
http://www1.paho.org/hq/dmdocuments/2010/Guias_ALAD_2009.pdf
Manual Merck MSD. Valores normales de laboratorio: Sangre, plasma y suero.

http://www.msdmanuals.com/es/professional/ap%C3%A9ndices/valores-normales-de-
laboratorio/an%C3%A1lisis-de-sangre-valores-normales#false
Santaló M. Marcadores biológicos de necrosis miocárdica. Revista española de

cardiología. Rev Esp Cardiol. 2003;56:703-20 - Vol. 56 Núm.07 DOI: 10.1157/13049653.
http://www.revespcardiol.org/es/marcadores-biologicos-necrosis-
miocardica/articulo/13049653/
9. Anexo
28
Asociación Española de Neuropatía y Bioterapia. Química sanguínea, significado y
valores. 2014.
http://www.apenb.org/apenbweb/quimica-sanguinea-significado-y-valores/
29
Universidad Royal College de Canadá. Clinical Laboratory Tests – ReferenceValues. 2015
http://www.royalcollege.ca/portal/page/portal/rc/common/documents/exams/normal_values_e.pdf
30
Organización Panamericana de la Salud PAHO. Guías ALAD de diagnóstico, control y
tratamiento de la Diabetes Mellitus Tipo 2. 2010 http://www1.paho.org/hq/dmdocuments/2010/Guias_ALAD_2009.pdf
31
Manual Merck MSD. Valores normales de laboratorio: Sangre, plasma y suero.
http://www.msdmanuals.com/es/professional/ap%C3%A9ndices/valores-normales-de- laboratorio/an%C3%A1lisis-de-
sangre-valores-normales#false
32
Santaló M. Marcadores biológicos de necrosis miocárdica. Revista española de cardiología. Rev Esp Cardiol. 2003;56:703-
20 - Vol. 56 Núm.07 DOI: 10.1157/13049653. http://www.revespcardiol.org/es/marcadores-biologicos-necrosis-
miocardica/articulo/13049653/
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PRACTICA Nº 16
1. UROANALISIS
2.Objetivos
• Reconocer la importancia del examen de la orina como herramienta diagnostica.
• Estudiar las características, físicas, químicas y microscópicas de la orina.
• Correlacionar los resultados con las diferentes patologías.
3. Marco Teórico
El examen general de orina es una de las pruebas más solicitadas dentro del laboratorio
de análisis clínicos e incluye el análisis físico, químico y análisis microscópico. En este
último, se analiza el sedimento urinario en búsqueda de distintos elementos formes
(leucocitos, cilindros, etc.) con diferente utilidad diagnostica. El análisis de sedimento
urinario se puede valorar mediante métodos manuales y automatizados.
Nos da idea también de procesos bacterianos, gracias al urocultivo; y, también, a través
de su sedimento podemos distinguir células, cristales, y ver si existen procesos
inflamatorios.
El empleo rutinario del análisis de orina sirve para detectar determinados componentes
no presentes en individuos sanos.
Podemos obtener una información valiosa para la detección, diagnóstico y valoración
de enfermedades nefrourológicas, incluso pudiendo revelar enfermedades
asintomáticas o silenciosas.
La recolección de la muestra es muy importante, determina la fidelidad de los resultados
y su correcta interpretación. Se debe realizar en un recipiente limpio (de vidrio o
plástico), que no contenga restos de detergentes, grasas o agua oxigenada. No es
necesario que sea estéril. Es recomendable una exhaustiva higiene y enjuague de las
manos y genitales. Se debe desechar los primeros mililitros de orina y recoger el chorro
medio de la micción. Habitualmente, el análisis de orina completo se efectúa sobre la
primera orina de la mañana (de 3 hs. de retención mínima). Algunos análisis específicos
requieren la recolección durante 24 hs (orina de 24 hs.). En este caso es importante
recomendar que una vez obtenida la muestra se la debe conservar en lugarfresco. Si se
debe realizar un cultivo bacteriano de esa muestra (urocultivo), el frasco debe estar
estéril.
El examen de rutina incluye 3 partes

1. examen físico
2. examen químico
3. examen microscópico
1) EL EXAMEN FISICO: comprende la descripción del color, aspecto y olor, así como
la determinación de volumen, densidad y pH.
• Aspecto, color y olor: se realiza por observación directa de la orina en un tubo limpio
de vidrio transparente. Normalmente, la orina posee:
Aspecto: límpido
Color: amarillo ámbar
Olor: sui generis
Espuma: blanca, no persistente
Pueden presentarse anomalías:
Aspecto turbio: debido a proteinuria, bacteriuria, precipitación de sales (fosfatos
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Amónicos en orinas alcalinas o uratos en orinas ácidas.

Color:
- Rojizo: por hematuria, hemoglobinuria, mioglobinuria, ingesta de remolacha.
presencia de cristales de uratos amorfos (no patológico)
- Amarillo intenso, verde oscuro hasta amarronado: bilirrubina
- Caoba: pigmentos biliares o porfirias
- Pardo oscuro, negruzco: alcaptonuria
- Anaranjado: estado febril, tratamiento con rifampicina
- Aspecto opalescente y color blanco amarillento: pus, infección urinaria
Olor: dulce, a frutas o cetónico: cuerpos cetónicos, glucosuria
Espuma persistente: proteinuria, resto de detergente en el frasco de muestra o el
tubo.
• Volumen: se determina midiéndolo en una probeta graduada, e indicando el período

de tiempo en que se recolectó la muestra. La diuresis normal es de 1500 ml/24 h. Debido
a que la cantidad de líquido que maneja el riñón es normalmente muy variable, dicha
cifra puede variar en más o en menos.
• Densidad: en condiciones normales, la densidad urinaria tiene un valor entre 1015 y

1025 g/l. Este parámetro hoy en día forma parte de las determinaciones realizadas
utilizando las tirillas reactivas (ver más abajo).
La densidad urinaria aporta información sobre la función renal de concentración dilución
de la orina. Como resultado se pueden obtener orinas de tonicidad (concentración de
solutos) variada, con el objetivo de conservar el equilibrio del agua corporal.
Orinas muy concentradas (hipertónicas con respecto al plasma) aparecen cuando el
riñón tiende a conservar agua por disminución del aporte hídrico, estados febriles,
pérdidas gastrointestinales, diabetes sacarina.
El uso de diuréticos, disminución, ausencia o falta de acción de la hormona antidiurética,
mala nutrición proteica y diabetes insípida son factores que resultan en la formación de
orinas diluidas (hipotónicas con respecto al plasma).
• pH: el riñón es uno de los órganos que junto con el pulmón interviene en la regulación
de la concentración de H+ en el líquido extracelular y lo hace fundamentalmente
regulando la concentración de HCO3 plasmático. Esta función se ejerce a través de la
recuperación de bicarbonato filtrado, producción de nuevo bicarbonato, excreción de
NH4+, H2PO4.
2) EL EXAMEN QUÍMICO: rutinariamente se analiza la presencia de proteínas,

hemoglobina, glucosa, cuerpos cetónicos, sales biliares y bilirrubina. Todas estas
pruebas están incluidas en las tirillas reactivas y normalmente la reacción debe ser
negativa. En caso de observarse reacción positiva, se informa con una a cuatro cruces
(+ a ++++), según la intensidad del color desarrollado. Cabe destacar que esta técnica
aporta resultados semicuantitativos, debiéndose procesar la muestra por métodos de
tipo cuantitativo si se desea establecer la concentración exacta de tales sustancias.
Tirillas reactivas en el laboratorio de análisis clínicos es corriente su uso para
investigar la presencia de varios elementos químicos en la orina.
Las tiras reactivas de orina consisten en unas pequeñas cintas de plástico rígido a las
que van pegados unos cuadraditos impregnados de reactivos, que son diferentes
dependiendo de lo que se quiera analizar. Si el compuesto que se quiere analizar se
encuentra en la muestra, se pone en contacto con los reactivos presentes en el
cuadradito, produciendo una reacción de color fácilmente observable. Además de ser
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positivo (cambio de color) o negativo (sin cambio), las diferentes intensidades de color
darán idea de la cantidad de compuesto analizado presente en la muestra, permitiendo
una semicuantificación de dicho compuesto. La semicuantificación se logra por
comparación del color desarrollado por la muestra con una curva de calibración que
provee el fabricante como 5-6 recuadros con tonalidades relacionadas con la
concentración correspondiente a cada metabolito que se quiere analizar. Si el análisis
de un metabolito da positivo con las tirillas reactivas, su cuantificación exacta deberá
realizarse con otro método químico, más específico y sensible.
De esta manera se puede determinar: densidad, pH, leucocitos, nitritos, proteínas,
glucosa, cuerpos cetónicos, urobilinógenos, bilirrubina, hemoglobina y sangre.
La ventaja de este método es que es muy rápido y muy específico ya que cada tira tiene
diversos segmentos en los cuáles está el reactivo apropiado para cada determinación.
Descripción de las determinaciones incluidas en las tirillas reactivas
– pH: la tirilla contiene una mezcla de indicadores de pH que en contacto con la orina
dan una nítida graduación de colores, desde el naranja (pH 5) al azul (pH 9).
Resultado normal: 5-6 en orina fresca.
– Leucocitos: los granulocitos (un tipo de leucocitos) poseen la enzima esterasa, que
reacciona con los reactivos de la tirilla dando un producto de color violeta.
Resultado normal: negativo (no existe límite definido entre la excreción fisiológica y
patológicamente elevada de leucocitos. Mayormente se indica 10 a 20 leucocitos/ul
como síntoma sospechoso y más de 20 como hallazgo patológico).
– Nitritos: se utiliza una amina que en medio ácido reacciona con dando una sal de
diazonio, que reacciona con un cromógeno para formar color rosado.
Resultado normal: negativo.
– Proteínas: la tirilla contiene un indicador que en presencia de proteínas vira del
amarillo al verde.
Resultado normal: negativo (hasta 30 mg% en orina matinal, la tirilla no detecta esta
cantidad).
La excreción de proteínas por orina debe ser menor a 150 mg/día. Este valor da una
reacción negativa con los métodos usuales de determinación cualitativa. Si la reacción
da positiva, se debe determinar la concentración en una muestra de orina de 24 hs con
un método químico.
La proteinuria suele deberse a las siguientes causas:
- Aumento de proteínas plasmáticas normales y anormales.
- Aumento de permeabilidad glomerular
- Disminución de la reabsorción de polipéptidos y proteínas de bajo PM que
normalmente filtran por el glomérulo.
- Alteraciones hemodinámicas, entre las que cabe destacar el ejercicio, cambios de
posición de decúbito a erecta, fiebre, etc.
La proteinuria no siempre se acompaña de lesiones en el parénquima renal. Sin
embargo, la proteinuria persistente que supera los 750 mg/24 hs es un indicador de
lesión en el parénquima renal.
– Glucosa: La glucosa, por la glucosa oxidasa presente en la tira, se oxida a

gluconolactona y peróxido de hidrógeno. El agua oxigenada, en presencia de la
peroxidasa también presente en la tirilla, oxida a su vez un indicador. La cantidad de
producto formado da una gama de color entre amarillo al verde.
Resultado normal: negativo (glucosuria fisiológica hasta 15 mg% en orina matinal, la
tirilla no la detecta).
La glucosa filtrada en el glomérulo se reabsorbe casi completamente en el túbulo
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contorneado proximal. Este proceso es realizado por un transportador de membrana

que se satura con concentraciones de glucosa superiores a 180 mg%; en estas
circunstancias la glucosa no reabsorbida permanece en líquido luminal y se excreta
por orina. La causa más común de glucosuria es la diabetes mellitus no controlada.
Dado que la glucemia normal está comprendida entre 70 y 110 mg%, la presencia de
glucosuria es indicativa de hiperglucemia en caso de indemnidad tubular. Existen un
número de entidades caracterizadas por anomalías a nivel tubular que presentanintensa
glucosuria sin la coexistencia de hiperglucemia.
– Cuerpos cetónicos: sólo el acetoacetato y la acetona reaccionan con nitroprusiato

de sodio y glicina en medio alcalino dando un complejo de color violeta. El β-
hidroxibutirato no reacciona.
Resultado normal: negativo (hasta 5 mg% en orina matinal, la tirilla no los detecta)
Los cuerpos cetónicos se forman cuando el aporte de ácidos grasos al hígado supera
su capacidad de utilización del Acetil-CoA. Se vierten entonces a sangre desde donde
son captados por órganos aeróbicos para su oxidación y obtención de energía. La
acetona se elimina por el aliento, mientras que el acetoacetato y el β-hidroxibutirato lo
hacen por orina. Su eliminación sólo ocurre en cantidades apreciables cuando su
síntesis es desmedida, como ocurre en la diabetes mellitus descompensada, en el ayuno
prolongado y procesos febriles. En estos casos se detecta cetonemia (presencia en
sangre en cantidades elevadas) y cetonuria (presencia en orina).
– Urobilinógeno: el urobilinógeno reacciona en medio ácido con una sal de diazonio,
dando un compuesto rojo.
Resultado normal: hasta 1 mg%.
Urobilina y urobilinógeno aumentan por hemólisis y trastornos hepáticos.
− Bilirrubina: la bilirrubina reacciona con una sal de diazonio en medio ácido, dando
un compuesto rosa violáceo.
Resultado normal: negativo.
La bilirrubina presente en orina es de tipo conjugada, forma hidrosoluble que se filtra
en el glomérulo renal, al que llega luego de pasar por la circulación enterohepática.
La bilirrubina está ausente en la orina en casos de ictericia hemolítica y aumentada en
casos de hepatitis, ictericia obstructiva o neoplasias de cabeza de páncreas.
– Sangre: la hemoglobina tiene actividad seudo-peroxidásica, por eso es capaz de

liberar O2 a partir del H2O2. En las tirillas reactivas se acopla esta producción de
oxígeno a la oxidación del indicador bencidina (forma oxidada azul verdoso). Si la
muestra contiene eritrocitos intactos (hematuria), se ven como puntos verdes aislados
o en grupos sobre el fondo amarillo. Si hay hemoglobinuria (hemoglobina libre en orina)
el color verde es homogéneo. Estos resultados se deben corroborar con la observación
del sedimento urinario.
Resultado normal: negativo (hasta 5 eritrocitos/ul).
En situaciones específicas y obedeciendo a patologías diagnosticadas o presuntivas
puede determinarse la concentración de ciertos componentes urinarios, como o
Electrolitos (Ionograma urinario): Na+ o No electrolitos: urea, creatinina, ácido úrico,
hormonas y sus metabolitos, enzimas, fármacos y sus metabolitos, tóxicos y sus
metabolitos, etc.
• Urea: es la principal forma de excreción del grupo amino de los aminoácidos. La

misma se filtra libremente por el glomérulo y es parcialmente secretada y reabsorbida
a nivel de los túbulos. Su excreción urinaria depende de las proteínas de la dieta, por
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tal motivo el aclaramiento renal de la misma no es una expresión fidedigna del

funcionamiento renal. Por ello, el clearance de urea no se usa para evaluar el
funcionamiento renal. Cabe acotar que la concentración plasmática de urea se elevará
recién cuando el deterioro renal afecte a más del 50% del parénquima.
La excreción de urea se incrementa fisiológicamente por ejercicio y dietas ricas en
proteínas y patológicamente en estados febriles y catabólicos.
Durante el crecimiento, embarazo y bajo consumo de proteínas en la dieta disminuye
la concentración de urea urinaria. Estados patológicos hepáticos y renales tienen la
misma consecuencia.
• Creatinina: resultado de la transformación espontánea de la fosfocreatina muscular.

Este compuesto filtra libremente en glomérulo y prácticamente no es secretada o
reabsorbida a nivel de los túbulos. A diferencia de la urea, la excreción de creatinina
no depende de la proteína dietaría, encontrándose sujeta únicamente a la masa
muscular.
Estas circunstancias hacen que el aclaramiento renal de creatinina (clearance) sea un
recurso clínico para el diagnóstico y control evolutivo de la insuficiencia renal. Sumado
a esta característica se asocia la buena relación entre la disminución del clearance de
creatinina y la elevación de su concentración en plasma.
Pacientes obesos, asténicos, hipertiroideos, insuficientes renales o con distrofias
musculares tienen una baja excreción urinaria de creatinina. Por el contrario, este
parámetro aumenta en el hipotiroidismo, diabetes y en individuos musculosos.
• Ácido úrico: producto final del catabolismo de las bases púricas, excretado por orina.
Debido a que el pKa del N9 es 5.5 y el del N1 es 10.3, a pH plasmático fisiológico se
encuentra en forma de urato monosódico. En orina, el estado iónico dependerá del pH:
si el pH urinario es menor que 5.75, se encontrará predominantemente como ácido úrico
y si es mayor en forma de urato. El ácido es soluble hasta concentraciones de 6-
7 mg%, precipitando en concentraciones mayores. En esa situación se puede
precipitar en el parénquima renal o en las vías urinarias, llevando a cambios
histológicos que conducen a nefropatías o a urolitiasis, respectivamente.
Fisiológicamente, la uricosuria aumenta con la ingesta de proteínas y disminuye con
dietas ricas en glúcidos y grasas o pobres en proteínas. En patologías hepáticas y
leucemia aumentan los valores de concentración urinaria de úrico. Durante el ataque
agudo de gota, la uricosuria está disminuida, al igual que en casos de insuficiencia
renal.
3) EXAMEN MICROSCÓPICO (Sedimento urinario)

El examen del sedimento presente en una orina recién emitida o conservada
cuidadosamente puede constituirse en lo más importante del análisis de orina ya que
puede proveer datos precisos sobre la existencia de una enfermedad renal y sobre la
naturaleza y extensión de la lesión.
La orina previamente homogeneizada en forma suave se pasa a un tubo cónico y se la
centrifuga a baja velocidad, para evitar la deformación exagerada de los elementos a
investigar. Luego se elimina el sobrenadante por inversión del tubo, y se resuspende el
precipitado en la pequeña cantidad de orina que queda en el tubo. Esta muestra se
coloca entre porta y cubreobjetos limpios, observando al microscopio. La observación
del sedimento debe ser hecha en lo posible sobre la orina fresca, con no más de 6 h
de emitida, con preferencia sobre la orina de la mañana que es más concentrada. Es
recomendable guardar la muestra en la nevera si el examen no se realiza en forma
inmediata.
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En el sedimento urinario podemos distinguir cualitativamente:

• Componentes inorgánicos: cristales inorgánicos de diferentes tipos.
• Componentes orgánicos: distintos tipos de células y cilindros, cristales orgánicos y
microorganismos.
4. Materiales, Equipos e insumos

• Tubos para centrifuga
• Cubreobjetos
• Portaobjetos
• Pipetas Pasteur
Equipos
Centrifuga
Microscopio
5. Reactivos
• Tiras reactivas
6. Procedimiento
A. Examen físico:
- Tome la orina y deposítela en un tubo para centrifuga, observe el color y anótelo en
la tabla de resultados.
B. Examen Químico
- Sumerja totalmente la tirilla hasta el último cuadro reactivo.

- Un minuto después se comparan los diferentes reactivos sometidos a la muestra con
el ítem estandarizado respectivo que aparece en el envase de las tirillas.
- Anote los resultados en la tabla.
C. Examen microscópico
- Posteriormente rotulamos el tubo de ensayo y lo colocamos en la centrifugadora
durante 10minutos a 3000 revoluciones/minuto.
- Pasados los 10 minutos, vaciamos la orina en el grifo, y el sedimento que queda en
el fondo del tubo, lo depositamos en una lámina, cubrimos con una laminilla y queda
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listo para el análisis directo al microscopio. Observe en objetivo de 10X y luego pase a
40X, para observar mejor las estructuras.33-35
D. Interpretación de Resultados
- El examen químico arrojo parámetros consignados en la tabla, como puede

explicar los resultados?
- Cuales fueron las estructuras que se encontraron al examen microscópico y que
interés clínico poseen?
- Observando todos los resultados que puede concluir?
Cuestionario
1. ¿Qué patologías se pueden asociar al análisis de orina?
2. ¿Cómo puede correlacionar con los resultados una infección renal?
3. ¿Qué biomarcadores se pueden obtener de la orina como una opción alterna a la
biopsia renal?
7. Nivel de Riesgo:

Manejo de residuos:
• Línea 19
8. Bibliografías
Laso Maria del Carmen. Interpretación del análisis de orina. Pediatria práctica.
2002. Arch.argent.pediatr ; 100(2) / 179.
Martha E. Baños-Laredo, Carlos A. Nuñez Alvarez, Javier Cabiedes. Análisis de

sedimento urinario. Reumatología clínica. 268-272.
Campuzano Maya Germán, Arbeláez Gómez Mario. El uroanalísis, un gran aliado del
médico. Urología Colombiana. 67.92.
33
Laso Maria del Carmen. Interpretación del análisis de orina. Pediatria práctica.2002. Arch.argent.pediatr ; 100(2) / 179.
34
Martha E. Baños-Laredo, Carlos A. Nuñez Alvarez, Javier Cabiedes. Análisis
de sedimento urinario. Reumatología clínica. 268-272.
35
Campuzano Maya Germán, Arbeláez Gómez Mario. El uroanalísis, un gran aliado del médico. Urología Colombiana. 67.92.

Manual Bioquimica Clinica ENFERMERIA V3

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MARÍA DEL PILAR TRUJILLO

CARMEN ROSA CONTRERAS MONTAÑEZ

DIANA RIOS DIAZ

OMAIRA CAÑAS BERMÚDEZ

Práctica 2: Reconocimiento de material de laboratorio 9

Práctica 3: Soluciones Buffer 17

Práctica 4: Gases Arteriales: Casos Clínicos 22

Práctica 5: Soluciones y Diluciones 32

Práctica 6: Diluciones en Serie 44

Práctica 7: Diluciones no Seriadas 49

Práctica 8: Precipitación de Proteínas 52

Práctica 10: Reacciones Enzimáticas 63

Práctica 11: Factores que afectan las reacciones enzimáticas 66

Práctica 12: Fermentación Alcohólica 70

Práctica 13: Toma de Muestras Sanguíneas 74

Práctica 14: Determinación de Lípidos por Colorimetría 81

Práctica 15: Parámetros Bioquímicos de Importancia Clínica 84

Práctica 16: Uroanálisis 91

En general, si los productos no lleven señalización de seguridad, no quiere decir que

Normas de bioseguridad en el laboratorio:

• Se exige puntual asistencia.

después de derrames de material infeccioso.

• Nivel 1: Riesgo Bajo (Bata de Laboratorio Manga Larga, Zapato Cerrado

• Nivel 2: Riesgo Medio (Bata de Laboratorio, Guantes, Cofia, Tapabocas,

• Nivel 3: Riesgo Alto (Bata, Mascara Respiratorias, Guantes, Cofia, Gafas

Sistema de precauciones universales.

Este sistema fue establecido por el Centro de Control de Enfermedades (C.D.C) de

Las precauciones universales parten del siguiente principio:

“Todos los pacientes y sus fluidos corporales independientemente del

Líquidos de precaución universal

La bioseguridad en el laboratorio se refiere a un conjunto de protocolos de trabajo que

Tipos de daños o lesiones

Señalización, signos y recomendaciones

• Riesgos para la salud-color azul.

Algunos símbolos designan peligros (Pictogramas de Seguridad)

• Atención a sustancias explosivas.

Primarias: Localizadas en torno al origen del riesgo. Ejemplo, hacer la práctica

Secundarias: Localizadas en el círculo del practicante. Ejemplo, la relacionada con la

Terciarias: Localizadas alrededor del laboratorio. Ejemplo, material tóxico del

Nota: Los laboratorios de la Universidad de Pamplona se rigen por el manual MLA - 01

•Reconocer y manejar adecuadamente el material de laboratorio

De acuerdo a lo anterior, los materiales de laboratorio se clasifican de la siguiente manera:

• Volumétrico: Dentro de este grupo se encuentran los materiales de vidrio calibrados a

• Equipos de medición: es un instrumento que se usa para comparar magnitudes

• Equipos especiales: Equipos auxiliares para el trabajo de laboratorio. Ejs: centrífuga,

GRÁFICO USOS NOMBRE

- Son balones con un tubo

- Se usa con papel de filtro

- Contiene los tubos de GRADILLAS

- Son pinzas para buretas

- Se usa para contener

4. Materiales, Equipos e Insumos:

Nivel 1: Riesgo Bajo (Bata de Laboratorio Manga Larga, Zapato Cerrado

• Determinar la capacidad amortiguadora de una solución buffer.

Sistemas de Tampón - Soluciones Buffer – Sistemas Amortiguadores

Una solución amortiguadora consiste en una mezcla de un ácido débil y su base

Las soluciones amortiguadoras pueden mantener el pH en un valor relativamente

La condición de que un amortiguador contenga cantidades apreciables tanto de ácido

Cuando estudiamos los amortiguadores en teoría, es común usar la ecuación de

La proporción de ácido fórmico/formiato necesario para mantener el ph de 4.0 se

Ph= pka+log base conjugada / ácido

débil . 4.0=3.75 +log HCOO /