Instituto de Desarrollo Salvador

Allende Gossens
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B A C H I L L E R ATO T E C N O L Ó G I C O E N
CIENCIAS DE LA SALUD

“TINCIONES”

DOCENTE: I.B.Q. JUAN MANUEL

CRUZ MOLINA
 DEFINICIÓN
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 Es el proceso por el cual las moléculas de un colorante se

adsorben a una superficie.
 El uso de colorantes permite cambiar el color de las células
de los microorganismos y poder realizar la observación en
microscopio óptico.

Figura 1. Diferentes tipos de tinciones

 OBJETIVO
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 Las tinciones se usan para tres cosas

fundamentalmente:
 Descripción de microorganismos en base a su morfología,
estructura y distribución.
 Detección de determinados microorganismos para
diagnostico clínico, por ejemplo.
 Clasificación de microorganismos según sus características
tintoriales.
 Tipos de tinciones
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 a) Tinción simple: El colorante utilizado sirve solo para

denotar la morfología celular.

 b) Tinción diferencial: El colorante utilizado pone de

manifiesto diferencias entre células bacterianas o entre
partes de una misma célula. Estas técnicas utilizan mas de
un colorante o bien ciertos reactivos complementarios para
la tinción
 COLORANTES
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Los colorantes más utilizados son:

Azul de metileno
Cristal violeta
Safranina
Eosina
Hematoxilina

Estos son catiónicos y se combinan fuertemente con

componentes celulares cargados negativamente, como
los ácidos nucleicos y los polisacaridos ácidos
 Técnicas de tinción
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Tinción de Gram: Esta tinción se denominada así por el

bacteriólogo danés Christian Gram, quien la desarrolló en
1844.
 Sobre la base de su reacción a la tinción de Gram, las
bacterias pueden dividirse en dos grupos, gram-positivas y
gram-negativas
 Las bacterias gram-positivas y gram-negativas tiñen de
forma distinta debido a las diferencias constitutivas en la
estructura de sus paredes celulares.
 Bacteria Gram positiva
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 El material de la pared celular bacteriana que confiere rigidez es el

peptidoglicano.
 La pared de la célula gram-positiva es gruesa y consiste en varias capas
interconectadas de peptidoglicano así como algo de ácido teicoico.
 Generalmente, 80%-90% de la pared de la célula gram-positiva es
peptidoglicano.

Figura 2.Estructura bacteriana

 Bacteria Gram negativa
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 La pared de la célula gram-negativa contiene una capa mucho más

delgada, únicamente de peptidoglicano y está rodeada por una
membrana exterior compuesta de fosfolípidos, lipopolisacáridos, y
lipoproteínas.
 Sólo 10% - 20% de la pared de la célula gram-negativa es
peptidoglicano.

Figura 3.Estructura bacteriana Gram negativa

 Procedimiento
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 Tinción de Gram
 1)      Las células son fijadas por medio del calor sobre un portaobjetos, se tiñen
primero con una solución de cristal violeta y son lavadas después para quitar el
exceso de colorante. En este punto las células Gram positivas y Gram negativas,
están teñidas de azul/violeta.

 2)      El portaobjetos se cubre con una solución de yodo-yoduro potásico. El KI

hace soluble el I2 en agua. El I2 entra en las células y forma un complejo
insoluble en agua con el cristal violeta. En este punto las células se mantienen
iguales.
 Procedimiento
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 3)      Se inicia con la decoloración usando una solución de Alcohol-acetona, sustancias

en las que es soluble el complejo I2-Cristal violeta. Algunos microorganismos no se
decoloran. La diferencia esencial entre los dos tipos de células es la resistencia que
presentan ante la decoloración.
 Después de la decoloración las células Gram positivas son azul\violeta, y las Gram
negativas son incoloras.
 4)      Para poner de manifiesto las células Gram Negativas se utiliza una coloración de
contraste. Habitualmente es de color rojo, como la safranina.

Figura 5. Bacterias gram positivas y gram

negativas
Figura 4. Pasos de la tinción de Gram
 Tinción de Giemsa
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 La tinción de Giemsa es un método habitual para el examen de frotis

sanguíneos, cortes histológicos y otro tipo de muestras biológicas.
 Es muy útil para la identificación de riketsias (plasmodium), protozoos..
 La técnica de Giemsa está formada por varios colorantes: los tintes neutros
utilizados combinan el azul de metileno como tinte básico y la eosina como
tinte ácido, lo que da una amplia gama de colores
 ¿Cómo vemos las células con esta tinción?
 1. Citoplasma: rosa
 2. Núcleos: azul
 3.Eritrocitos: rojo
 4. Gránulos de las células cebadas: violeta
 5.Bacterias: azul
 6. Parásitos: azul
Figura 6. Elementos formes de la sangre con tinción
de Giemsa
 Tinción de ZIEHL-NEELSEN(Baar)
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 Las paredes celulares de ciertos parásitos y bacterias contienen ácidos

grasos (ácidos micólicos) de cadena larga (50 a 90 átomos de carbono)
que les confieren la propiedad de resistir la decoloracíón con alcohol-
ácido, después de la tinción con colorantes básicos.
 Por esto se denominan ácido-alcohol resistentes.
 Las bacterias que resisten la decoloración son de color rojo y las que no,
se ven de color azul ya que se utiliza azul de metileno como tinción de
contraste.

Figura 7. Visualización de
bacterias con tinción Baar
 Tinción con tinta china
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 Es el reverso del procedimiento de tinción usual: las células se dejan sin

teñir pero se colorea en cambio el medio que las rodea.
 Lo que se ve, por tanto, es el perfil de las células. La sustancia utilizada
para la tinción negativa es un material opaco que no tiene afinidad por
los constituyentes celulares y que simplemente rodea las células, tal
como la tinta china (que es una suspensión de partículas de carbono
coloidal) o la nigrosina (un colorante negro insoluble en agua).

Figura 8. Cryptoccocus
Neoformans en tinción
negativa
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https://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/q
uimica/5_anio/biotecnologia/practico4.pdf
http://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-
2014/ir141b.pdf
http://microbiologia3bequipo5.blogspot.mx/2014/1
0/metodos-y-tecnicas-de-tincion.html
http://campus.usal.es/~micromed/Practicas_odont
ologia/unidades/labv/LabMicro/Diag_directo.html
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GRACIAS POR SU
ATENCIÓN 