Práctica no.

4
“Principales Tinciones para la Identificación de Bacterias”

INTRODUCCIÓN
La tinción propuesta por el médico danés Christian Gram en 1884, es una de las
tinciones diferenciales más utilizadas en bacteriología, que clasifica los cultivos
bacterianos de menos de 24hrs en Gram positivas y Gram negativas. El método
se fundamenta en el hecho de que el colorante primario (cristal violeta) tiñe por
igual a todas las bacterias, pero la combinación con el colorante es más
permanente en los Gram positivos.
Para establecer la diferenciación en estos dos grupos, se aplica un disolvente del
colorante primario que no tiene efecto sobre el grupo de microorganismos que lo
retienen firmemente, pero lo elimina de aquellos que no son capaces de retenerlo,
quedando por lo tanto completamente descolorados. En estas circunstancias,
sería muy difícil su observación por lo que es preciso tratarlos con otro colorante
llamado secundario, como la safranina. Este colorante no modifica el color de los
microorganismos que habían retenido el color primario, pero tiñe a los
microorganismos decolorados.

Estas diferencias de tinción de las bacterias se explican por cambios

en la composición química y estructuras de las paredes celulares, que facilitan la
retención o eliminación del colorante primario después del proceso de
decoloración.
Otras tinciones que permiten obtener más información son la negativa y la
selectiva. La tinción negativa facilita las observaciones de la morfología y tamaño
de las bacterias sin alteración por efecto del calor, así como de estructuras
especiales, como la cápsula de algunas bacterias. La cápsula también llamada
glicocálix es una estructura externa a la célula, formada de polisacáridos o
polipéptidos, que confiere protección a las bacterias contra la desecación y
fagocitosis.
La extensión sobre un portaobjetos en forma de capa fina de una mezcla de las
bacterias con tinta china o nigrosina permite observar en el microscopio
estructuras especiales como son las cápsulas, que aparecen como una zona clara
que rodea la célula bacteriana en un fondo obscuro.
Las tinciones selectivas permiten observar estructuras especializadas como las
endosporas de Bacillus y Clostridium, bacterias en las que su presencia, forma y
localización
OBJETIVOS
 Que el estudiante clasifique algunas especies bacterianas en Gram
positivas o Gram negativas de acuerdo con la tinción de Gram
 Que observe estructuras bacterianas especiales, como las endosporas y
cápsulas con tinciones selectivas
 Que comprenda la importancia que tienen estas tinciones para la
caracterización e identificación de las bacterias
MATERIALES
Muestras bacteriológicas
6 portaobjetos
1 mechero
Agua destilada
Cristal violeta
Safranina
Lugol

Solución alcohol-acetona
Aceite de inmersión
Microscopio

PROCEDIMIENTO
El estudiante preparará un frotis de cultivo sólido de cada muestra de

microorganismo y aplicará la tinción de Gram

TINCIÓN DIFERENCIAL DE GRAM

a) Cubrir el frotis con 2 gotas de cristal violeta durante 30 segundos a 1 minuto
b) Lavar cuidadosamente el frotis con agua de la llave o agua destilada para
eliminar el exceso de colorante
c) Sacudir un poco y sin dejar secar, cubrir el frotis con 2 gotas de Lugol por
30 segundos
d) Lavar cuidadosamente el frotis con agua
e) Inclinar el portaobjetos y aplicar gota a gota el decolorante dejando que
escurra hasta que no fluya más tintura.
f) Inmediatamente lavar con agua.
g) Aplicar 2 gotas de safranina durante 30 segundos
h) Lavar nuevamente con agua, eliminar cuidadosamente el exceso de agua
con una toalla de papel y dejar secar al aire libre

RESULTADOS

DISCUSIÓN
FERNANDA LEMUS GÓMEZ.
RUTH FERNANDA MARTÍNEZ CUEVAS. En la práctica de laboratorio del día 30
de marzo impartida por la docente en curso, se realizo la práctica de principales
Tinciones para la Identificación de Bacterias en ella , necesitamos porta objetos ,
tinciones de azul metileno , safranina , alcohol, agua bidestilada y una muestra de
sangre. Se desarrollaron los pasos a seguir de la manera correcta como se nos
indico al inicio de la practica por la docente , agregamos una gota de sangre y
procedemos a agregar las tinciones en orden al final de estos pasos se tuvo que
observan atraves del microsocopio las células bacterias que se pudieran encontrar
ahí . las bacterias gramnegativas se tuvieron que teñir de color rosado y las
grampositivas de color azul .
ALEJANDRO GARCÍA JIMENEZ. La tincion de gram es un método para
diferenciar las bacterias sobre su estructura de la pared celular y ayuda en la
identificación de y tratamiento de las infecciones bacterianas y en las negativas
presentan una pared más delgada que se componen de peptidoglicano recubierto
por una membrana celular externa lo que causa la pérdida de cristal violeta
durante el proceso de lavado con alcohol las bacterias de gran positiva se
presentan de color violeta y las de gran negativa se manifiestan de color rosa
ANYA HERNÁNDEZ COLLANTES. La tinción de Gram constituye una técnica de
gran relevancia en microbiología para la clasificación de bacterias en dos grupos
principales. Su uso provee información valiosa acerca de la estructura de la pared
celular bacteriana, lo que resulta de gran ayuda en la identificación y tratamiento
de infecciones bacterianas. Este procedimiento se lleva a cabo aplicando cristal
violeta a las bacterias y, posteriormente, se emplean diversos productos químicos
para fijar y deshidratar la tinción en las células. Las bacterias Gram-positivas
poseen una pared celular gruesa que se compone mayoritariamente de
peptidoglicano, lo que les permite retener el cristal violeta y presentar un aspecto
violeta o azul oscuro bajo la observación microscópica. En contraposición, las
bacterias Gram-negativas presentan una pared celular más delgada que se
compone de peptidoglicano recubierto por una membrana externa, lo que causa la
pérdida del cristal violeta durante el proceso de lavado con alcohol o acetona. En
este caso, se aplica la safranina para obtener un tinte rosa o rojo en estas células
bacterianas. De este modo, al finalizar la tinción, las bacterias Gram-positivas se
presentan de color violeta o azul oscuro, mientras que las bacterias Gram-
negativas se manifiestan de color rosa o rojo al ser visualizadas al microscopio.

KATIA HERNANDEZ CALDERON. La tinción de Gram es una herramienta

importante en microbiología para clasificar bacterias en estos dos grupos
principales, lo que proporciona información útil sobre su estructura de pared
celular y ayuda en la identificación y tratamiento de infecciones bacterianas. Se
realizó el siguiente procedimento: El proceso comienza con la aplicación del cristal
violeta a las bacterias. Luego, se aplican varios productos químicos, como el yodo
y el alcohol o acetona, para fijar y deshidratar la tinción en las bacterias.
Aquí es donde ocurre la diferencia clave: las bacterias Gram-positivas tienen una
pared celular gruesa compuesta principalmente de peptidoglicano, que retiene el
cristal violeta, lo que les da un color violeta o azul oscuro cuando se observan al
microscopio. Las bacterias Gram-negativas tienen una pared celular más delgada
compuesta de peptidoglicano rodeada por una membrana externa, y el cristal
violeta es eliminado durante el proceso de lavado con alcohol o acetona. Luego,
se aplica la safranina, que tiñe a estas bacterias de rosa o rojo. Así, al final de la
tinción, las bacterias Gram-positivas aparecen de color violeta o azul oscuro,
mientras que las bacterias Gram-negativas aparecen de color rosa o rojo bajo el
microscopio.

CONCLUSIÓN
FERNANDA LEMUS GOMEZ
En conclusión, la tinción de Gram es una técnica importante en el campo de la
microbiología para la identificación y clasificación de bacterias. Esta técnica se
basa en la capacidad de las células bacterianas para retener o no la tinción de
cristal violeta y yodo, lo que las divide en dos grupos: Gram-positivas y Gram-
negativas. La tinción de Gram permite una identificación rápida y precisa de los
microorganismos presentes en una muestra y es una herramienta valiosa en la
investigación y diagnóstico de enfermedades infecciosas. Es importante destacar
que esta técnica no es infalible y se deben considerar otros factores para una
identificación precisa, como el examen de la morfología de las células bacterianas
y su respuesta a diferentes pruebas bioquímicas. En conclusión, la tinción de
Gram es una técnica fundamental y básica en la microbiología, que sigue siendo
ampliamente utilizada en la actualidad para la identificación y clasificación de
bacterias.