UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA DE TECÁMAC

DIVISIÓN QUÍMICO BIOLOGÍCAS

TECNOLOGÍA ENZIMÁTICA.

Ejercicios
Cinética enzimática
Tipo de inhibición

Elaboro:
M.C. Verónica Lavadores González

Cuatrimestre: SEPTIEMBRE-DICIEMBRE-2022
Instrucciones
En cada uno de los siguientes ejercicios, determinar el tipo de inhibición
correspondiente.

Ejercicio 1. La mono-amino-oxidasa mitocondrial de hígado de rata es inhibida por uno de

los productos de la reacción, el NH3. Para determinar el efecto del NH3 sobre la reacción se
realizaron dos series de experiencias:
a) En una primera serie de experimentos se fijó la concentración de O2 (0.23 mM) y se
trabajó variando la concentración de benzilamina en presencia de concentraciones
fijas del inhibidor. Los resultados aparecen expuestos en la siguiente tabla:

CONCENTRACIÓN DEL NH3

(mM)
0.0 50.0 100.0 150.0 200.0
BENZILAMI VELOCIDAD
NA
(mM) ( µm/min.mg)
0.2 0.81 0.627 0.531 0.444 0.387
3
0.3 0.957 0.743 0.637 0.528 0.462
0.5 1.093 0.858 0.741 0.627 0.543
1.0 1.22 0.966 0.844 0.725 0.627
2.0 1.342 1.081 0.926 0.787 0.687

b) En una segunda serie de experiencias se mantuvo constante la concentración de

benzilamina (1.0 mM) y se varió la concentración de O2 en presencia de
concentraciones fijas del inhibidor. Los resultados aparecen expuestos en la
siguiente tabla:

CONCENTRACIÓN DEL NH3

(mM)
0.0 50.0 75.0 100.0 150.0
OXÍGENO VELOCIDAD
(mM) ( µm/min.mg)
0.100 1.124 0.962 0.858 0.794 0.676
0.136 1.342 1.130 1.000 0.909 0.778
0.175 1.538 1.274 1.149 1.026 0.866
0.250 1.754 1.480 1.282 1.149 0.952
0.300 1.876 1.587 1.351 1.212 1.015

Determinar:
a) El valor de los parámetros cinéticos en ambos casos, incluida la ki del NH3.
b) Tipo de inhibición ejercida por el NH3 sobre ambos sustratos.

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Ejercicios 2. Una reacción enzimática se lleva a cabo a diferentes concentraciones de
sustrato, en ausencia y presencia de dos inhibidores diferentes: inhibidor a, de una
concentración de 1.0 mM e inhibidor b, de una concentración de 1.5 mM. La siguiente tabla
muestra los datos obtenidos:

Sustrato V Va Vb
(mM) ( m moles/min) (m moles/min) (m moles / min)
0.2 1.67 0.625 0.83
0.4 2.86 1.176 1.43
0.8 4.44 2.110 2.22
1.6 6.15 3.480 3.08
3.2 7.62 5.160 3.81

Determinar:
a) Determinar todos los parámetros cinéticos de la enzima.
b) ¿Qué tipo de inhibidores son el inhibidor a y el inhibidor b? Explicar la respuesta.
Ejercicio 3. La reacción de la metilaspartasa cataliza la desaminación de metilaspartato.
La rapidez de la reacción se determinó vigilando la absorbencia del producto a 240 nm. Con
base a los datos que se muestran en la siguiente tabla, determinar los parámetros cinéticos
aplicando Lineweaver-Burk, Eadie-Hostee y Hanes, realiza una tabla comparativa de los
tres modelos cinéticos enzimáticos.
SUSTRATO
(mol/ l) 0.002 0.005 0.020 0.040 0.060 0.080 0.100

Vo ( A240/min) 0.045 0.115 0.285 0.380 0.460 0.475 0.505

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Ejercicio 4. La sacarosa se hidroliza a glucosa y fructuosa, la reacción es catalizada por la
enzima invertasa. A partir de los datos mostrados en la tabla y utilizando el modelo de
Lineweave-rBurk, determinar si la inhibición de esta reacción con urea 2M es competitiva o
no competitiva.
Sacarosa Vo sin inhibidor Vo con inhibidor
(mol/l) (U) (U)
0.0292 0.182 0.083
0.0584 0.265 0.119
0.0876 0.311 0.154
0.1170 0.330 0.167
0.1750 0.372 0.192

Ejercicio 5. Una reacción enzimática se lleva a cabo con distintas concentraciones de

sustrato, en ausencia y presencia de un inhibidor. Los datos obtenidos se representan en
uno de los ejes de coordenadas según el método de Lineweaver y Burk. Las rectas
obtenidas cortan a los ejes de coordenadas en los siguientes puntos, en ausencia y
presencia de inhibidor, respectivamente, corte en abscisas en -3.7 mM-1 y en -0.2 mM-1, y
corte en ordenadas (μmoles/min)-1 = 0.01 y 0.01.

Determinar:
a) ¿De qué tipo de inhibición se trata?
b) Calcular km y Vmáx en ausencia y presencia de inhibidor.

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CUESTIONARIO.
1. Indicar la importancia del estudio de la cinética enzimática
2. ¿Cuáles son los parámetros cinéticos que caracterizan el estudio de la cinética de
una enzima?
3. ¿Qué tipo de tratamiento matemático debe dársele a los datos obtenidos de una
cinética enzimática para obtener los parámetros cinéticos?
4. Explicar cómo durante el estudio de una cinética enzimática los parámetros cinéticos
se ven alterados en presencia de:
a. inhibidor competitivo
b. Inhibidor No competitivo
c. Inhibidor acompetitivo
5. ¿Cuál es el significado del número de recambios (“turmover number”)? ¿Cómo se
mide la eficiencia catalítica?
6. Mencionar cinco sustancias (fármacos) que actúen como inhibidores competitivos,
no competitivos y acompetitivos.

BIBLIOGRAFÍA

Beni Camacho Pérez, Jesús Alarcón Bonilla, Beatriz Ortega Escamilla y Mónica
Araceli Camacho González. Manual de prácticas de Tecnología enzimática. 2015

Halvor,N(1980) Cinética enzimática, Reverté, Barcelona.

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