UNIVERSIDAD NUESTRA SEÑORA DE LA PAZ

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA DE MEDICINA
CATEDRA DE MICROBIOLOGIA II

IDENTIFICACION DE COCOS GRAM (+)

NOMBRE: Fabiola Yoselin Chambi Nina

CURSO: B

1.- Objetivos
• Identificar el género y la especie de las cepas problema.
• Aprender a realizar las pruebas bioquímicas para diferenciar especies importantes de
Staphylococcus y Streptococcus.
• Describir las reacciones que se presentan en las distintas pruebas

2.- Materiales y equipos

• Cepas bacterianas
• Agua oxigenada
• Agar sangre
• Discos de bacitracina y optoquina
• Plasma citratado
• Escala de MacFarland Tubo 0.5
• Solución fisiológica
• Asas microbiológicas
• Tubos de hemólisis
• Hisopos estériles
• Portaobjetos
• Gradillas
• Mecheros
• Microscopios con objetivo de inmersión

3.- Procedimiento

3.1 PRUEBA DE PYR

Objetivo
Permite la identificación de Streptococcus pyogenes y Enterococcus spp.
Fundamento
Permite la identificación presuntiva de ciertas bacterias en base a la actividad enzimática de
pirrolidonilarilamidasa (PYRasa). Los microorganismos que contienen esta enzima hidrolizan en forma
rápida el sustrato presente en los discos y liberan un grupo pirrólico que reacciona con el reactivo
cinamaldehído originándose un compuesto de color rosado-rojizo.

Procedimiento
A partir de un cultivo puro en agar sangre del microorganismo en estudio del cual se ha identificado que
son cocos Gram positivos catalasa negativa, hacer una suspensión densa en 0.5 ml de solución
fisiológica estéril y agregar un disco de PYR.
Incubar en aerobiosis a 35 – 37ºC durante 30 minutos.

Interpretación de resultados
Después de agregar se vio que e spositivo es decir una presencia de actividad enzimática
pirrolidonilarilamidasa: disco color rosado a rojo

3.2 SENSIBILIDAD A LA BACITRACINA

Objetivo
Separar el Streptococcus pyogenes de los demás Streptococcus beta hemolíticos
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CARRERA DE MEDICINA
CATEDRA DE MICROBIOLOGIA II

Fundamento: Streptococcus pyogenes es sensible a bajas concentraciones de Bacitracina (discos

conteniendo 0,04U).
Aunque existe un 5% de cepas de S. agalactiae que también son sensibles.

Procedimiento
Se realiza sembrando un gran inóculo, tomado con asa bacteriológica de un cultivo puro, que se estría
sobre una placa de agar sangre en varias direcciones intentando obtener un crecimiento confluente.
Luego se coloca el disco de Bacitracina y se incuba 18-24 horas a 37ºC.

Interpretación de resultados
La prueba fue negativa por que no se apreció ningún halo.

3.3 PRUEBA DE LA CATALASA

Objetivo
Permite identificar la presencia de la catalasa en ciertas cepas bacterianas. En el caso de los cocos Gram
(+) distingue el género Staphylococcus (catalasa +) del género Streptococcus (catalasa -).

Fundamento
La enzima catalasa descompone el peróxido de hidrógeno (H2O2) en agua y oxígeno bajo la fórmula 2
H2O2----2 H2O + O2. De esta manera las bacterias se protegen del efecto tóxico del H2O2,
que es un producto final del metabolismo aerobio de los azúcares para la obtención de energía.

Procedimiento
Con un asa se transfiere una porción de la colonia en estudio sobre un portaobjetos, inmediatamente
después se coloca encima una gota de H2O2 al 3%. Si la colonia proviene de un medio con sangre, tomar
en cuenta que los eritrocitos tienen catalasa y podrían provocar falsos resultados.
Esta prueba también puede realizarse a partir de un aislamiento en tubo, colocándose directamente
unas gotas de H2O2 dentro del mismo.

Interpretación de resultados
Se vio un desprendimiento de burbujas se considera una prueba positiva.

3.4 SENSIBILIDAD A LA OPTOQUINA

Objetivo
Diferenciar S.pneumoniae de otros Streptococcus alfa hemolíticos.

Fundamento
Se basa en la sensibilidad de la cepa a una concentración menor o igual a 5 ug/ml de hidroxicupreína
(optoquina).

Procedimiento
Estriar un cuadrante de una placa de agar sangre en varias direcciones con una suspensión igual al
tubo Mc Farland 0,5. Colocar luego un disco de optoquina en el centro del área estriada. Incubar 18-24
horas a 37ºC.
Interpretación de resultados
Se presencio los halos mayores de 15mm indicando sensibilidad a la optoquina.

3.5 IDENTIFICACIÓN MORFOLÓGICA CON TINCIÓN GRAM

• Preparar el frotis bacteriano

• Teñir con cristal violeta (1minuto)
• Aplicar mordiente: lugol (1 minuto)
• Decoloración con alcohol-acetona
• Teñir con safranina (30 seg)
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Entre cada paso proceder a lavar los colorantes con agua destilada. Realizar la observación
microscópica con el objetivo de inmersión.
Interpretación de resultados
Se logro identificar la presencia Cocos de Gram +.

5.- Análisis de resultado

En las imágenes se muestra los diferentes procedimientos mencionados anteriormente.

6.- Conclusiones

Luego de llevar a cabo el laboratorio se cumplió con los distintos objetivos trazados por procedimiento ,
en los que se verifico la teoría, hubiese sido satisfactorio tener ambas pruebas de resultado, es decir
tener tanto las pruebas positas como las negativas por muestra realizadas.