UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Programas de estudio: Microbiología y Laboratorio Clínico.

INFORME:
“Siembra y aislamiento, Características Culturales, tinción Gram, tinción
Ziehl-Neelsen y tinción de esporas”
Asignatura:
Microbiología General
Presentado por:
- Aliaga Ccarita, Emily Yajaida
- Alvarado Nuñez, Ruth Marilyn
- Bejar Huaylla, Nancy Gabriela
- Capia Chipana, William
- Condori Condori, Yanet
- Machaca Huallata, Gaby Melania
- Valenzuela Díaz, Jurgen Andre
- Caceres Lanchipa cristian

SEMESTRE: II y III GRUPO: A

Docente:
Doctor en Ciencias Biomédicas - M.Sc. Ciencias Biomédicas
Medina Rojas, Roxana del Carme
 “Año de la unidad, la paz y el desarrollo”

INFORME DE LABORATORIO N° 3-4-5-6-7-2023/ FFCCBB-UNAP

AL: Dra. Medina Rojas, Roxana del Carmen
Doctor en Ciencias Biomédicas
Magister en Ciencias Biomédicas – Microbiología

DE: Aliaga Ccarita, Emily Yajaida

Alvarado Nuñez, Ruth Marilyn
Bejar Huaylla, Nancy Gabriela
Capia Chipana, William
Condori Condori, Yanet
Machaca Huallata, Gaby Melania
Valenzuela Díaz, Jurgen Andre
Caceres Lanchipa, Cristian
Estudiantes de la escuela profesional de biología

ASUNTO: Informe de “siembra y aislamiento, características culturales, tinción

gran, tinción Ziehl-Neelsen y tinción de esporas”
FECHA: 17/07/2023

Estimada Dra. Roxana del Carmen Medina Rojas tenemos el agrado de dirigirnos a su
autoridad para expresarle nuestro saludo cordial y al mismo tiempo hacerle llegar el informe de
“Siembra y aislamiento, características culturales, tinción gran, tinción Ziehl-Neelsen y
tinción de esporas”.
PRIMERO: Con previa coordinación con su persona dispusimos a dirigirnos al laboratorio
ubicado en la Facultad de Ciencias Biológicas en el segundo piso con el fin de realizar la correcta
forma de inocular muestras a los medios de cultivo de distintos tipos de agar que obtuvimos de la
anterior práctica también las distintas tinciones que pudimos realizar como la tinción gram y la
tinción de esporas, mas la de Ziehl-Neelsen no la realizamos debido a que realizar una fijación en
la lamina directamente del esputo de una persona con tuberculosis es muy peligroso para nosotros
quienes apenas vamos entrando al mundo de la microbiología.
SEGUNDO: Se informa también que los estudiantes que conforman el grupo de trabajo
efectuaron la práctica de microbiología en la fecha 31/05/2023, 14/06/23, 03/07/23, 05/07/23 y
10/07/23, considerando la información que nos brindó su persona anteriormente y la guía de
prácticas.
TERCERO: Se hará presente el anexo donde se visualizará los respectivos materiales y equipos
usados en el laboratorio. Es por eso que se le hace entrega el presente informe de laboratorio para
su conocimiento y fines pertinentes.
 “Año de la unidad, la paz y el desarrollo”

Firmado digitalmente por: Firmado digitalmente por:

UNA
Aliaga Ccarita, Emily Yajaida
Motivo: soy el autor del
UNA Capia Chipana, William
Motivo; Soy el autor del
documento PUNO documento
PUNO Fecha: 17/07/23 Fecha: 17/07/23

Firmado digitalmente por: Firmado digitalmente por:

Alvarado Nuñez, Ruth Marylin
UNA Motivo: Soy el autor del UNA Condori Condori, Yanet
Motivo: Soy el autor del
PUNO documento PUNO documento
Fecha: 17/07/23 Fecha: 17/07/23

Firmado digitalmente por:

Firmado digitalmente por:
Machaca Huallata, Gaby
Caceres Lanchipa, Cristian
UNA Motivo: Soy el autor del UNA Melania
Motivo: Soy el autor del
documento PUNO
PUNO documento
Fecha: 17/07/23
Fecha: 17/07/23

Firmado digitalmente por: Firmado digitalmente por:

Bejar Huaylla, Nancy Gabriela
UNA Valenzuela Diaz, Jurgen Andre
Motivo: Soy el autor del
UNA Motivo: Soy el autor del
PUNO documento PUNO documento
Fecha: 17/07/23 Fecha: 17/07/23
 “Año de la unidad, la paz y el desarrollo”

I. INTRODUCCIÓN
Cuando hablamos de aislamiento nos referimos a la separación de un determinado
microorganismo del resto de microorganismos que le acompañan. El método más usual
es la siembra por estría sobre un medio de cultivo sólido adecuado dispuesto en una
placa de Petri. Después de ser preparados correctamente los medios de cultivo, se
precede a la inoculación de los microorganismos extendiéndolos sabre la superficie del
agar con el asa de Kolle, con un asa curvada o una varilla de vidrio; esto se llama
siembra por estría.
Existen varias técnicas que se utilizan para sembrar por estría y proporcionan excelentes
resultados cuando se realizan correctamente.
El objetivo inmediato de la siembra en placa por estría es obtener colonias separadas de
bacterias a partir de suspensiones concentradas.
Durante la inoculaci6n al comienzo de la siembra, las células estrechamente
apelmazadas, forman colonias que se desarrollan juntas, pero a medida que la extensión
continua, cada vez son menos las células que permanecen en las gotas que lleva el asa
ya que a medida que estas caen y crecen sabre la superficie, originan colonias bien
separadas. Unas pocas estrías del principio no producirán colonias separadas; una buena
placa resulta de los movimientos progresivos del asa o aguja repetidos muchas veces.
En la serie de laboratorios realizados con la guía de la Dra. Roxana del Carmen,
realizados de forma continua debido a la falta de tiempo, iniciamos con la siembra y
aislamiento de los microorganismos posteriormente estudiamos sus características
Ziehl-Neelsen culturales, después de realizar las características culturales hicimos la
tinción Gram, debimos continuar con la tinción de Ziehl-Neelsen, sin embargo no la
realizamos debido a los riesgos sanitarios y en su lugar se obtuvieron láminas ya fijadas
de la bacilo de koch, realizados con la tinción por profesionales competentes, luego de
ello se tomaron muestras de estiércol para observar microorganismos capaces de formar
esporas, esta observación se tuvo que realizar mediante tinción de esporas, pero no
pudimos observar las esporas debido a la falta de muestras adecuadas a nuestro objetivo,
además de nuestra inexperiencia en este campo.
La siembra y el aislamiento de microorganismos son procesos fundamentales en el
campo de la microbiología, estas técnicas nos permiten obtener y estudiar de manera
individual los diferentes tipos de microorganismos presentes en muestras biológicas o
ambientales.
La siembra consiste en transferir una pequeña cantidad de muestra a un medio de
cultivo adecuado, esto proporciona las condiciones necesarias para el crecimiento y
desarrollo de los microorganismos presentes en la muestra; el medio de cultivo puede
ser sólido, líquido o semisólido, dependiendo de las necesidades del microorganismo
que se desea estudiar.
Una vez realizada la siembra, es necesario aislar los microorganismos individuales para
poder estudiar sus características de manera precisa; para ello, se utilizan técnicas como
la técnica de estría en placa, esta técnica consiste en utilizar un asa de inoculación para
transferir una pequeña cantidad de microorganismos a un medio de cultivo sólido en
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forma de estría, esto permite que los microorganismos se dispersen en la superficie del
medio y se puedan aislar individualmente.
El aislamiento de microorganismos es importante ya que nos permite estudiar sus
características culturales, como su morfología, color, textura y patrones de crecimiento.
También nos permite obtener cultivos puros, es decir, una población de
microorganismos de una sola especie. Esto es esencial para realizar pruebas de
identificación y caracterización más precisas.
La observación de las características culturales en una placa Petri es una herramienta
fundamental en el campo de la microbiología, al sembrar una muestra en el medio de
cultivo en la placa, se proporcionan las condiciones óptimas para el crecimiento de los
microorganismos presentes en ella, una vez que los microorganismos han crecido en la
placa, se pueden observar y estudiar sus características culturales, estas características
incluyen la forma, el tamaño, el color, la textura y el patrón de crecimiento de las
colonias.
La forma y el tamaño de las colonias pueden variar ampliamente entre diferentes
especies de microorganismos, algunas colonias pueden ser redondas y regulares,
mientras que otras pueden ser irregulares o tener formas más complejas, el tamaño de
las colonias también puede variar, desde colonias muy pequeñas hasta colonias más
grandes.
El color de las colonias es otro indicador importante de las características culturales de
los microorganismos, algunas colonias pueden ser blancas o transparentes, mientras que
otras pueden tener colores más llamativos, como amarillo, rosa, verde o negro, el color
puede es el resultado de la producción de pigmentos por parte de los microorganismos.
La textura de las colonias también puede variar, desde colonias suaves y lisas hasta
colonias rugosas o granuladas. Esta característica puede ser útil para la identificación y
diferenciación entre las especies de bacterias.
Además, el patrón de crecimiento de las colonias puede proporcionar información
valiosa sobre la capacidad de los microorganismos para colonizar y difundirse en el
medio de cultivo, algunas colonias pueden crecer de manera dispersa, mientras que otras
pueden agruparse o formar patrones más complejos, como anillos o filamentos.
La observación cuidadosa de estas características culturales en la placa Petri puede
ayudarnos a identificar y caracterizar los microorganismos presentes en la muestra, estas
características proporcionan pistas importantes sobre la identidad y las propiedades de
los microorganismos, lo que contribuye a un mejor entendimiento de su
comportamiento y su papel en diferentes entornos.
Luego de las características culturales procedimos a realizar la tinción gram, la tinción
de Gram es una técnica ampliamente utilizada en microbiología para diferenciar y
clasificar bacterias en dos grupos principales: grampositivas y gramnegativas, esta
técnica se basa en la capacidad de las bacterias para retener o no retener un colorante
violeta cristalino durante el proceso de tinción.
La tinción de Gram es un procedimiento relativamente sencillo pero altamente
informativo, consiste en aplicar una serie de reactivos a una muestra de bacterias fijadas
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en un portaobjetos, seguido de un proceso de lavado y visualización al microscopio, una

vez que se ha aplicado el colorante violeta cristalino, se procede a la decoloración con
un agente llamado alcohol-ácido, que tiene la capacidad de extraer el colorante de las
bacterias gramnegativas, dejándolas incoloras, por otro lado, las bacterias grampositivas
retienen el colorante y aparecen de color violeta intenso.
La tinción de Gram proporciona información valiosa sobre la estructura y composición
de la pared celular de las bacterias, las bacterias grampositivas tienen una pared celular
gruesa compuesta principalmente de peptidoglicano, mientras que las bacterias
gramnegativas tienen una pared celular más delgada y compleja, compuesta por una
capa delgada de peptidoglicano rodeada por una membrana externa lipídica esta
diferencia en la estructura de la pared celular tiene implicaciones importantes en la
respuesta a los antibióticos y en la patogenicidad de las bacterias, además, la tinción de
Gram también puede proporcionar información inicial sobre la forma y disposición de
las bacterias, ya que algunas bacterias pueden aparecer como cocos (esféricas), bacilos
(alargadas) o espirilos (en forma de espiral).
Como se mencionó anteriormente se obtuvo placas fijadas del bacilo de koch con la
tinción Ziel-Neelsen, La tinción de Ziel-Neelsen es una técnica de tinción diferencial
ampliamente utilizada en microbiología para identificar y diferenciar las micobacterias,
un grupo de bacterias que incluye la especie causante de la tuberculosis, esta técnica se
basa en la capacidad única de las micobacterias para retener un colorante rojo llamado
fucsina básica incluso después de la decoloración con un agente ácido.
La tinción de Ziel-Nielsen se lleva a cabo en varias etapas. En primer lugar, se aplica
fucsina básica, un colorante liposoluble, a una muestra de bacterias fijadas en un
portaobjetos. Luego, se calienta suavemente la muestra, generalmente mediante el uso
de calor seco o vapor, para permitir que la fucsina básica penetre en las células de las
micobacterias, esta característica distintiva de las micobacterias se debe a la
composición de su pared celular, que contiene lípidos hidrófobos que actúan como
barrera para la entrada y salida de colorantes.
Después de la tinción con fucsina básica, se realiza la decoloración con un agente ácido,
como el ácido clorhídrico diluido o el alcohol-ácido, este paso es crucial ya que elimina
el colorante de las bacterias que no son micobacterias, sin embargo, las micobacterias
tienen una alta afinidad por la fucsina básica y retienen el colorante incluso después de
la decoloración ácida.
Para mejorar la visualización y el contraste, se aplica un contraste o tinte de contraste,
como el azul de metileno o el verde de malaquita, para teñir las bacterias no
micobacterianas presentes en la muestra. De esta manera, las micobacterias aparecen de
color rojo intenso, mientras que las otras bacterias se tiñen de azul o verde, lo que
facilita su diferenciación al microscopio.
La tinción de Ziel-Neelsen es particularmente útil en el diagnóstico de la tuberculosis y
otras enfermedades causadas por micobacterias, la retención de la fucsina básica por
parte de las micobacterias después de la decoloración ácida es una característica
distintiva que permite su identificación y diferenciación de otras bacterias, además, la
tinción de Ziel-Nielsen también puede proporcionar información sobre la morfología y
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agrupación de las micobacterias, lo cual es relevante para el estudio de la variabilidad

genética y la virulencia de las cepas.
Es importante destacar que la tinción de Ziel-Neelsen es una técnica complementaria y
no definitiva para el diagnóstico de la tuberculosis y otras enfermedades
micobacterianas, se utiliza en conjunto con otras pruebas, como el cultivo bacteriano y
las pruebas moleculares, para confirmar la presencia y la identidad de las micobacterias.
En pocas palabras, la tinción de Ziel-Neelsen es una técnica de tinción diferencial que
se utiliza para identificar y diferenciar las micobacterias, incluyendo la especie causante
de la tuberculosis, su capacidad para retener la fucsina básica después de la
decoloración ácida permite la visualización y el diagnóstico temprano de estas bacterias
en muestras clínicas, además, proporciona información valiosa sobre la morfología y
agrupación de las micobacterias, lo cual es relevante para el estudio de la variabilidad
genética y la virulencia de las cepas, sin embargo, se debe utilizar en conjunto con otras
pruebas para un diagnóstico preciso y completo de enfermedades micobacterianas.
La tinción de esporas es una técnica fundamental en microbiología utilizada por
profesionales para identificar y visualizar las esporas bacterianas. Las esporas son
estructuras de resistencia producidas por algunas bacterias en condiciones
desfavorables, y tienen la capacidad de sobrevivir en ambientes hostiles durante
períodos prolongados.
En la última parte de nuestros laboratorios se realizó la tinción de esporas, en esta
práctica no tuvimos tanto éxito a la hora de encontrar esporas debido a que nuestras
muestras era inadecuada, pero podemos mencionar que la tinción de esporas se basa en
la propiedad de las esporas de retener ciertos colorantes, como la verde malaquita o la
safranina, mientras que las células vegetativas de las bacterias se decoloran, esto se debe
a la presencia de una capa de ácido dipicolínico en las esporas, que actúa como un
agente de deshidratación y ayuda a retener los colorantes.
El procedimiento de tinción de esporas implica varias etapas. En primer lugar, se
calienta el portaobjetos que contiene las bacterias en presencia de un colorante primario,
como el verde malaquita, durante un tiempo prolongado, esto permite que las esporas
retengan el colorante, mientras que las células vegetativas se decoloran, luego, se realiza
una decoloración con agua o alcohol para eliminar el colorante de las células
vegetativas, que son más susceptibles a la decoloración, posteriormente, se agrega un
colorante de contraste, como la safranina, que tiñe las células vegetativas, mientras que
las esporas retienen el colorante primario.
La tinción de esporas es especialmente útil para identificar y caracterizar bacterias del
género Bacillus y Clostridium, que son conocidas por producir esporas, estas bacterias
pueden ser patógenas y causar enfermedades en humanos y animales, por lo que la
identificación precisa de las esporas es fundamental para el diagnóstico y tratamiento
adecuado.
Además, la tinción de esporas también es relevante en investigaciones ambientales y de
calidad alimentaria, las esporas bacterianas pueden contaminar alimentos y agua, y
pueden ser resistentes a los métodos de desinfección convencionales, por lo tanto, la
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identificación y visualización de las esporas es esencial para controlar y prevenir la

propagación de enfermedades y garantizar la seguridad alimentaria.
Con esto se concluye la serie de laboratorios realizados de forma continua debido a la
coyuntura social y política, además de las diferentes obstrucciones al normal desarrollo
de las clases.
II. OBJETIVOS
SIEMBRA Y ASILAMIENTO
• Familiarizar al estudiante con los métodos de siembra de microorganismos en el
laboratorio
MORFOLOGIA Y ESTRUCTURA BACTERIANA
• Aplicar colorantes para observar a los microorganismos.
• Observar las diversas formas que presentan los microorganismos.
• Identificar y diferenciar microorganismos al Gram y al Ziehl-Neelsen.
TINCION DE GRAM
• Aplicar colorantes para observar a los microorganismos como gramnegativos o
grampositivos
• Identificar si son cocos o bacilos ya sean grampositivos o gramnegativos
• Saberlos identificar al verlos al microscopio

TINCION ZIEL-NIEELSEN (bacterias ácido resistentes)

• Fundamentar el uso de cada reactivo de tinción al aplicarlo en bacterias ha ido
resistentes: Ej.: Nocardia, Mycobacterium tuberculosis
• Identificar y encontrar bacterias ácido resistentes a partir de:

A) Producto patológico “esputo”

En esta práctica el alumno procederá a identificar el Mycobacterium tuberculosis que
partir de muestras sugestivas “esputo” de pacientes con padecimiento de Tuberculosis
Pulmonar (TBC)cuyo producto patológico les permita identificar a los Bacilo Alcohol
Acido Resistentes (BARR) aplicando la tinción Ziel-Neelsen.
B) Cultivo de Mycobacterium tuberculosis
A partir de un cultivo del microorganismo de una muestra de esputo u otro producto
patológico.
TINCION DE ESPORAS
• Observar endosporas y su disposición en las formas vegetativas.
• Comparar las distintas morfología y disposiciones que adoptan las endosporas
en las especies empleadas
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III. ANTECEDENTES

ANTECEDENTES DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO

Existen muchas formas de aislamiento físico de una bacteria, uno de ellos fue
introducido por Koch ya hace más de 100 años llamado método de difusión a un medio
sólido, este método nos dice que debemos aislar las bacteria mediante las cajas Petri,
consiste en tomar una colonia bacteriana, luego de inocularla en una caja Petri se dividirán
formado colonias visibles al ojo humano y por la microscopia, esto se logra con diferentes
herramientas que nos permiten tomar una sola colonia bacteriana, para luego obtener un
cultivo puro. El aislamiento y siembra de bacterias fue introducido por Robert Koch
debido a que él pensaba que las bacterias podían aislarse de las heridas, porque él pensaba
que estas bacterias eran las causantes de un amplio espectro de síndromes, debido a esta
suposición Koch descubrió el bacilo tuberculoso que es el causante de la tuberculosis,
esto debido a sus investigaciones de la tuberculosis, Koch logro aislar un microorganismo
de forma pura, es decir que en el cultivo solo estaba presente el bacilo que supuso era el
causante de la tuberculosis, luego de cultivar e inocular con éxito a el bacilo presente en
los cadis de tuberculosos, Koch concluyó que el hospedero, ambiente y agente eran
importantes en la tuberculosis, sin embargo la infección no se desarrollaba sin el
microorganismo aislado, por ello se puede deducir que este bacilo era el responsable de
la tuberculosis.
En el libro de "Microbiología Clínica" que tiene como autor a Profesor Guillem
Pats(catedrático de microbiología y parasitología facultad de medicina en la universidad
nacional de Barcelona), la técnica de aislamiento se realiza porque las muestras no son
puras es decir que estas contiene más de una especie de microorganismo, para esto se
utilizan medios sólidos para separar las bacterias y obtener así un cultivo puro, para este
propósito se utiliza un asa de nicrom y se aísla por el método de agotamiento. La siembra
por agotamiento consiste en sembrar en zigzag con en el asa de nicron cargada con la
muestra (orina, pus, etc.). Se le llama método de aislamiento porque las células
bacterianas se depositan en el trayecto sobre la superficie del agar, para así a la finalidad
de depositarlas muy separadas unas de otras (protocolo técnico 2,6).
Según lo que describe Dra. Cabrera, Yerka S. en el "Manual de Practicas de
Laboratorio de Microbiología" sembrar consiste en transferir porciones biológicas con el
propósito de hacerlas desarrollarse; se detallan diferentes métodos de siembra como los
son: la siembra primaria, cuando se inocula por primera vez; siembra secundarias, se dice
cuando se toma de un cultivo previo; siembra por estría y agotamiento, con el asa cargado
de bacterias se esparce en zigzag la muestra sobre la placa Petri con el objetivo de aislar
colonias; siembra por estría en superficie, se realiza la siembra en la superficie del agar;
siembra por picadura o punción, se usa la agua bacteriológica, siembra por
embadurnamiento, siembra por dilación y por plate.
Según María Reynoso, Carina Magnoli, Germán Barros y Mirta Demo (2015),
existen métodos de siembra comunes los cuales se utilizan para la transferencia de un
microorganismos de un ambiente a otro con el propósito de cultivarlas, si se desea aislar
las bacterias se debe seguir diferentes metodologías de siembra siempre cumpliendo el
propósito de lo que se busca, en el libro se describen diferentes tipos de siembra como: la
siembra por picadura o punción, siembra en estrías, siembra por agotamiento en estrías,
siembra con espátula de Drigalsky técnica que permite el sembrado en superficies
grandes, siembra por hispo y siembra en placa vertida.
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En su libro Maria de los Angeles y Maria de Lourdes (2004), sostiene que la

bacterias deben de ser cultivadas para su identificación, para su identificación existen
diversos métodos los cuales consisten aislar las bacterias con la dilución en los medios de
cultivo sólidos, semi-sólidos, líquidos; la desventaja de este método es que solo ñas
bacterias dominantes se cultivan con existo mientras que las demás quedan relegadas a
pequeñas colonias, por esta razón se aplican métodos especiales cuando se quiere cultivar
bacterias de baja densidad, estos métodos implican mejorar las condiciones implicadas
en la bacteria que se quiere cultivar.

ANTECEDENTES TINCION GRAM

La tinción Gram es una técnica de laboratorio de microbiología para diferenciar y
clasificar bacterias en función de sus características de tinción. Fue desarrollada por el
biólogo danés Hans Christian Gram en 1884 y sigue siendo unas de las pruebas más
importantes en el campo de la microbiología
Los antecedentes de la tinción Gram incluyen los siguientes puntos clave:
1. Desarrollo de la técnica: Hans Christian Gram desarrollo la técnica de tinción
como una forma de diferenciar bacterias de dos grupos principales; Gram
positivas y Gram negativas. Observo que algunas bacterias retenían color violeta
cristalino durante el proceso de tinción, mientras que otras se descoloraban y
adquirían un color rojizo adicional con un contraste de fondo.
2. Fundamento de la Técnica: La tinción de Gram se basa en la capacidad de las
bacterias para retener o perder el colorante cristal violeta cuando se someten a
diferentes pasos de tinción. Las bacterias Gram positivas tiene una capa de
peptidoglicano gruesa en su pared celular, que retienen el colorante, mientras que
las bacterias Gram negativas tienen una capa de peptidoglicano delgada y una
membrana externa que permite la decoloración.
3. Pasos de la Técnica: La tinción Gram se realiza en varios pasos. En primer lugar,
se aplica el cristal violeta a la muestra bacteriana, seguido de la adición de yodo
como mordiente. Luego, se realiza una decoloración con alcohol o acetona para
eliminar el colorante de las bacterias Gram negativas. Finalmente, se aplica un
colorante de contraste, generalmente safranina, para teñir las bacterias gran
negativas.
4. Resultados de Tinción: Como resultado de la tinción de Gram, las bacterias Gram
positivas aparecen de color violeta oscuro o azul, mientras las bacterias Gram
negativas aparecen de color rojo o rosa. Esta diferencia en la tinción se debe a las
características estructurales de la pared celular de las bacterias.
La tinción Gram es una herramienta fundamental en microbiología y tiene aplicaciones
en la identificación y clasificación de bacterias, así como en la selección de tratamientos
antibióticos. Los resultados de la tinción de Gram proporcionan información importante
sobre la estructura y composición de las bacterias, lo que ayuda a los científicos y médicos
a comprender mejor la naturaleza de los microorganismos y su respuesta a los
tratamientos.
 “Año de la unidad, la paz y el desarrollo”

ANTECEDENTES DE TINCION ZIEHL- NIELSEN

La tinción de Ziel-Nielsen es una técnica utilizada en microbiología para identificar y
diferenciar las micobacterias, especialmente el género Mycobacterium, que incluye la
bacteria responsable de la tuberculosis. Esta técnica se basa en la capacidad de las
micobacterias para retener colorantes liposolubles incluso después de ser lavadas con
ácido.
La tinción de Ziel-Nielsen es una modificación de la tinción de Ziehl-Neelsen, que fue
desarrollada por los bacteriólogos alemanes Franz Ziehl y Friedrich Neelsen a finales del
siglo XIX. La tinción de Ziehl-Neelsen es una técnica de tinción ácido-alcohol resistente
que utiliza la fucsina básica como colorante primario y el ácido-alcohol como agente de
decoloración. Sin embargo, esta técnica tiene algunas limitaciones, ya que las
micobacterias pueden ser sobre-teñidas y enmascaradas por otros microorganismos
presentes en la muestra.
La tinción de Ziel-Nielsen, por otro lado, utiliza un colorante adicional llamado azul de
metileno para contrarrestar la sobre-teñición. Después de la aplicación de la fucsina
básica, se añade el azul de metileno, que actúa como un colorante de contraste. El azul de
metileno se une a los lugares donde la fucsina básica no se ha unido a las micobacterias
y ayuda a resaltar las micobacterias en la muestra.
El resultado final de la tinción de Ziel-Nielsen es que las micobacterias aparecen de color
rojo o rosa, mientras que otras bacterias y tejidos se tiñen de azul. Esto permite la
identificación rápida de las micobacterias y ayuda en el diagnóstico de enfermedades
como la tuberculosis.
La técnica de tinción de Ziel-Nielsen sigue siendo ampliamente utilizada en laboratorios
de microbiología para detectar la presencia de micobacterias en muestras clínicas y
ambientales. Sin embargo, es importante tener en cuenta que existen otras técnicas de
tinción y métodos de detección más modernos, como la PCR (reacción en cadena de la
polimerasa) y la tinción fluorescente, que también se utilizan en el diagnóstico de
micobacterias.

TINCION DE ESPORAS
La tinción de esporas, también conocida como tinción de endosporas, es una técnica
utilizada en microbiología para identificar y diferenciar bacterias que son capaces de
formar esporas. Estas esporas son estructuras de resistencia que ciertas bacterias pueden
formar en condiciones desfavorables, como falta de nutrientes o exposición a agentes
químicos o físicos adversos.
Los antecedentes de la tinción de esporas incluyen los siguientes puntos:
1. Descubrimiento de las esporas bacterianas: El concepto de esporas bacterianas fue
descubierto por primera vez por el científico francés Ferdinand Cohn en 1876.
Cohn observó que algunas bacterias eran capaces de formar estructuras resistentes
que les permitían sobrevivir en condiciones adversas.
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2. Desarrollo de la técnica de tinción: La tinción de esporas fue desarrollada por el

microbiólogo alemán Franz Christian Gram en 1887. Gram modificó la técnica de
tinción de Gram para adaptarla a la tinción de esporas. Su método involucraba el
uso de calor y sustancias químicas específicas para teñir las esporas y
diferenciarlas de las células vegetativas.
3. Fundamento de la técnica: Las esporas bacterianas están rodeadas por una capa
protectora llamada exoespora, que las protege de los agentes desencadenantes
ambientales. Esta capa es resistente a la tinción. Por lo tanto, la tinción de esporas
implica el uso de calor y productos químicos especiales para romper la capa de
exoespora y permitir que el colorante penetre en el interior de la espora.
4. Pasos de la técnica: El procedimiento básico de la tinción de esporas implica la
aplicación de calor, generalmente mediante el uso de vapor o una llama, para
ayudar a romper la capa de exoespora. Luego, se aplica un colorante primario,
como la malachita verde o el verde malaquita, que tiñe las esporas. A
continuación, se realiza una decoloración para eliminar el colorante de las células
vegetativas. Finalmente, se utiliza un colorante de contraste, como la safranina,
para teñir las células vegetativas.
La tinción de esporas es una técnica importante en microbiología, ya que permite
identificar bacterias que tienen la capacidad de formar esporas, como algunas especies de
Bacillus y Clostridium. Las esporas bacterianas pueden ser importantes desde el punto de
vista médico y de salud pública, ya que pueden ser resistentes a los desinfectantes y a los
tratamientos antimicrobianos, lo que las hace difíciles de eliminar y controlar.

IV. MATERIALES

Placa Petri con agar:

Agar manitol sal común rojo Agar nutritivo

Agar macCONKEY de fenol

Muestras:
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cavidad nasal de heces de perro. Intestino de jurel. Muestra de

perro. baño.

Materiales en general:

Mechero Bunsen. Estufa de incubación.

Asa de kolle.
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MATERIALES GENERALES

ASA DE KOLLE

MECHERO

CUBRE Y PORTA OBJETOS

AGUA DESTILADA

PUENTE DE TINCIÓN

PINZAS

FUENTE DE TINCIÓN

REACTIVOS

CRISTAL VIOLETA
SAFRANINA

VERDE MALAQUITA
LUGOL ALCOHOL ACETONA
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EQUIPO

MICROSCOPIO

V. RESULTADOS
La siembra de microorganismos en cada placa Petri en este caso hicimos la siembra en
placas Petri con Agares como es el MacConkey, Agar Nutritivo y Manitol Salado.
Sembramos cuatro muestras la primera que es heces de perro, la segunda es excreción de
la vía olfatoria de un perro (moco), la tercera es viseras de pescado (Jurel) y por último la
cuarta muestra es agua de baño.

1ra Muestra 2da Muestra 3ra Muestra 4ta Muestra

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Mc. Conkey Agar nutritivo Manitol Salado

Se llevo los debidos procedimientos para la siembra con cada muestra en los agares y
por supuesto trabajado correctamente para evitar la contaminación, así mismo
familiarizándonos con los métodos de siembra como se verá en las siguientes figuras.

Figura 1: Enumeramos que muestra ira para la siembra en los agares en este caso Mc y
A.N., tomamos la muestra 1 para la esterilización de la boquilla y el Asa de Kolle al
mechero, continuando sacamos la muestra con el Asa de Kolle.
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Figura 2: Esterilizamos el Asa de Kolle después de utilizarlo, tomamos la muestra e

inoculamos en los agares ya enumerados.

Figura 3: Esterilizamos el Asa de Kolle, luego hacemos las inoculaciones con el Asa por el
método de desgaste y por último esterilizamos el Asa de Kolle luego de utilizarlo llevándolo
al mechero.
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Figura 4: Placas Petri con Agares ya inoculadas.

Figura 5: Cubrimos y amarramos las placas Petri con Agares ya inoculados con papel Kraft y
pabilo para llevarlos a incubación por 24 horas.

Figura 6: Cultivos después de 7 Días, vemos que aparecieron colonias en los agares.
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TINCIÓN GRAM
Lo utilizamos para poder realizar la diferenciación bacteriana de las colonias de
bacterias que obtuvimos en los cultivos de placas Petri con Agares como es el
MacConkey y Agar Nutritivo, considerándose bacterias grampositivas a las que se
visualizan de color morado y bacterias gramnegativas a las que se visualizan de color
rosado y rojo.

A B

Figura1. Las colonias de bacterias para la Tinción Gram

A-Colonias de bacterias en el Agar MacConkey
B-Colonias de bacterias en el Agar Nutritivo

Figura2. Preparación de Frotis Bacteriano para coloración.

En un porta objeto limpio se extienden las muestras en una película uniforme y
delgada. Se deja que la película seque en el aire.
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Figura3. Fijación.
Pasar la lámina suavemente por la llama para que se seque el frotis y permita la
penetración de los colorantes.

Figura3. Procedimiento de la Tinción Gram

1-Frotis bacteriano.
2-Teñir con Cristal Violeta 1 min.
3- Lavar con agua el exceso de colorante.
4- Teñir con lugol 1min.
5- Lavar con agua el exceso de colorante.
6- Aplicar alcohol acetona durante 30s.
7- Lavar con agua el exceso.
8- Teñir con Safranina 1 min.
9- Lavar con agua el exceso de colorante y secar la preparación.
10-Observar la preparación al microscopio.
 “Año de la unidad, la paz y el desarrollo”

REGISTRO DE OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA

• FECHA: 03/07/2023
• MUESTRA: Tripas de jurel
• TINCIÓN: Tinción Gram/ Cristal Violeta, Lugol,
alcohol acetona y Safranina
• AUMENTO: 100x
• DESCRIPCIÓN: Bacilo gramnegativas

• FECHA: 03/07/2023
• MUESTRA: Eses de perro
• TINCIÓN: Tinción Gram/ Cristal Violeta, lugoL,
alcohol acetona y Safranina
• AUMENTO: 100x
• DESCRIPCIÓN: Bacilos gramnegativas
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TINCIÓN ZIEL-NIELSEN
La tinción de Ziehl-Neelsen es un tipo de tinción diferencial rápida, usada para la
identificación de bacterias ácido-alcohol resistentes.
REGISTRO DE OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA

• FECHA: 5/Julio/2023
• MUESTRA: El bacilo de
Koch(Mycobacterium tuberculosis).
• TINCIÓN: TINCIÓN ZIEL-NIELSEN
/Fuccina fenicada de Ziehl y Azul de metileno.
• AUMENTO:100x
• DESCRIPCIÓN:El bacilo de
Koch(Mycobacterium tuberculosis) se tiñe de
color azul y de azul los

TINCIÓN DE ESPORAS (WIRTZ-CONKLIN)

La tinción de Wirtz-Conklin lo usaremos para observar bien las endosporas bacterianas
que se encuentran en el estiércol.

1 2 3 4

5 6 7 8

Figura1. Preparación de Frotis Bacteriano para coloración.

En un porta objeto limpio se extienden las muestras en una película uniforme y
delgada. Se deja que la película seque en el aire.
 “Año de la unidad, la paz y el desarrollo”

1 2 3 4

5 6 7 8
Figura2. Procedimiento de la Tinción de Esporas (Wirtz-Conklin)
1-Frotis bacteriano.
2-Teñir con verde malaquita.
3-Con unas pinzas colocar la muestra encima de la llama del mechero de forma
que el colorante humee durante 5 min.
4-Lavar con agua el exceso de colorante.
5-Teñir con Safranina 1 min.
6-Lavar con agua el exceso de colorante.
7-Secar la preparación.
8-Observar la preparación al microscopio.
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Figura3. Endosporas (resultado que no fue exitoso, por lo que se muestra lo que se
debió obtener).

VI. DISCUCIÓN
• Siembra y aislamiento, características culturales. Llegando a un punto de
comparación con lo que dicen los autores mencionados en los antecedentes,
existen diversas formas de hacer una inoculación a nuestros medios de cultivo,
además, que también existen mas medios de cultivo como líquidos, semilíquidos
y sólidos, nosotros optamos por utilizar los medios de cultivo sólidos,
inoculando muestras por estrías, al ser nuestra primera experiencia con siembra
y aislamiento, de esa manera podernos familiarizar y comprender mejor las
técnicas de cómo realizar una inoculación correcta donde no contaminemos
nuestros medios de cultivo.

• La tinción es un método muy importante dentro de la microbiología, debido a

que nos permite orientarnos mediante el color de las bacterias en la placa que
clase de microorganismo es y así utilizar un medio de cultivo que nos ayude a
diferenciar el tipo de microorganismo con el que estamos trabajando,

• Tinción Gram: Los fundamentos de la técnica se basan en las diferencias entre

las paredes celulares de las bacterias Gram positivas y Gram negativas - La
pared celular de las bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de
peptidoglicano, además de dos clases de ácidos teicoicos: Anclado en la cara
interna de la pared celular y unido a la membrana plasmática, se encuentra el
ácido lipoteicoico, y más en la superficie, el ácido teicoico que está anclado
solamente en el peptidoglicano (también conocido como mureína) - Por el
contrario, la capa de peptidoglucano de las Gram negativas es delgada, y se
encuentra unida a una segunda membrana plasmática exterior (de composición
distinta a la interna) por medio de lipoproteínas.
 “Año de la unidad, la paz y el desarrollo”

• La importancia de la tinción de Ziehl-Neelsen radica en su utilización para el

diagnóstico de la tuberculosis y otras infecciones causadas por bacterias ácido-
alcohol resistentes. Esta técnica permite identificar y diferenciar estas bacterias
de otras presentes en muestras clínicas, lo que ayuda a los profesionales de la
salud a establecer un tratamiento adecuado y oportuno para los pacientes
afectados.

• Tinción de esporas: la tinción de esporas es una técnica útil en la identificación

de microorganismos. destacando su importancia en la identificación de especies
bacterianas que producen esporas, mientras que también reconocemos sus
limitaciones en cuanto a la capacidad para identificar todas las especies
bacterianas. Sin embargo, sabemos que la tinción de esporas requiere un tiempo
y costos adicionales en comparación con otras técnicas microbiológicas. En
general, el uso de la técnica de tinción de esporas es una herramienta valiosa
para la identificación microbiológica, aunque reconocemos que puede haber
limitaciones en su uso.

VII. CONCLUSIÓN
Después de familiarizar con los métodos de siembra de microorganismo en el laboratorio.
Se logró realizar un correcto aislamiento y siembra de microorganismos, mediante
técnicas de laboratorio, con el fin de inducir su crecimiento en medios de cultivo
artificiales (Agares) con el objetivo de realizar la identificación de diferentes especies y
características morfológicas de microorganismos, de lo cual podemos concluir que se
cumplió con las indicaciones comprendidas para que podamos tener un mejor crecimiento
microbiano.
Después de familiarizar con los métodos de siembra de microorganismo en el
laboratorio. Se logró realizar un correcto aislamiento y siembra de microorganismos,
mediante técnicas de laboratorio, con el fin de inducir su crecimiento en medios de
cultivo artificiales (Agares) con el objetivo de realizar la identificación de diferentes
especies y características morfológicas de microorganismos, de lo cual podemos
concluir que se cumplió con las indicaciones comprendidas para que podamos tener un
mejor crecimiento microbiano.

Es necesario tomar en cuenta que cada técnica de tinción que se realiza dentro del
laboratorio presenta determinados pasos a seguir de acuerdo a las coloraciones, Sin
importar el tipo de tinción que se esté realizando, es importante aclarar que después de la
tinción realizada adecuadamente fijada se observó en el microscopio de los medios
cultivados en agares (bacilos, cocos), Las bacterias ácido-alcohol resistentes aparecen
teñidas de rojo, y las restantes en azul.
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En las ultima practica realizada en el laboratorio de microbiología tuvimos ausencia de

resultados satisfactorios ya que en la tinción de esporas no se obtuvo resultado alguno
pese a las muestras extraídas los procedimientos seguidos por lo tanto recurrimos a libros
a ver cómo nos tenía que salir los resultados y también llegamos a la conclusión de que
posiblemente las muestras no eran adecuadas o algún error en los pasos a seguir.

VIII. REFERENCIAS

Atlas, R. M. (2010). Handbook of Microbiological Media (4th ed.). CRC Press.

Cabrera, Y. S. (2022). Manual de prácticas de laboratorio de Microbiología. 1.

Universidad Abierta para Adultos (UAPA). https://elibro-
net.bibliotecavirtualunap.remotexs.co/es/lc/unapuno-biblioteca/titulos/230218

De los Angeles, M. y de Lourdes, M. (2004). Manual de prácticas del laboratorio de

microbiología general. (1a ed.,). Iztapalapa.

Forbes, B. A., Sahm, D. F., & Weissfeld, A. S. (2007). Bailey & Scott's Diagnostic

Microbiology (12th ed.). Mosby.

Prats, G. (2006). Microbiología Clínica. Argentina: Editorial Médica Panamericana.

Priscila Gallut, R. (2016) Aislamiento y cultivo de microorganismos asociados a oncoides

de manantiales hidrotermales de Santispac, Bahia concepción, B.C.S.,
México[Tesis de Maestria, Centro de investigaciones biológicas]
file:///C:/Users/EMILY/Downloads/gallut_p.pdf
 “Año de la unidad, la paz y el desarrollo”

Rafael, V. (1 de abril de 2013). Hechos microbiológicos. Robert Koch entre clados,

gelatinas, tinciones y bacilos: Crónica de un acontecimiento.
file:///C:/Users/EMILY/Downloads/jsuarezhernandez,+20105-
Texto+del+articulo-71909-1-10-20140728_compressed.pdf

Reynoso, M., Magnoli, C., Barros, G. y Demo, M., (junio de 2015) Manual de
microbiología general. (1a ed.,). UniRio.

Zengler, K. 2009. Central role of the cell in microbial ecology. Microbiol. Mol. Biol.
Rev. 73: 712-729