UNAM

Campus Universitario Siglo XXI

Laboratorio Clínico
Pruebas microbiológicas

MCQ. ARIANA NIETO HERNÁNDEZ

Estudio Microbiológico

´ El estudio microbiológico de muestras de tejidos y líquidos corporales

permite establecer el diagnóstico etiológico de diferentes enfermedades
infecciosas.
´ La confiabilidad de los resultados del estudio microbiológico dependen de
la calidad de la muestra.
Conceptos

´ Sustancias infecciosas. Sustancia que contiene un microorganismo viable, como una bacteria,
un virus, un parásito, un hongo o un prión que causa enfermedad en humanos o animales.
´ Estéril: objeto o sustancia que está libre de microorganismos y que es incapaz de producir
cualquier forma de vida.
´ Especímenes diagnósticos. Cualquier material humano o animal, incluyendo, pero no limitado a,
excretas, sangre o sus componentes, tejidos y fluidos tisulares, recolectados con el propósito de
hacer un diagnóstico o estudio
´ Asepsia. Ausencia de microorganismos que pueden causar enfermedad infecciosa.
´ Antisepsia. Mecanismo o proceso para inhibir o reducir el número de microorganismos de la piel
o tejidos vivos. La técnica aséptica incluye el uso de principios de asepsia, elementos de barrera
y equipo estéril.
´ Antiséptico. Sustancia química utilizada para realizar antisepsia:
• Clorhexidina 2 – 4%.
• Yodados: jabón al 7%; solución 10%.
• Alcohol al 70%.
Requisitos de una buena muestra

´ Representativa del sitio de la infección

´ En cantidad suficiente, y tomada en el momento adecuado( idealmente
antes del uso de antibióticos)
´ Tomada con técnica aséptica.
´ En contenedor adecuado y estéril.
´ Transporte óptimo al laboratorio. (tiempo, Temperatura, medios de
transporte adecuados)
´ Correctamente identificada, nombre completo, fecha de obtención de
muestra
´ Solicitud de examen completa, nombre con 2 apellidos, cuenta corriente,
tipo de muestra, diagnostico específico
 Precauciones

´ Lentes de seguridad o mascarilla

con visera.
´ Guantes.
´ Cubrebocas.
´ Bata.
´ Contenedores para
especímenes, a prueba de fugas
y de fácil sellamiento.
 Urocultivo
´ El urocultivo se realiza para detectar y contar especies
microbianas (bacterias y levaduras) que sean agentes causales
de infecciones de vías urinarias.
´ Cuidados y recomendaciones
´ Realizar higiene de genitales
´ Técnica de recolección
´ Chorro medio
´ Equipo
´ Frasco recolector estéril de boca ancha de tapa rosca.
´ Transporte
´ Se recomienda en los primeros 15 minutos de la
recolección, no exceder de dos horas y a temperatura
ambiente.
 Orina obtenida a través de sonda

´ Cuidados y recomendaciones
´ Realizar higiene de genitales
´ Técnica de recolección
´ Eliminar primer porción de orina y colectar la
siguiente en frasco estéril. En caso de ser permanente
se desinfecta .
´ Equipo
´ Frasco recolector estéril de boca ancha de tapa
rosca. Sonda Nelaton/ Foley. Guantes estériles
´ Transporte
´ Se recomienda en los primeros 15 minutos de la
recolección, no exceder de dos horas y a
temperatura ambiente.
 Hemocultivo

´ El hemocultivo es un método diagnóstico que se realiza para la

detección de microorganismos en la sangre y así, posteriormente,
realizar la identificación y susceptibilidad antimicrobiana.
´ Cuidados y recomendaciones
´ Mantener técnica aséptica
´ Técnica de recolección
´ Para la detección de microorganismos en sangre en
sospecha de bacteriemia se recomienda recolectar entre 20
y 40 ml de sangre (2 a 4 botellas de hemocultivos)
´ En niños: Prematuros extremos 0,5 ml. •Neonatos hasta 1 ml. •
Lactantes y niños hasta 6 años 2-3 ml. • Mayores de 6 años 5-
10 ml.
´ Equipo
´ Equipo de asepsia, frascos de hemocultivo, jeringas estériles.
Guantes estériles,
´ Transporte
´ Se recomienda en los primeros 15 minutos de la recolección
a temperatura ambiente
 Punta catéter

´ Cuidados y recomendaciones
´ Mantener técnica aséptica
´ Técnica de recolección
´ Prepare la piel del área circundante del sitio de inserción
del catéter.
´ Retire el catéter y corte de 4 a 5 c.m del trayecto distal
del catéter con pinza estéril, y colóquelo
inmediatamente en el tubo estéril.
´ Para secreción usar escobillones estériles tome una
muestra de la secreción y coloque en tubo estéril con
tapa; y con el otro escobillón realice un extendido en
lámina de vidrio.
´ Equipo
´ Equipo de asepsia, jeringas estériles, guantes estériles,
medio de transporte
´ Se recomienda en los primeros 15 minutos de la
recolección a temperatura ambiente
Muestras respiratorias

´ Expectoración
´ Paciente con tos productiva
´ Sin saliva
´ Se toma en recipiente de boca ancha

§ Aspirado endotraqueal
Condiciones asépticas
Examen
copropasitoscopico/Coprocultivo
´ Examen Coproparasitoscópico
´ Búsqueda de quistes huevos y larvas de parásitos

´ Cultivo
´ Bacterias enteropatógenas
 Medios de Transporte

´ Almacenamiento temporal de los

especímenes que se transportan al
laboratorio para su cultivo.
´ Mantienen la viabilidad de todos los
organismos presentes en la muestra sin
alterar su concentración.
´ Sólo contienen buffers y la sales carecen
de carbono, nitrógeno, y factores de
crecimiento orgánico con el fin de evitar la
multiplicación microbiana.
´ Medios de transporte utilizados en el
aislamiento de anaerobios deben estar libres
de oxígeno .
´ Ej Medio Stuart
 Medios de cultivo

´ Medios de Transporte
´ Medios Generales: no selectivos
´ Medios de Enriquecimiento
´ Medios Diferenciales
´ Medios para Pruebas de Sensibilidad
´ Medios para Preservación
Diagnóstico diferencial (tinción)

´ Tinción
´ Gram
´ Baciloscopia (Tinción de Ziehl-Neelsen).
Pruebas bioquímicas
Antibiograma

´ Son pruebas microbiológicas que se realizan para determinar la

sensibilidad de una colonia bacteriana a un antibiótico.
´ Permite definir para cada antibiótico si la bacteria es sensible (eficaz),
intermedio, resistente (ineficaz)
 Espectrometría de masas

´ La identificación bacteriana basada en la

espectrometría de masas, específicamente en el
MALDI-TOF MS.
´ Se ha sido utilizada como un método rápido para
la identificación de rutina de microorganismos
patógenos mediante el perfil de proteínas.
´ La espectrometría de masas es un método que
permite la identificación de una molécula
mediante la medición de su masa en relación a
su carga (relación masa/carga).
´ Este espectrómetro tiene la capacidad de medir
macromoléculas de hasta 100.000 Dalton, dentro
de las cuales están los péptidos y proteínas que
forman parte de hongos y bacterias.
 Pruebas moleculares/ Inmunológicas

PCR, qPCR, FISH, Southern

blot, clonación, DNA
secuenciación, etc.

RT-PCR, RT-qPCR, Northern blot,

RNA
Miccroarreglos, SAGE (serial
analysis of gene expression),
RNAseq, etc.

Western Blot, ELISA,

electroforesis,
Proteínas
Inmunoflourescencia,
Espectrometría de masas, etc.
 PCR

La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica de

laboratorio utilizada para amplificar secuencias de ADN. El método utiliza
secuencias cortas de ADN llamados cebadores para seleccionar la parte
del genoma a amplificar.

La temperatura de la muestra se sube y se baja repetidamente para

ayudar a la enzima de replicación del ADN a duplicar la secuencia del
ADN que está siendo copiada. Con esta técnica se pueden producir un
billón de copias de la secuencia en estudio en sólo unas pocas horas.
PCR

95ºC

55ºC

72ºC
Electroforesis de ácidos nucleicos

• Mediante la electroforesis podemos separar fragmentos de ADN y ARN en

función de su tamaño, visualizarlos mediante una sencilla tinción, y de esta
forma determinar el contenido de ácidos nucleicos de una muestra, teniendo
una estimación de su concentración y grado de entereza.
 RT-PCR
Reverse Transcriptase.

Se sintetiza una cadena de DNA

cDNA) a partir de una de RNA
molde.

Expresión de genes (mRNA).

Genomas virales RNA (HIV, Flu,

COVID).
Aplicaciones

´ Clasificar organismos
´ Genotipificación
´ Arqueología molecular
´ Detección de mutaciones
´ Secuenciación
´ Detección de patógenos
´ Huella genética
´ Ingeniería genética
´ Diagnóstico prenatal
´ Expresión heteróloga.
 Caso clínico

´ Se trata de un varón de 37 años, sin peso en este periodo.

enfermedades previas conocidas ni
´ En la anamnesis por aparatos el
tratamientos habituales, valorado en
paciente no refiere sensación
consulta por cuadro de 10 meses de
distérmica ni fiebre ni otras
evolución de alteraciones en el hábito
manifestaciones a nivel sistémico. La
intestinal; refiere episodios periódicos
exploración física era normal.
mensuales de unos 10-15 días de
duración de deposiciones líquidas,
marronáceas, abundantes, sin
productos patológicos, precedidas de
dolor abdominal tipo cólico, con
urgencia y tenesmo, y una pérdida
ponderal cuantificada de 12 kg de
´ Se realizó estudio analítico con hemograma completo (incluida fórmula
leucocitaria), bioquímica renal y hepática, parámetros nutricionales,
función tiroidea, serología de enfermedad celiaca y proteinograma que
resultaron dentro de la normalidad.
´ En el coprocultivo se informó crecimiento de Salmonella typhimurium, sin
evidencia de otros gérmenes enteropatógenos, ni tampoco parásitos ni
toxina de C. difficile. Se completó estudio con gastro y colonoscopia con
toma de biopsias sin alteraciones de significación patológica en el estudio
macro ni microscópico.
´ El paciente siguió tratamiento con levofloxacino durante 7 días con
remisión de la sintomatología y recuperación ponderal progresiva en las
revisiones posteriores.
´ 1. Mencione que otras bacterias pueden causar infecciones
gastrointestinales
´ 2. Además del coprocultivo que otras estudios de laboratorio pueden
realizarse para establecer el diagnóstico
´ 3. Medios de cultivo utilizados para realizar el coprocultivo
´ 4. Prueba inmunológica con la que puede identificarse el antígeno de
Salmonella tiphy.