NTC 4519

Método horizontal para el recuento de microorganismos. Técnica de

recuento a 30ºC (aerobios mesófilos)

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 AboutObjetivo
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Disponer de la descripción detallada del método para la enumeración de

microorganismos aerobios mesófilos, contando las colonias que crecen en un
medio después de la incubación a 30ºC y utilizando como base la Norma Técnica
Colombiana (NTC) 4519.

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 Alcance

Muestras de alimentos
para consumo humano

Este análisis aplica

para
Muestras de alimentos
para consumo animal

3
Procedimiento

4
 Equipos, reactivos y materiales

Materiales
Equipos Medios de cultivo y reactivos

Pipetas de 1 mL
Incubadora a 30±1ºC Agua peptonada estéril 0.1%
Autoclave Agar para recuento en placa Pipetas de 10 mL
Baño de agua (PCA)
Pipetas de 20 mL
Balanza
pH-metro Tubos tapa rosca de 15 x 150 mm
Vórtex
Espátula

Gradilla

Mechero

Cajas de Petri estériles

Frasco tapa schott con capacidad

5 apropiada
 Agar About
para Recuento en Placa
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Agar para el recuento de microorganismos aerobios mesófilos

Tabla 1. Composición del agar PCA

Componente Cantidad (g/L)

Caseína peptona 5

Extracto de levadura 2,5

Dextrosa 1

Agar 15

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Preparación de la suspensión inicial (productos sólidos)

Diluir en 90 mL de agua
Pesar 10 gramos
peptonada estéril al 0,1%

Suspensión en relación 1:10

(10-1)

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 Inoculación e incubación
Productos sólidos Productos líquidos

1 mL 1 mL

10-1 10-2 Directo

10-1
1 mL 1 mL 1 mL 1 mL

10-1 10-1 10-2 10-2

PCA PCA PCA PCA PCA PCA PCA PCA

Invertir e incubar a 30ºC±1ºC durante 72 horas±3 horas. Invertir e incubar a 30ºC±1ºC durante 72 8
horas±3 horas.

Recuento Recuento

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Cálculo y reporte de resultados

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 Método de cálculo general: recuento de colonias totales

Se deben tener en cuenta sólo las secuencias de dos diluciones sucesivas que presenten entre 30 y 300 colonias.

El número N de microorganismos σ𝐶
presentes en la muestra se calcula 𝑁=
empleando la siguiente ecuación: 𝑉𝑥1,1𝑥𝑑
∑C: Suma de las colonias contadas en
dos cajas provenientes de dos
diluciones, donde una contiene como
mínimo 30 colonias.

V: Volumen del inóculo en mililitros. Consideraciones importantes:

Aproximar el resultado calculado

d: Factor de dilución de la primera hasta dos cifras decimales.
dilución realizada.
Expresar el resultado como un
Reporte: UFC/ g o mL. número entre 1,0 y 9,9 multiplicado
por la potencia de 10.

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 Ejemplo

El recuento ha producido los siguientes resultados:

En la dilución 10-2 se obtuvieron 168 y 68 colonias

En la dilución 10-3 se obtuvieron 99 y 36 colonias

σ𝐶
𝑁=
𝑉𝑥1,1𝑥𝑑

168 + 68 + 99 + 36
𝑁=
1𝑥1,1𝑥10−2

𝑁 = 33 727

𝑁 = 34 000 𝑵 = 𝟑, 𝟒𝒙104
11
𝑼𝑭𝑪/𝒎𝑳
 Método de cálculo: recuentos bajos

Si la placa contiene menos de 10 colonias pero por lo menos 4, se calcula el resultado de la siguiente manera:

El número N de microorganismos σ𝐶
presentes en la muestra se calcula 𝑁=
empleando la siguiente ecuación: 𝑉𝑥1,1𝑥𝑑

∑C: Suma de las colonias contadas en

dos cajas provenientes de dos
diluciones.
Se reporta como el
número estimado (NE)
V: Volumen del inóculo en mililitros. de microorganismos por
g o mL.
d: Factor de dilución de la suspensión
inicial o la primera dilución realizada.

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 Caso en el cual las cajas inoculadas no contienen
crecimiento

Si la caja que contiene la muestra de ensayo (productos líquidos), la suspensión inicial (productos sólidos) o la primera
dilución inoculada no contiene colonias, se reporta el resultado de la siguiente manera:

<1 UFC/mL

<1x1/d UFC/g

d= Factor de dilución de la
suspensión inicial.

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 Bibliografía

NTC 4519: Microbiología de alimentos para consumo humano y animal. Método horizontal para
el recuento de microorganismos. Técnica para el recuento de colonias a 30ºC.

International Food and Drug Administration. (2001). Recuento de placas aeróbicas. En Maturin,
L., Peeler, T. (Ed). Bacteriological Analytical Manual.

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