IDENTIIFICACIÓN DE LA FAMILIA

STAPHYLICOCCACEAE

• Características macroscópica de los

cultivos
• Características microscópicas
• Pruebas bioquímicas
IDENTIFICACIÓN DE CGP

BACITRACINA

R S
Família Família
Staphylococcaceae Micrococcaceae
 Características macroscópica de los
cultivos: Género Micrococcus
Suelen producir pigmento lo que origina colonias
de diferentes colores: amarillas, rosadas,
anaranjadas, de 1-2 mm de diámetro, mates ,
convexas y bordes enteros.
Crecimiento lento (incubación mínima de 48
horas)
 Características microscópica de los
cultivos: Género Micrococcus
Cocos Gram +, de 0,5 a 3,5
micrómetros de diámetro. Aerobios estricto
Se observan dispuestos generalmente en Catalasa +
tetradas, sacinas y algún racimo Utilizan la glucosa por vía
irregular oxidativa.

Se diferencian del género Staphyloccocus por:

Su morfología microscópica
oEn la tinción de Gram: son mayores
(0.5 – 2.0 μm).
oGeneralmente aparecen agrupados en
forma de tétradas en lugar de racimos.
Crecimiento mas lento
Aerobios estrictos
Prueba de la bacitracina (S)
Prueba de la fermentación de la glucosa (-)
 CARACTERÍSTICAS
Género STAPHYLOCOCCUS
Cocos Gram +
Catalasa +
Inmóviles
No esporulados
Agrupados principalmente en racimos
irregulares
Podemos observar también parejas,
alguna tétrada, cadenas cortas
 Aerobios facultativos
Crecimiento: Rápido (24 horas)
Poco exigentes
 Crecen bien en los medios de cultivo
habituales
Son capaces de desarrollarse a altas
concentraciones de NaCl (halotolerantes/
medio selectivo Manitol).
 CARACTERÍSTICAS
Género STAPHYLOCOCCUS
Morfología de las colonias:
Staphylococcus aureus
En agar sangre se observan colonias medianas,
blancas, cremosas, brillantes, rodeadas de una zona
de beta hemolisis. Pasadas 24 horas (48-72 horas)
color amarillo (de ahí su nombre aureus)
En agar manitol son medianas, convexas, de
bordes enteros con superficie lisa y color amarillo.
 CARACTERÍSTICAS
Género STAPHYLOCOCCUS

Morfología de las colonias:

Staphylococcus coagulasa
negativos
Las colonias de los ECN en
agar sangre tienen un tamaño de
1-3 mm tras 24 h de incubación,
blancas, cremosas, lisas y
convexas
En agar manitol reducen un
poco el tamaño y presentan color
blancos
 GÉNERO Staphylococcus
PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN
PRUEBA DE LA CATALASA
Cuando se obtienen en un cultivo en medio
sólido colonias aisladas, que tras la
tinción de Gram aparecen como CGP el
primer paso a realizar será siempre la
prueba de la CATALASA
FUNDAMENTO Esta prueba detecta la
presencia del enzima catalasa
El enzima catalasa descompone el
peróxido de hidrógeno (H2O2) en agua y
oxígeno
2 H2O2----2 H2O + O2.
Este ultimo se desprende en forma de
burbujas
 GÉNERO Staphylococcus
PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN
PRUEBA DE LA CATALASA
Reactivos
Peróxido de hidrogeno al 3%
Cultivos jóvenes (18-24 h) de las
bacterias a identificar
Procedimiento
Tomar una muestra del extremo
de una colonia bien aislada con un
asa de siembra
transferirla a la superficie de un Precauciones
portaobjeto, en el que previamente Los eritrocitos poseen catalasa por lo
hemos puesto una gota de peróxido que debe tenerse cuidado si el cultivo
de hidrógeno al 3% y mezclar. proviene de agar sangre.

Resultado + Los cultivos viejos pierden viabilidad y

La aparición rápida y sostenida de dan reacciones lentas o negativas..
burbujas o efervescencia
 GÉNERO Staphylococcus
PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN
PRUEBA DE LA BACITRACINA
FUNDAMENTO
La sensibilidad a la bacitracina
(discos de 0.04U)
proporcionan un método
sencillo para diferenciar las
familias Micrococcaceae y
Estafilococcaceae
REACTIVOS
Agar Mueller Hinton
Discos bacitracina
SSF
Procedimiento
Preparar suspensión bacteriana
en 2ml de SSF estéril con una
turbidez 0,5 escala MacF
Con hisopo estéril pintar placa
para conseguir crecimiento
homogéneo
Poner con pinzas estériles el
disco de antibiótico
Dejar reposar placa 5min
Invertir placa con cuidado e
incubar a 37º 18-24h
Resultados
Micrococcaceae (S)
Estafilococcaceae (R)
 GÉNERO Staphylococcus
PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN
Fermentación del manitol en agar salino
El medio utilizado es el agar
manitol salino, que contiene
manitol (1%), ClNa (7.5%) rojo
fenol (indicador de pH)

Su alta concentración de sales

inhibe el desarrollo de otros
microorganismos (excepto
enterococo) y recupera
selectivamente los estafilococos.

Las bacterias que fermentan el

manitol, liberan ácidos, baja el pH
y se produce el VIRAJE DEL
ROJO FENOL DE ROJO MANITOL + MANITOL -
AMARILLO
Especies a
identificar
S. aureus
S. epidermidis
S. saprophyticus
S. lugdinensis
 GÉNERO Staphylococcus
PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN
Procedimiento alternativo a la
prueba de la coagulasa:
Aglutinación con látex:
Se utilizan partículas de látex
sensibilizadas con fibrinogeno y IgG.
Fundamento
Se enfrentan cepas del microorganismo a
estudiar con partículas de latex
sensibilizadas con anticuerpos dirigidos
hacia la proteina A y fibrinógeno
dirigido hacia la coagulasa
La mezcla del reactivo con la colonias
sospechosas da como resultado la rápida
aglutinación de las partículas de látex.
 GÉNERO Staphylococcus
PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN
PRUEBAS CONFIRMATORIAS ADICIONALES:
Algunas cepas de S.aureus pueden producir reacciones de coagulasa en
tubo equívocas o débiles, y en algunos casos raros pueden aparecer
negativas.
Por ello puede ser útil utilizar otras pruebas confirmatorias.

PRUEBA DE LA DN-asa (desoxirribonucleasa )

Fundamento
Los microorganismos capaces de producir DNAsa despolimerizan el DNA
reduciendolo a fragmentos de nucleotidos.
La visualización de la despolimerización del DNA se consigue gracias a la
capacidad del ácido clorhídrico de reaccionar con el DNA dejando un
precipitado blanco que enturbia el medio, y sin embargo no reacciona con los
fragmentos de nucleotidos resultantes de la despolimerización del DNA.
 GÉNERO Staphylococcus
PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN
PRUEBAS CONFIRMATORIA:
PRUEBA DE LA DN-asa (desoxirribonucleasa )
Procedimiento Negativo:

Se hace una estría gruesa en Toda la placa

una placa de medio que
contenga DNA.
Incubar 24h a 37ºC
Tras la incubación inundar la
placa con HCl 1 N y esperar
1 minuto.
quedará con
cierta opacidad
Positivo:
Se observa una zona
clara alrededor del
crecimiento y el resto de
la placa quedará opaca
S.
lugnudensis
 GÉNERO Staphylococcus
PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN

ESTAFILOCOCOS COAGULASA -
La mayoría de los aislamientos no requieren
identificación a nivel de especie a no ser
que provengan de fluidos normalmente
estériles (sangre, líquido cefalorraquídeo,
catéteres, prótesis).
La mayoría de las infecciones clínicas
nosocomiales están producidas por
S.epidermidis.

Datos clínicos que nos orientaran hacia la

búsqueda de estafilococos coagulasa
negativos:
1. Pacientes inmunodeprimidos
2. Pacientes con catéteres o prótesis
 GÉNERO Staphylococcus
PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN

Bacitracina (S)

Bacitracina (R)
 GÉNERO Staphylococcus
PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN

S. aureus S. epidermidis S. saprophyticus S. lugdunensis

Coagulasa + - - -
DNA-sa + - - -
Manitol + - v v
Novobiocina S S R S
Polimixina S R S S

http://www.youtube.com/watch?v=dRNYWX4v0VE
Sembrar suspensión 0,5
EMF en MH (siembra
homogénea)
Incubar a 35ºC durante
24 horas completas en
atmósfera aerobia
 PORTADORES DE S. aureus
Estudio de colonización por SARM

HISOPADO NASAL Introducir Incubar

HISOPADO UÑAS hisopos en tubos 35ºC 18-
de TSB 24h

TG
Cefoxitina COAGULASA
30μg
Siembra en Siembra en
TSA Manitol

Siembra en El medio MRSA es un medio compuesto por

medio MRSA agar Mueller-Hinton suplementado con 4% de
NaCl y 6µg/mL oxacilina
 RESISTENCIA ANTIBIÓTICOS
(Staphylococcos)
Mecanismo de acción
Union a las proteínas fijadoras de penicilina. 1 2

Tipos de resistencia.
1

B-lactamasas
(plásmido)
2
Alteración PBP (mutación
cromosomal: gen mecA )
S auerus MRSA

Resistencia
cruzada
Antibiotico S R

Penicilina

Eritromicina

Tetraciclina

Cloranfenicol

Vancomicina

Sulfaprim

Gentamicina