TALLER 15 Y 22 DE SEPTIEMBRE

Para realizarlo cuando no asista a práctica.

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El archivo que se llame GRAM – su nombre

Fecha: 15/09/2020 Nombre; Valeria Pabón Arcila

1. Consulte el fundamento de la coloración de GRAM

La tinción de Gram es la técnica de coloración más sencilla y más útil en microbiología

diagnóstica. Esta técnica fue creada por el médico danés Hans Christian Gram en 1884,
quien logró clasificar a las bacterias en Gram positivas y Gram negativas, de acuerdo a la
composición de la pared celular.

Con esta técnica también es posible observar la forma que tienen los microorganismos, es
decir, si son cocos, bacilos, cocobacilos, pleomórficos, filamentosos, entre otros. Así como
también su distribución en el espacio: en racimo, en cadena, aislados, en pares, en
tetradas, etc.

Cuando se sospecha una infección bacteriana, la mayor parte de las muestras recibidas
deberán extenderse en lámina portaobjetos y teñirse con Gram para examinarse bajo el
microscopio.

Fundamento
Esta es una técnica que presenta 4 pasos fundamentales: tinción, fijación con el mordiente,
decoloración y contratinción. Por tanto, esta técnica además de colorear a las bacterias,
también permite diferenciarlas.

El cristal violeta es el primer colorante utilizado. El mismo tiene afinidad por el

peptidoglicano y teñirá de morado a todas las bacterias presentes, posteriormente se
coloca el lugol, que actúa como mordiente, es decir, inducirá a la formación de complejos
insolubles de cristal violeta-yodo – proteínas ribonucleares dentro de la célula.

Las bacterias Gram positivas, al tener una pared gruesa de peptidoglicano, forman más
complejos (cristal violeta-yodo), por tanto, retienen el colorante.

Además, también influye que la pared de las bacterias Gram positivas contienen mayor
cantidad de ácidos no saturados, los cuales muestran gran afinidad por los agentes
oxidantes (Lugol).

Mientras, las bacterias Gram negativas poseen una capa delgada de peptidoglicano, lo que
hace que las bacterias formen menos complejos que las Gram positivas.

Posteriormente viene el paso de la decoloración, donde las bacterias Gram positivas y

Gram negativas se comportan de manera diferente.
 Las bacterias Gram negativas contienen una membrana externa rica en lipopolisacáridos
que forma parte de su pared celular. Las grasas son destruidas por el contacto con el
alcohol acetona, por lo que la membrana externa se desestabiliza, siendo liberado el cristal
violeta.

Es así como luego es contra teñida con la safranina o fucsina básica, tomando el color rojo.

En el caso de las bacterias Gram positivas, resisten la decoloración porque el decolorante

actúa cerrando los poros, lo que impide que el complejo cristal violeta/yodo pueda salirse.

Por tanto, se mantiene estable la coloración con el cristal violeta, y no hay cabida para la
safranina o la fucsina. Por esto estas bacterias se tiñen de azul intenso o morado.

2. Coloque dos imágenes: Una de bacteria gram negativa y otra de bacteria gram
positiva

1 Bacillus anthracis - gram +

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2 Escherichia coli - Gram -

3. Estudie esta investigación.

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