Seminario del Instituto de Fisiología Celular:

Diversity of parasite mitochondria as a drug target

Que impartirá el
Dr. Kiyoshi Kita
Graduate School of Medicine, The University of Tokyo

Viernes 7 de marzo de 2014, 12:00 horas

Auditorio Antonio Peña Díaz del propio Instituto

Entrada libre
http://www.ifc.unam.mx/
UNIDAD 3. Nutrición Microbiana

¡  3.4
Medios de cultivo: clasificación,
diseño y aplicaciones.
 Composición química de
una bacteria (E. coli)
Molécula % del peso seco (2.8x10-13 g)

• Macromoléculas totales 96
Proteínas 55
Polisacáridos 5
Lípidos 9.1
ADN 3.1
ARN 20.5
• Monómeros totales 3
Aminoácidos y precursores 0.5
Azucares y precursores 2
Nucleótidos y precursores 0.5
• Iones inorgánicos 1
Total 100%
 Clasificación
Microorganismos

Fuente de energía

Oxido-reducción Luz
Quimiótrofas Fotótrofas

Compuestos orgánicos
Fuente de carbono
Quimioheterótrofos

Compuestos orgánicos
Fuente de carbono
Fotoheterótrofos

Compuestos orgánicos CO2

Quimioheterótrofos Fotoautótrofos

CO2

Compuestos inorgánicos
Quimiolitótrofos

Fuente de carbono

Compuestos Orgánicos
Mixótrofos

CO2
Litoautótrofos
 Macronutrientes en los
medios de cultivo
Elemento Forma encontrada en
el medio ambiente
Carbono (C) CO2, compuestos orgánicos
Forma química en los
medios de cultivo
Glucosa, malato, acetato,
piruvato, cientos de otros
compuestos o en mezclas
complejas (extracto de
levadura, peptona y otros)

Hidrógeno (H) H2O, compuestos orgánicos H2O, compuestos orgánicos

Oxígeno (O) H2O, O2, compuestos H2O, O2, compuestos
orgánicos orgánicos
Nitrógeno (N) NH3, NO3, N2, compuestos Inorgánicos: NH4Cl, (NH4)2SO4,
orgánicos nitrogenados KNO3, N2
Orgánicos: Aminoácidos,
bases nitrogenadas de
nucleótidos y otros
compuestos de nitrógeno;
PEPTONAS
 Macronutrientes en los
medios de cultivo
Elemento Forma encontrada en
el medio ambiente
Fósforo (P) PO43-
Azufre (S) H2S, compuestos orgánicos
de S, metales (FeS, CuS,
ZnS, NiS y otros)
Potasio (K) K+ en solución o varias sales
de K
Magnesio (Mg) Mg2+ en solución o varias
sales de Mg
Forma química en los
medios de cultivo
KH2PO4, Na2HPO4
Na2SO4, Na2S2O3, Na2S,
cisteína u otros compuestos
orgánicos con azufre
KCl, KH2PO4
MgCl2, MgSO4
 Macronutrientes en los
medios de cultivo
Elemento Forma encontrada en Forma química en los
el medio ambiente medios de cultivo
Sodio (Na) Na+ en solución o como NaCl
NaCl y otras sales de Na

Calcio (Ca) Ca2+ en solución o como CaCl2

CaSO4 y otras sales de Ca

Fierro (Fe) Fe2+ o Fe3+ en solución como FeCl3, FeSO4 y otras

FeS, Fe(OH), otras muchas soluciones de fierro (o Fe3+,
sales de Fe EDTA, Fe2+ citrato)
 Micronutrientes en los
medios de cultivo
Elemento Función celular
Cobalto Vitamina B12, transcarboxilasa

Cobre Proteínas, citocromo c oxidasa, SOD

Manganeso Activador enzimático, SOD.

Molibdeno Enzimas, nitrogenasa de molibdeno, nitrato reductasa.

Níquel Hidrogenasa, monóxido de carbono deshidrogenasa.

Selenio Hidrogenasas, aminoácido selenio-cisteína.

Tungsteno Formato deshidrogenasa.

Vanadio Nitrogenasa de vanadio.

Zinc Anhidrasa carbónica, alcohol deshidrogenasa.

 Factores de crecimiento
Vitamina Función
Ácido p-amino benzoico (PABA) Precursor del ácido fólico
Ácido fólico Metabolismo de un carbono, transferencia
de grupos metilo
Biotina Biosíntesis de ácido grasos, beta
descarboxilaciones, fijación de CO2
Niacina (ácido nicotínico) Precursor del NAD+; transferencia de
electrones en reacciones redox
Cobalamina (B12) Reducción y transferencia de fragmentos
de un solo carbono.
Riboflavina Precursor de FAD, FMN, transporte de
electrones.
Ácido pantoténico Precursor de la CoA
Tiamina (B1) Alfa descarboxilaciones, transcetolasas.
Complejo B6 (piridoxal, piridoxamina) Transformaciones de aminoácidos y
cetoácidos.
Grupo Vitamina K, quinonas Transportadores de electrones
(ubiquinonas, menaquinonas, etc.)
 Medios de Cultivo
Composición Naturales o Complejos
Sintéticos

Estado Líquido
Fluido 0.1% de agar
Semisólido 0.2 a 0.8% de agar
Sólido 1.5 a 2% de agar

Uso Enriquecidos o nutritivos

De enriquecimiento
Selectivos
Diferenciales
De transporte
De mantenimiento o conservación
Pruebas Bioquímicas
 Clasificación por composición de
los medios de cultivo
Naturales o complejos. Son medios
que no tienen una composición
definida. Sangre, suelo, frutas, etc.
o medios que contengan
ingredientes cuya composición no
esté completamente definida
como el extracto de levadura,
peptonas o el agua de la llave.

Los medios sintéticos son aquellos

cuya composición en
completamente conocida, sus
componentes son extrapuros,
como en los medios empleados
para investigación.
Medios de cultivo deshidratados
 Clasificación por estado de los
medios de cultivo
Medios líquidos. Generalmente tienen
componentes completamente
solubles. Son útiles en la propagación
de microorganismos pero tienen la
desventaja de que no se pueden
detectar contaminaciones.
 Agar
Extraído a partir de un tipo de
algas rojas (de los géneros
Gelidium y Gracilaria), Agar
es un gelificante que se
emplea en Japón desde el
siglo XV. En 1859 se introdujo
en Europa como alimento
característico de la cocina
china y a principios del siglo
XX se empezó a aplicar en la
industria alimentaria. Es una
fuente de fibra y tiene
capacidad de formación de
gel en proporciones muy
bajas. Permite la elaboración
de gelatinas calientes.
 Clasificación por estado de los
medios de cultivo
Los medios fluidos contienen agar en una
concentración aproximada a 0.1%, el
medio tiene una consistencia líquida pero
la presencia de agar disminuye la
velocidad de disolución de O2 ambiental.
Se emplea generalmente en el cultivo de
microorganismos anaerobios y
microaerofílicos.

Medio fluido de tioglicolato

con resarzurina (indicador
de oxido/reducción)
 Clasificación por estado de los
medios de cultivo
Los medios de cultivo semisólidos
contienen de entre el 0.2 y el 0.8% de
agar, son suaves y permiten observar la
movilidad de los microorganismos. Esta
consistencia es utilizada en los medios
de transporte, las pruebas de movilidad,
pruebas bioquímicas y pruebas
genéticas.
 Clasificación por estado de los
medios de cultivo

Los medios sólidos contienen entre 1.5

a 2.0% de agar, esto los hace tener
una consistencia dura y forman un
soporte para el crecimiento
microbiano. Se emplean para cultivo,
aislamiento, diferenciación,
cuantificación, pruebas de
sensibilidad y en algunos casos para
conservación (inclinados).
 Uso. Medios enriquecidos
Contienen componentes ricos nutritivamente y permite el
crecimiento de microorganismos no exigentes. Ejemplos:

• Agar cuenta estándar (cuenta en placa)

• Infusión cerebro y corazón (BHI)
• Agar Soya Tripticaseína (TSA)
• Agar nutritivo (AN)
• Agar sangre (AS)
 Uso. Medios de enriquecimiento
Contiene componentes y condiciones que permiten el
desarrollo de un tipo microbiano y disminuyen la velocidad de
crecimiento de la flora acompañante. Ejemplos:

• Caldo tetrationato • Agua peptonada pH 9 • Caldo selenito

Pre-enriquecimiento Detección de Detección de
para Salmonella V. cholerae Salmonella,
Enterobacter sakazakii y
Yersinia enterocolitica
Uso. Medios selectivos
Contienen componentes que permiten el desarrollo de un tipo
microbiano e inhiben el crecimiento de los demás
microorganismos. Ejemplos:

• Agar cetrimida (Pseudomonas)

• Caldo bilis verde brillante (coliformes totales)
• Agar Bacillus cereus
• Agar Sabouraud cicloheximida (hongos patógenos primarios)
 Uso. Medios diferenciales
Contiene componentes que permiten diferenciar las actividades
metabólicas de los microorganismos inoculados. La presencia de
indicadores o el uso de reveladores después de la incubación
ponen de manifiesto la actividad. Ejemplos:

• Agar DNAsa
• Agar almidón
• Agar cromogénico para Candida
 Uso. Medios diferenciales y
Selectivos
• Agar sal y manitol (MSA) (estafilococos)
• Agar eosina azul de metileno (EMB)
(bacterias entéricas Gram negativas)
• Agar XLD (Xilosa, Lisina, Desoxicolato)
Shigella
• Agar Endo (coliformes)
• Agar Mc Conkey (Bacterias Gram negativas)
 Uso. Medios de conservación

Algunos medios de cultivo son empleados para

la conservación temporal de microorganismos,
como son:
• Medio sólido en caja a 4ºC (hasta 1 semana).
• Medio de agar inclinado 4ºC (hasta 2
semanas) con sello de glicerol estéril a 4ºC
(varios meses dependiendo del
microorganismo).
• Medio fluido de tioglicolato con carne molida
con sello de aceite mineral estéril a
temperatura ambiente (varios meses
dependiendo del microorganismo).
En la liofilización también se emplea la leche
descremada (años).
Uso. Medios de transporte
Son medios que se emplean para el transporte de muestras sin
alterar la viabilidad y la proporción de microorganismos. Tienen
consistencia semisólida, con amortiguador de pH y reducidos
en nutrientes para preservar la proliferación de microorganismos
por varias horas.
Las muestras se recolectan con asas o con hisopos de alginatos
que no inhiben a los microorganismos.

• Medio Amies
• Medio de Stuart
Uso. Pruebas Bioquímicas
Son medios de cultivo que tienen los nutrientes para poner
en evidencia la actividad metabólica de un
microorganismo puro. Pueden emplear reveladores y/o
indicadores.