REACCIÓNES ENZIMÁTICAS
CON DOS SUSTRATOS
CINÉTICA ENZIMÁTICA
J. Jesús Robledo Medrano | Enzimología | 15/10/20
La enzima Aspartato transaminasa, que cataliza la reacción:
Aspartato + Oxoglutarato Glutamato + Oxaloacetato
Se realizaron los siguientes tres experimentos el siguiente
experimento:
[Asp]= 1mM [OxG]= 0.02mM [OxG]= 0.5mM
[OxG] Vel. [Asp] Vel. [Asp] Vel.
(mM) (μmol/min) (mM) (μmol/min) (mM) (μmol/min)
0.002 0.444 0.007 0.411 0.007 0.468
0.018 2.031 0.048 1.268 0.048 2.017
0.037 2.781 0.171 1.722 0.171 3.317
0.063 3.336 0.335 1.850 0.335 3.866
0.094 3.756 0.547 1.983 0.547 4.123
0.493 4.324 1.016 2.031 1.016 4.324
a) Calcule Km y Vmax para cada sustrato.
b) ¿Cambian las Vmax? Explique su respuesta
c) Explique que pasó en el segundo experimento, con
respecto al tercero.
d) ¿Cúantos y cuáles valores de Km debo considerar para
describir la afinidad de la enzima por sus substratos?
e) ¿Qué conclusión se podría sacar de esos datos?
PÁGINA 1
MÉTODO DIRECTO
a) Calcule Km y Vmax para cada sustrato.
[OxG] (Asp= 1 mM)
Vmax= 4.4μmol/min Km= 0.03mM
[Asp] (OxG= 0.02mM)
Vmax= 2.1μmol/min Km= 0.045mM
[Asp] (OxG)= 0.5mM)
Vmax= 4.4μmol/min Km= 0.06mM
PÁGINA 2
MÉTODO LINEWEAVER-BURK
[Asp]= 1mM [OxG]= 0.02mM [OxG]= 0.5mM
1/[OxG] 1/Vel. 1/[Asp] 1/Vel. 1/[Asp] 1/Vel.
(mM) (μmol/min) (mM) (μmol/min) (mM) (μmol/min)
500 2.252 142.85 2.433 142.85 2.136
55.5 0.492 20.83 0.788 20.83 0.495
27.02 0.359 5.84 0.580 5.84 0.301
15.87 0.299 2.98 0.540 2.98 0.258
10.63 0.266 1.82 0.504 1.82 0.242
2.02 0.231 0.98 0.492 0.98 0.23
a) Calcule Km y Vmax para cada sustrato.
[OxG] (Asp= 1 mM)
1/Vmax= 0.22 Vmax= 1/0.22 Vmax= 4.54μmol/min
-1/Km= -41.5 Km= -1/-41.5 Km= 0.024mM
[Asp] (OxG= 0.02mM)
1/Vmax= 0.47 Vmax= 1/0.47 Vmax= 2.12μmol/min
-1/Km= -29 Km= -1/-29 Km= 0.034mM
[Asp] (OxG)= 0.5mM)
1/Vmax= 0.22 Vmax= 1/0.22 Vmax= 4.54μmol/min
PÁGINA 3
-1/Km= -16.25 Km= -1/-16.25 Km= 0.061mM
b) ¿Cambian las Vmax? Explique su respuesta
Solo cambia la Vmax del Aspartato (Oxoglutarato= 0.02mM) esto
debido a que la concentración del Oxoglutarato no es la suficiente
para completar el complejo E-S y esto afecta a la velocidad del
Aspartato, ya que la enzima no está saturada con el Oxoglutarato
como se esperaría para la observación del sustrato individual
Aspartato.
c) Explique que pasó en el segundo experimento, con
respecto al tercero.
En el segundo experimento el Oxoglutarato (0.02mM) era
insuficiente para saturar la enzima con el primer sustrato, por lo
que afectó la velocidad del Aspartato para completar toda la
concentración de la enzima en el complejo E-SS.
En el tercer experimento la concentración de Oxoglutarato
(0.5mM) la concentración de enzima estaba saturada con este
sustrato por lo que fue posible observar individualmente la unión
del segundo sustrato (Aspartato) a la enzima, por lo que no afectó
el análisis de su velocidad.
PÁGINA 4
d) ¿Cúantos y cuáles valores de Km debo considerar para
describir la afinidad de la enzima por sus substratos?
Solo 2, el Km del experimento del Oxoglutarato con el Aspartato
constante 1mM; y el Km del experimento del Aspartato con el
Oxoglutarato constante 0.5mM.
e) ¿Qué conclusión se podría sacar de esos datos?
Como valores a tomar en cuenta solo tomaremos las gráficas del
experimento del Oxoglutarato con el Aspartato constante 1mM; y
del experimento del Aspartato con el Oxoglutarato constante
0.5mM; esto porque sus sustratos no analizados tienen una
concentración conforme a los requerimientos de saturación de la
enzima con el primer sustrato adecuados, dando lugar al correcto
seguimiento de la velocidad del segundo sustrato (de acuerdo al
caso de cada experimento) con resultados satisfactorios.
Dado los valores de Km, esta enzima tiene mayor afinidad por el
sustrato Oxoglutarato, que por su otro sustrato Aspartato.
PÁGINA 5
