Población de estudio

 Los participantes se inscribieron a partir de 11 sitios de recolección de muestras

geográficamente distintas, incluyendo OB / prácticas ginecología, planificación familiar y
clínicas de ETS como parte de la vagina, endocervical, y la detección de prueba VENUS
orina para CT / NG.
 18Los hombres se incluyeron si eran 14 años de edad o más y, el consentimiento
dispuesto. El resto de los participantes se clasificaron como asintomáticos

• Los síntomas indicativos de infección por CT o gas natural se suscitó e incluyeron disuria /
dolor al orinar, secreción uretral o testicular / dolor escrotal o hinchazón.

Recogida de muestras, transporte y almacenamiento

• Los participantes fueron asignados números de identificación únicos, y todas las muestras
se recogieron en una visita a la clínica u oficina; cada muestra se identificó con un número
único que incluye el ID de objeto. De cada participante masculino, 2 hisopos uretrales se
recogieron en orden aleatorio para minimizar la variación de la calidad de la muestra
utilizando el Q x o los kits de AC2.

• Hisopos uretrales solamente se utilizaron para definir PIS y no fueron probados en el

cobas 4800.

• La muestra de orina se dividió en 3 alícuotas, con los volúmenes requeridos de ser

colocado en tubo de transporte de la orina de cada ensayo. Todas las muestras fueron
almacenadas y probadas de acuerdo con los prospectos de sus respectivos fabricantes. 9,
No hay muestras se congelaron. La prueba se realizó a los 4 sitios de prueba en los Estados
Unidos

CT cobas / Test GN

• La C4800 utiliza un enfoque de doble objetivo: CT cebadores CP102 y CP103 se utilizan

para definir una secuencia de aproximadamente 206 nucleótidos dentro del plásmido
críptico de ADN de CT.

• Además, los cebadores de CT y CTMP101 CTMP102 definen una secuencia de

aproximadamente 182 nucleótidos dentro del gen que codifica la principal proteína de la
membrana externa A de la CT.

• GN cebadores NG514 y NG519 definir una secuencia de aproximadamente 190

nucleótidos de una región de repetición directa altamente conservada de GN llamado DR-
9.

Determinación del Paciente-Infectado

 • Los participantes fueron designados como infectado con CT o gas natural, si por lo menos
2 NAAT con diferentes regiones diana dieron resultados positivos en el hisopo uretral y / o
la muestra de orina (rotativas PIS).

cobas® 4800 CT/NG Test

La prueba cobas® 4800 CT/NG es una prueba de amplificación in vitro de los ácidos nucleicos para
la detección cualitativa de Chlamydia trachomatis (CT) y/o Neisseria gonorrhoeae (NG) en
muestras de pacientes. La prueba utiliza la amplificación del fragmento de ADN objetivo mediante
la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y la hibridación de ácidos nucleicos para la detección
del ADN de Chlamydia trachomatis y Neisseria gonorrhoeae en muestras endocervicales en
torunda, muestras vaginales en torunda obtenidas por personal médico, muestras vaginales en
torunda recogidas personalmente con ayuda del personal médico y muestras de orina masculinas
y femeninas en medio de recogida cobas® para PCR (Roche Molecular Systems, Inc.) La prueba se
utiliza con fines diagnóstico y como herramienta de detección en poblaciones sintomáticas y
asintomáticas.

Transfiera inmediatamente la orina al tubo de medio cobas® para PCR utilizando la pipeta

Desechable suministrada.

MEZCLAR: Invierta el tubo 5 veces para mezclar el contenido. La muestra ya está lista para su
transporte.

5.

Tubo de medio cobas® para PCR: Transporte y almacenamiento

• Las muestras de orina recogidas en los medios cobas® para PCR permanecen estables 1 año a
una temperatura

entre 2 °C y 30 °C.

Se dice, en este sentido, que una enfermedad es asintomática cuando sólo se advierte a partir de
un estudio, sin que la persona sienta nada extraño en su cuerpo.
Un Id. de objeto es un campo único de enteros no nulos que se utiliza para identificar de forma
única las filas en las tablas de una geodatabase.

MÉTODOS

Población de estudio

Los participantes se inscribieron a partir de 11 sitios de recolección de muestras geográficamente

distintas, incluyendo OB / prácticas ginecología, planificación familiar y clínicas de ETS (véase
Agradecimientos para el listado completo), como parte de la vagina, endocervical, y la detección
de prueba VENUS orina para CT / NG. 18Los hombres se incluyeron si eran 14 años de edad o más
y, el consentimiento dispuesto y capaz de proporcionar informado por escrito (consentimiento
informado del padre o tutor para los menores de edad). Fueron excluidos si se hubieran inscrito
previamente en el estudio o el programa usado antimicrobianos activos contra el CT o gas natural
durante los 21 días anteriores participantes. Los síntomas indicativos de infección por CT o gas
natural se suscitó e incluyeron disuria / dolor al orinar, secreción uretral o testicular / dolor
escrotal o hinchazón. El resto de los participantes se clasificaron como asintomáticos. Aprobación
de la Junta de Revisión Institucional para el protocolo del estudio se obtuvo de cada sitio
participante. La C4800 no se utilizó en el diagnóstico o tratamiento de los participantes.

Recogida de muestras, transporte y almacenamiento

Los participantes fueron asignados números de identificación únicos, y todas las muestras se
recogieron en una visita a la clínica u oficina; cada muestra se identificó con un número único que
incluye el ID de objeto. De cada participante masculino, 2 hisopos uretrales se recogieron en orden
aleatorio para minimizar la variación de la calidad de la muestra utilizando el Q x o los kits de AC2.
Hisopos uretrales solamente se utilizaron para definir PIS y no fueron probados en el cobas 4800.
Recopilación de una muestra de orina de primera retención seguido colección de hisopos uretrales
acuerdo con las instrucciones del prospecto del fabricante. La muestra de orina se dividió en 3
alícuotas, con los volúmenes requeridos de ser colocado en tubo de transporte de la orina de cada
ensayo. Todas las muestras fueron almacenadas y probadas de acuerdo con los prospectos de sus
respectivos fabricantes. 9, No hay muestras se congelaron. La prueba se realizó a los 4 sitios de
prueba en los Estados Unidos (LabCorp, Burlington, Carolina del Norte; Enfermedades Infecciosas
Laboratorio, EN University School of Medicine, Indianapolis, IN; DCL Medical Laboratories,
Indianapolis, IN; y Enfermedades Infecciosas de laboratorio, LSU Health Sciences Center, Nueva
Orleans, LA).

CT cobas / Test GN

La C4800 utiliza un enfoque de doble objetivo: CT cebadores CP102 y CP103 se utilizan para definir
una secuencia de aproximadamente 206 nucleótidos dentro del plásmido críptico de ADN de CT
(plásmido críptico es la de un gen de copia múltiple con una función desconocida y un mínimo de
10- 20 copias por organismo). Además, los cebadores de CT y CTMP101 CTMP102 definen una
secuencia de aproximadamente 182 nucleótidos dentro del gen que codifica la principal proteína
de la membrana externa A de la CT. La región diana para la detección de CT fue diseñado para
permitir la detección de la nueva variante sueca.

GN cebadores NG514 y NG519 definir una secuencia de aproximadamente 190 nucleótidos de una
región de repetición directa altamente conservada de GN llamado DR-9. Además, otro conjunto de
cebadores Ng, NG552 y NG579, define una segunda secuencia de aproximadamente 215
nucleótidos identificados como una variante de secuencia conservada de esta región. Hay 3 copias
por genoma en función de si la cepa es DR-9 homogénea, DR-9Var o heterogéneo del DR-9 / DR-
9Var; la función es desconocida. Muestras procesadas se añaden a la mezcla de amplificación en
una placa de múltiples pocillos en la que la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) de
amplificación se produce totalmente automatizado.

El control interno CT / NG (IC) es una combinación de 2 no infecciosas ADN plasmídicos

recombinantes, cada uno con regiones de unión de cebador idénticas a las de cualquiera de los CT
o NG las secuencias diana genómico. Ambos ADN de los plásmidos recombinantes tienen una
secuencia diana interno aleatorio idénticas, y una región de unión a sonda única que diferencia el
CT / NG IC del amplicón diana para asegurar la amplificación independiente tanto de la CT / NG IC
y los ADN diana de CT y NG. El reactivo CT / NG IC está incluido en el C4800 y se introduce en cada
muestra en el instrumento durante el procesamiento de la muestra. Amplificación selectiva de
ácido nucleico diana de la muestra se logra en el C4800 mediante el uso de AmpErase (uracilo-N-
glicosilasa) y el trifosfato de desoxiuridina enzima. La C4800 utiliza la tecnología de PCR en tiempo
real. El uso de sondas fluorescentes para la detección ofrece en tiempo real de acumulación de
producto de PCR mediante el control de la intensidad de emisión de los tintes fluorescentes
liberados durante el proceso de amplificación. La amplificación de los objetivos, metas CT NG, y el
CT / NG IC se mide de forma independiente y en diferentes longitudes de onda. Este proceso se
repite para un número designado de ciclos, cada ciclo de aumento de la intensidad de emisión de
los colorantes indicadores individuales.