Microbiología II

Bacterias Gram Positivas y Gram Negativas

Dr. Johan Gregorio Mauricio Linares, Ms.
 Generalidades de las Bacterias Gram Positivas y Gram Negativas .

Las bacterias que parecen teñirse de púrpura bajo el microscopio cuando se usa la técnica de tinción de Gram se
designan como gram positivas. Esto permite clasificar las bacterias y determinar rápidamente el tratamiento
adecuado.

Las bacterias se clasifican de acuerdo con la reacción de su pared a la violeta de genciana: en el caso de que las
paredes de las bacterias probadas adquieran el color púrpura, se dice que son Gram positivas, pero cuando las
paredes de la bacteria no toman el color púrpura se dice que estas bacterias son Gram Negativas.
 Desarrollo del Protocolo de Tinción.

 Este protocolo de tinción fue desarrollado por el bacteriólogo danés Hans Christian Gram
en 1884 y desde entonces, ha servido para el conocimiento de la estructura de las paredes
bacterianas y poder clasificarlas, y con ello, conocer las infecciones que pueden provocar
determinadas bacterias.
Diferencia entre bacterias Gram positivas y Gram
negativas.

 La pared de las bacterias Gram-positivas está formada por unas cuarenta capas de
peptidoglicano que no permite que el alcohol pase a través de ella porque es muy espesa,
mientras que la de las bacterias Gram-negativas está formada por una sola capa de
peptidoglicano.

 Cuando las bacterias se tiñen de rojo rosado en el microscopio, se dice que son Gram
negativas. Estos son, por ejemplo, la salmonella y escherichia coli .
Salmonella Vs Escherichia coli.
Ejemplos de Bacterias Gram positivas.
 Este tipo de bacterias pueden ser tanto cocos como bacilos. Entre las más destacadas
podemos señalar:

 Streptococcus aglactiae. Que suele darse en casos de neumonía así como meningitis
neonatal y endometritis.
 Staphylococcus aureus. Una bacteria que suele provocar dermatitis, infecciones
localizadas así como gastroenteritis.
 Bacillus antracis. Esta es la bacteria del ántrax.
 Clostridium tetani. La bacteria que provoca los tétanos.
 Clostridium botullinum. La bacteria del botulismo clásico e infantil, que suele estar en
alimentos mal conservados.
 Papel de las Bacterias en el Cuerpo.

 El papel de las bacterias en nuestro cuerpo, cuando están fuera de nuestra flora intestinal,
es multiplicarse a costa nuestra, ya sean Gram Positivas o Gram Negativas. El
conocimiento de esta característica es útil para que el médico pueda administrar e indicar
un antibiótico adecuado.
 Todas las bacterias pueden causar infecciones. Todo lo que ellas necesitan es un sistema
inmunológico debilitado y una gran carga bacteriana para que se desarrolle la infección.

 Los cocos Gram positivos son responsables de infecciones por neumococos, estafilococos
aureus, estreptococos, etc.

 Los bacilos grampositivos son responsables de infecciones como el mencionado ántrax, difteria
o incluso listeriosis. Generalmente son más resistentes a los antibióticos.
 Tinción de Gram.

 La tinción de Gram es una técnica muy sencilla que se basa en el uso de un colorante que
permite observar las bacterias mejor que bajo el microscopio.

 Las bacterias son microorganismos unicelulares que conviven habitualmente con el ser
humano. En muchos casos forman parte de nuestra flora habitual y la de nuestro entorno
sin ocasionar ningún peligro para la salud. En otras situaciones, las bacterias pueden ser
patógenas, es decir, producen infecciones de diversos tipos: cutáneas, abdominales, óseas,
etc.
Para poder identificarlas y tratarlas es necesario clasificarlas. Las diferentes clasificaciones atienden
a diversos criterios y características bacterianas: morfología, metabolismo, presencia de pared
celular, etc.

Una de las maneras de diferenciar a las bacterias es en base a la presencia de una pared celular. Así,
hay bacterias con una pared gruesa (formada por peptidoglicanos) y otras con una pared mucho más
delgada.
Generalidades de la Tinción de Gram.

 La tinción de Gram se utiliza en microbiología desde finales del siglo XIX. Es una técnica
muy sencilla que se basa en el uso de un colorante (tinción) y que tiene una gran utilidad
en medicina.

 La tinción de Gram es un tipo de tinción que se realiza sobre las bacterias para observarlas
mejor bajo el microscopio. Según la distribución del peptidoglicano de la pared celular que
las envuelve, se tiñen de una forma u otra. Así, las bacterias que no se tiñen mediante esta
técnica se denominan Gram negativas. Están formadas por una pared más fina formada por
menos capas de peptidoglicano y una segunda membrana rica en lípidos (que repele la
tinción Gram), al microscopio aparecen incoloras.
Las Gram positivas tienen una pared celular mucho más gruesa, formada por un gran número de capas de
peptidoglicanos entre las que se inserta la tinción Gram, dando un color violeta intenso al microscopio y se
clasifican como Gram +.

La gran aportación práctica de la tinción de Gram es que permite determinar el tipo de antibiótico así como su
eficacia. El antibiótico de elección ha de ser capaz de atravesar la pared bacteriana, en función de si la
bacteriana es gram positiva o negativa se seleccionará el antibiótico más eficaz.
 Procedimiento de la tinción de Gram.
 Recoger la muestra de bacterias a estudio mediante un isopo (bastón estéril de algodón).
 Extender dicha muestra sobre un portaobjetos y dejarla secar.
 Fijar la muestra mediante un alcohol (metanol).
 Aplicar el tinte de violeta de genciana sobre el portaobjetos y esperar un minuto.
 Enjuagar la muestra con agua y aplicar un fijador del violeta de genciana (lugol). El lugol y el
violeta de genciana forman un complejo insoluble en agua capaz de penetrar en la pared de las
células bacterianas.
 Lavar de nuevo el portaobjetos con una mezcla de alcohol y acetona durante unos segundos.
 Opcionalmente se puede añadir una tinción de safranina o fucsina para distinguir las gram
negativas que aparecerán bajo el microscopio (en lugar de incoloras) con un tono rosado o rojo.
Lavar con agua.
 Ya se puede observar la muestra al microscopio donde se visualizarán de color violeta las gram
positivas y de color rosa-rojizo las gram negativas.
 Nota Importante.
 En el caso de las bacterias gram
positivas los complejos insolubles se
quedan atrapados entre las capas de
peptidoglicano de la pared bacteriana,
sin disolver y dando la coloración
morada característica al observarlas al
microscopio.
 En cambio, en las bacterias gram
negativas estos compuestos sí que se
disuelven y pierden su color. Al
microscopio se verán incoloras o de
color rosa-rojo, en función de si se ha
añadido la fucsina al final de la técnica
de tinción de Gram.
Entre las bacterias gram positivas más frecuentes se encuentran el Staphylococcus, el
Streptococcus y el enterococo. Ejemplos de bacterias gram negativas son la Escherichia coli y
la Pseudomona aeuruginosa.Las limitaciones de la técnica vienen dadas por las características
de la muestra, el procotolo de tinción y además el hecho de que algunas bacterias no presentan
pared celular.

Lo que debes saber y tener pendiente es…..

 Es una técnica muy sencilla que se basa en el uso de un colorante (tinción) y que tiene una
gran utilidad en medicina y que permite observar las bacterias mejor que bajo el
microscopio.

 La gran aportación práctica de la tinción de gram es que permite determinar el tipo de

antibiótico así como su eficacia.

 El proceso para realizar la tinción es muy sencillo.

Microbiología.
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Ahora es el momento…