IBT 411

Ingeniería de Bioprocesos

MEDIUM DESIGN, YIELDS, PRODUCTIVITY

Dr. Rodrigo Andler

randler@ucm.cl
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CaHbOc + mNH3 + nO2 qCdHeOfNg + rCO2 + tH2O

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Cell composition

Organic
23%

Inorganic
2%

Water
75%
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Organic (23%)

Small organic
compounds
Polymers
Carbohydrates
Lipids - Reaction
- DNA intermediates
- Cell Wall
- Membrane - RNA - Cofactors
- Storage
- Proteins - Regulatory
factors
- Vitamins
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Inorganic (2%)

Sulphur Phosphorus Potassium Magnesium Calcium Trace metals

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Elemental composition of dry mass

~ 90%
• 1-Cmole of dry mass (4 elements)
C1H1.8O0.5N0.2

• 1-Cmole of dry mass, extended with macro elements (8 elements)

C1H1.8O0.5N0.2P0.03S0.02K0.008Mg0.01

• Anabolic reaction to produce 1 mol biomass:

0.175 C6H12O6 + 0.20 NH4+ → 1 C1H1.80O0.50N0.20 + 0.05 CO2 + 0.45 H2O + 0.2 H+
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Anabolism
0.175 glucose
1 mol biomass
(C-source)

Energy (ATP)
Glucose CO2
(Electron donor) (Oxidized electron donor)

O2 H2O
(Electron acceptor) (Reduced electron acceptor)
Catabolism
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Donor/Acceptor Oxidized Donor/reduced Acceptor

Glucose + 6 O2 6 CO2 + 6 H2O

3 O2 + Ethanol 3 CO2 + H2O

Fe2+ + ¼ O2 + H+ Fe 3+ + ½ H2O

H2S + ½ O2 S0 + H2O

H2S + 2 O2 SO42- + 2 H+

Glucose 2 Ethanol + 2 CO2

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% w/w
Elemento
Bacterias Levaduras

Carbono 46-53 46-51

Hidrógeno 6.5-7.5 6-8 % w/w

Componente
Oxígeno 18-32 28-35 Bacterias Levaduras

Nitrógeno 10-14 6-10 Proteína 50-60 35-45

Magnesio 0.1-0.5 0.1-0.5 Carbohidrato 6-15 30-35

Fósforo 2.0-3.0 0.8-2.6 Lipido 5-10 5-10

Azufre 0.1-1.0 0.01-0.24 Ácido nucleico 15-25 5-10

Calcio 0.01-1.1 0.1-0.3

Fuente: Scrag A.
Potasio 1.0-4.5 1.0-4.0 Biotecnología para Ingenieros
Hierro 0.02-0.2 0.01-0.5

Fuente: Acevedo et al. 2002.

Fundamentos de Ingeniería Bioquímica
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Grupos principales Ejemplos

Principales fuentes de Monosacáridos Glucosa
carbono utilizados en los Xilosa
medios Disacáridos Sucrosa
Lactosa
Maltosa
Polisacáridos Almidón
Dextrina
Inulina
Celulosa
Alcoholes Metanol
Etanol
Polialcoholes (glicerol)
Ácidos Ácido acético
Ácido succínico
Grasas Ácidos grasos
Aceites
Hidrocarburos Metano
n-pentano
n-butano
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✓ Medios complejos: - Melazas, vinazas

- Licor de maceración de maíz, licor de sulfito
- Suero de leche y permeado
- Harinas de soya y pescado
- Concentrados proteicos
- Hidrolizados de proteínas (triptona)
- Extracto de levadura

✓ Medio definidos: - Medio mineral M9

- Medio mineral de sales (MSM)

✓ Otras clasificaciones: • Medio de enriquecimiento • Medio mínimo

• Medio selectivo • Medio diferencial
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Nutrición microbiana

Macronutrientes: Carbono Micronutrientes: Cromo

Nitrógeno (Elementos traza) Cobalto
Fósforo Cobre
Azufre Manganeso
Potasio Molibdeno
Magnesio Niquel
Calcio Selenio
Sodio Tungsteno
Vanadio
Zinc
Hierro
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Rendimiento

ΔX (Xf − Xi )
YXΤS = Si = Sf +
−ΔS YXΤS

𝑋𝑓 − 𝑋𝑖
YXΤS = dX dS
−(𝑆𝑓 − 𝑆𝑖 ) = −YXΤS
dt dt

𝑋𝑓 − 𝑋𝑖
YXΤS =
𝑆𝑖 − 𝑆𝑓
dS μX
− =
dt YX/S
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Balance de mata de fuente de carbono y energía

∆ST = ∆SC + ∆SM + ∆SP

dS dS dS dS
= + +
dt T
dt C
dt M
dt P

c: crecimiento
m: mantención de viabilidad celular
p: producción metabolitos extracelulares
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En ausencia de metabolitos extracelulares:

μX μX
= + mx
YXΤS Y0XΤS

Linealizando…

1 1 1 m: coeficiente de mantención
= 0 +m
YXΤS YXΤS μ
𝐘𝐗𝟎Τ𝐒 : rendimiento máximo, biomasa
obtenida por unidad de sustrato
consumido destinado exclusivamente a
crecimiento
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Rendimiento teórico

% elemento en nutriente
YXΤS =
% elemento en biomasa

Rendimiento teórico carbono

% elemento en nutriente
YXΤS = ∙f
% elemento en biomasa

f = 0.5-0.6 metabolismo aerobio

f = 0.1 metabolismo anaerobio
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Aplicación Rango (g/L)

Investigación en matraces 0.5-2.0
Investigación en fermentadores 1-8
Producción, rango usual 10-25
Producción, rango alto 30-50
Control computarizado, recirculación de células 100-250
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Ejemplo 1

Se desea cultivar una cepa por lote para que crezca hasta 7 g/l a partir de un inóculo de 200 ml (5 g/l). El volumen del fermentador es de 7
litros. La composición del microorganismo es: N=8.5%, Mg=0.8%, P=1.5%, S=0.5% y C=53%. El cultivo se desarrolla de forma aerobia y como
fuente de C se utilizará glucosa (limitante). Para entregar los otros nutrientes se tienen los siguientes compuestos: (NH4)2SO4, MgSO4 y
K2HPO4. Diseñe el medio de cultivo.
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Modelos cinéticos

• Modelos no estructurados
- Modelos no estructurados de crecimiento
- Modelos de consumo de sustrato y formación de productos

• Modelos metabólicos
• Modelos de célula
• Modelos químicamente estructurados
• Modelos segregados
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Modelos cinéticos

• Modelos no estructurados
- Modelos no estructurados de crecimiento

Ecuación de Malthus

dCX
= μ ∙ CX
dt
Planteada para describir el crecimiento “balanceado”. La composición celular media no se ve afectada por la proliferación de la
población. Incapaz de predecir concentración de biomasa en fase estacionaria. No se puede emplear en sistemas discontinuos
cuando además de crecimiento celular, existe consumo de sustrato y formación de producto.

Ecuación logística

dCX CX
= μ ∙ CX ∙ 1 −
dt CXm

Permite proporcionar curva en las distintas fases, latencia, crecimiento exponencial y estacionaria.
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Blackman (1905)

μ CS = μ m ∴ C S > μ m ∙ B

CS
μ CS = ∴ CS ≤ μ m ∙ B
B

Este modelo plantea que hasta que la concentración de sustrato no haya llegado a un cierto valor, esta no influye en el
crecimiento y se puede aplicar la ley de Malthus.

M’Kendrick y Pai (1910)

dCX
= μ ∙ C S ∙ CX
dt

dCS 1 dCX
=− ∙
dt YX/S dt

Se propone por primera vez una relación estequiométrica entre la velocidad de consumo del sustrato y la de producción de
biomasa. Elimina la primera parte de la ecuación de Blackman
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Tiesser (1942)

dCX CS
= μm 1 − exp − ∙ CX
dt K

Monod (1949) Constante de semisaturación

dCX 𝜇𝑚 ∙ 𝐶𝑆
= ∙𝐶
dt 𝐾𝑆 + 𝐶𝑆 𝑋

Similar a ecuación propuesta por Michaelis-Menten para las reacciones enzimáticas

𝑑𝐶𝑋
𝐾𝑆 <<< 𝐶𝑆 ∴ = 𝜇𝑚 ∙ 𝐶𝑋
𝑑𝑡

𝑑𝐶𝑋 𝜇𝑚
𝐾𝑆 >>> 𝐶𝑆 ∴ = ∙𝐶 ∙𝐶
𝑑𝑡 𝐾𝑆 𝑋 𝑆
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Ecuación de Monod

µmax
𝑆
𝜇 = 𝜇𝑚𝑎𝑥
𝐾𝑆 + 𝑆

½ µmax
µmax: velocidad específica de crecimiento máxima
S: Concentración sustrato limitante
KS: Constante de semisaturación

KS S (g/L)
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Cinética de producción

𝑑𝑃 Productividad volumétrica
𝑄𝑃 =
𝑑𝑡

1 𝑑𝑃 Productividad específica
𝑞𝑃 =
𝑋 𝑑𝑡

∆𝑃
𝑌𝑃Τ𝑆 = Rendimiento
−∆𝑆

𝑑𝑆 𝑞𝑃 𝑋
Entonces… =
𝑑𝑡 𝑌𝑃/𝑆
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Cinética de producción

• Ecuación de Luedecking y Piret (1959)

𝑑𝑃 𝑑𝑋
𝑄𝑃 = =𝛼 + 𝛽𝑥
𝑑𝑡 𝑑𝑡

Metabolito asociado al crecimiento α→α

β=0

Metabolito no asociado al crecimiento α=0

β→β
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Clasificación cinética de la producción

I Metabolitos asociados al crecimiento

II Mixto

III Metabolitos no asociados al crecimiento

Fuente: Gaden (1959)

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… volviendo al balance de consumo de sutrato…

∆𝑆𝑇 = ∆𝑆𝐶 + ∆𝑆𝑀 + ∆𝑆𝑃

𝑑𝑆 𝑑𝑆 𝑑𝑆 𝑑𝑆
= + +
𝑑𝑡 𝑇
𝑑𝑡 𝐶
𝑑𝑡 𝑀
𝑑𝑡 𝑃

𝜇𝑋 𝜇𝑋 𝑞𝑃 𝑋
= 0 + 𝑚X + 0
𝑌𝑋Τ𝑆 𝑌𝑋Τ𝑆 𝑌𝑃Τ𝑆

Linealizando…
1 1 1 𝑞𝑃
= + 𝑚+ 0
𝑌𝑋Τ𝑆 𝑌𝑋0Τ𝑆 𝜇 𝑌𝑃Τ𝑆
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Efecto de la concentración de sustrato en la velocidad específica de crecimiento

𝑆
𝜇 = 𝜇𝑚
𝐾𝑆 + 𝑆

1 𝐾𝑆 1 1
= +
𝜇 𝜇𝑚 𝑆 𝜇𝑚

1
𝜇

1
𝜇𝑚

−1 1
𝐾𝑆 𝑆
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Efecto de la temperatura

𝑑𝑋
= 𝜇𝑋 − 𝛼𝑋
𝑑𝑡
Desaparición o mortalidad

𝜇 = Å𝑒 −𝐸/𝑅𝑇
Relación de Arrhenius
𝛼 = Å′𝑒 −𝐸/𝑅𝑇

Å y Å’: constantes
E: energía de activación
R: cte de los gases (1.98 cal mol K-1)
T: temperatura absoluta (K)
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Efecto del pH

Bacterias 4.0-8.0 Lactobacillus acidophilus ~4.0

Levaduras 3.0-6.0 Acidithiobacillus ferrooxidans 1.5-2.5
Mohos 3.0-7.0 Picrophilus (Archea) 0.7
Células eucarióticas 6.5-7.5

Inhibición por producto Inhibición por sustrato

𝑆 𝑆
𝜇 = 𝜇𝑚 𝜇 = 𝜇𝑚
𝑃 𝑃
𝐾𝑆 + 𝑆 1+ kP: constante de inhibición 𝐾𝑆 + 𝑆 1+ ki: constante de inhibición
𝑘𝑃 𝑘𝑖

Formación de productos tóxicos que inhiben crecimiento

Ejemplo: Producción de etanol sobre 1-2% (12%: inhibición total)
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Ejemplo 2

Un microorganismo creciendo en un cultivo por lote produce un metabolito extracelular de acuerdo a qP=0.64µ. El
microorganismo crece a una velocidad específica de 0.35 h-1, sus respectivos rendimientos máximos de sustrato en biomasa y
producto son 0.51 y 0.65 g/g respectivamente y m=0.09 g/gh. Las concentraciones de biomasa inicial y final son 0.4 y 11 g/L
respectivamente e inicialmente la concentración de producto es 0.8 g/L. Calcular la concentración final de producto.