Universidad de Guayaquil

Facultad de Ciencias Químicas

Carrera: Química y Farmacia
Guía de Prácticas de Laboratorio
10 BACTERIAS GRAM POSITIVAS.- IDENTIFICACIÓN DE
Staphylococcus PATÓGENOS

Objetivos de la práctica de laboratorio

1. Diferenciar el tipo de Cocácea Gram positiva correspondiente mediante la prueba de catalasa.
2. Identifica los Staphylococcus patógenos mediante la prueba de la coagulasa
3. Identifica los Stapyilococcus coagulasa negativa mediante la prueba de la novobiocina
.

Marco Teórico
De acuerdo al Manual de Bergey, las cocaceas positivas de importancia clínica para los seres humanos
comprenden los géneros Streptococcus y Staphylococcus.
Su morfología es muy parecida, pero existen pruebas para diferenciar los dos géneros y cada una de sus
especies

Género Staphylococcus
Dentro de este grupo destacan algunas especies de importancia clínica como son:
 Staphylococcus aureus
 Staphylococcus epidermidis
 Staphylococcus sapropyticus
 Staphylococcus hominis

En general, este género se caracteriza por desarrollar colonias relativamente grandes, redondas, lisas y
brillantes. Al microscopio y mediante la tinción de Gram, los Staphylococcus se ven como cocáceas Gram
positivas, redondas, de un mismo tamaño, aisladas, o agrupadas en racimos o en cadenas cortas.

Poseen una pigmentación blanca, amarilla o dorada según la especie. Al cultivar estas bacterias en agar
sangre (incubada 18-24 h a 37oC) aparecen como colonias redondas, blancas o amarillas, con o sin
hemólisis por la presencia de enzimas especiales para este fin. Tienen la característica de crecer en medios
con elevada concentración de sal o cloruro de sodio, lo que les brinda una característica diferencial
importante.
El S. aureus es un microorganismo patógeno capaz de producir una gran variedad de síndromes clínicos.
Poseen enzimas que hidrolizan un amplio espectro de sustratos y producen diversas toxinas: Hemolisinas,
exfoliativas y enterotoxinas. La presencia de cepas toxigénicas en aguas envasadas y de recreo puede ser
causa de infecciones.
Otras características que permiten su identificación son la producción de Catalasa, coagulasa y
susceptibilidad a la Novobiocina.
Pruebas de identificación

Catalasa
Es una característica de todas las especies de Staphylococcus. La catalasa es una enzima que desarrollan
como mecanismo de defensa que les permite neutralizar los productos tóxicos derivados del metabolismo
del oxígeno. Los Streptococcus no poseen catalasa, por lo que esta prueba es muy importante a la hora de
diferenciar ambos grupos.
Coagulasa
Esta prueba es útil para identificar una especie de Staphylococcus en especial, el Staphylococcus aureus.
La síntesis de esta enzima permite la coagulación del plasma y una prueba positiva identifica con certeza a
la especie mencionada.

Susceptibilidad a la noboviocina
Esta prueba diferencia el Staphylococcus saprophyticus de otras especies coagulasa negativo. Se pone en
contacto las bacterias con el antibiótico, lo que permite evaluar si hay o no desarrollo bacteriano. La prueba
positiva indica que existe resistencia a la novobiocina, porque aún cuando el antibiótico está presente,
existe crecimiento.
PRUEBA S. aureus S.epidermidis S.saprophyticus S.hominis
Hemólisis + -/+ - -/+
Catalasa + + + +
Coagulasa + - - -
Novobiocina - + (Sensible) - (Resistente) -

MATERIALES MEDIOS DE REACTIVOS EQUIPOS

CULTIVO/CEPAS
Algodón Cepa Plasma Mechero
Staphylococcus
Fósforos Agar Manitol Sal Agua Oxigenada al 3% Incubadora
Asa de inoculación Caldo Nutritivo Discos de Novobiocina Refrigeradora
Pinzas Caldo Soya Discos de Antibioticos
tripticasa
Lápiz graso Agar Mueller Hinton Kit de Gram
Placas portaobjeto
Gasa
Gradilla
Elaborado: QF..Mariana Rendón M. MSc.

PROTOCOLO DE PROCESAMIENTO

1. Diferenciación de Cocaceas Gram Positivas

Frotis Técnica de Gram

Seguir el procedimiento de la Práctica de Tinción de Gram

COCACEAS GRAM POSITIVAS

2. Diferencia entre de Staphylococcus y Streptococcus

Prueba de la catalasa

1. Tome una colonia de la placa de cultivo con un asa.

2. Peróxido de hidrógeno al 3%
3. Si se producen burbujas la reacción es positiva.
4. Prueba positiva indica que es un Staphylococcus
5. Prueba negativa es un Streptococcus
 Prueba de catalasa

3. Identificación de Staphylococcus patógeno

Prueba de la coagulasa
1. Tome una colonia de la placa de cultivo con un asa.
2. Sumerja el asa en un tubo con aproximadamente 1 ml de plasma.
3. Incube a 37º C en estufa de cultivo y observe periódicamente hasta 4 horas de incubación.
4. La formación de un coágulo en el fondo del tubo indica una prueba coagulasa positiva.
5. Si el plasma sigue liquido indica una prueba coagulasa negativa

PRUEBA DE COAGULASA

4. Diferenciación de Staphylococcus coagulasa negativos

Prueba de la Novobiocina (30 ug)

1. Realice una siembra de la colonia en estudio en un agar sangre.

2. En medio de la siembra coloque un disco de novobiocina.
3. Incube por 24 horas aproximadamente a 37º C.
4. Transcurrido el tiempo de incubación observe si existe un halo alrededor del disco para ver si hay o no
crecimiento bacteriano.
5. Si no existe crecimiento de las bacterias alrededor del disco, mida con una regla el diámetro del halo o
circulo que se observa alrededor de la novobiocina.
6. La prueba es negativa cuando existe crecimiento alrededor del disco y se dice que es resistente.
7. La prueba es positiva cuando se observa un halo de inhibición alrededor del disco de más de 21 mm y
 se dice que es sensible.

Resultados obtenidos

.
Conclusiones
1-
2-
3-

Recomendaciones
1-
2-
3-

Bibliografía
1- Granados R., Microbiología, Ed. Paraninfo 1999