División de Ciencias Naturales y Exactas

Lic. Químico Farmacéutico Biólogo

Bacteriología Médica

Reporte TRS

Guadalupe Fernanda Zaisar Munguía

28-10-20
  TOMA DE MUESTRA

EXUDADO NASAL

1. Elevar la punta de la nariz con el dedo pulgar.

2. En caso de ausencia de secreción, humedecer la punta del hisopo en solución

salina estéril e introducirlo hasta la base de la fosa nasal, donde se rota
suavemente. (Fig. 1)

3. Retirar el hisopo con cuidado de evitar la contaminación del mismo con las
bacterias de la piel, proceder a realizar los extendidos finos sobre láminas
portaobjetos nuevas y limpias para teñir con Gram y Hansel.

4. Proceder de igual forma con un segundo hisopado para la siembra en medios

de cultivo: agar sangre (AS) y agar manitol salado (AMS) (Fig. 2).

5. Incubar los medios de cultivo a 36 °C, en condiciones de aerobiosis por 18 a 24

horas.

Observación: Para la obtención de secreción nasofaríngea, se sugiere utilizar

hisopos flexibles de alginato de calcio. Esta muestra es útil para la detección de
portadores de patógenos como: N. meningitidis, C. diphtheriae y B. pertussis.(5)

Fig. 1 Toma de muestra para exudado nasofaríngeo

EXUDADO FARÍNGEO

Condiciones previas del paciente

• El paciente no debe haber recibido antibióticos en los últimos 8 días, previos a la

obtención de la muestra.

• El paciente debe acudir en ayunas al laboratorio.

• Debe cepillarse los dientes y no practicar gargarismo

Procedimiento

1. Inspección de la faringe: ubicar al paciente en una posición cómoda y con

buena iluminación, deprimir la lengua con el abatelengua, visualizar la fosa
amigdalina y faringe en busca de exudado posterior, presencia de
pseudomembrana o placas. (Fig. 3)

2. Indicar al paciente que abra la boca y que pronuncie un largo “ah”, el cual sirve
para elevar la úvula y evitar las náuseas.

3. Introducir el hisopo y frotar enérgicamente ambas amígdalas y la pared

posterior de la faringe con movimientos de barrido.

4. Retirar el hisopo cuidando de no tocar las paredes laterales de orofaringe,

úvula, lengua, encías y dientes.

5. Extender la muestra con suaves movimientos sobre la superficie de los

portaobjetos para realizar los frotis que serán teñidos al Gram y con la técnica de
Hansel.

6. Obtener un segundo hisopado de fauces para la siembra en AS de carnero,

siguiendo la técnica de estriado sobre superficie, realizando siembras de
profundidad con el asa para la detección de hemolisinas estreptocócicas (Fig.4).

7. Incubar el AS a 36°C, en condiciones de 5-7% CO2, por 24-72 horas.

Observación: En caso de ser necesario, la muestra se podrá transportar en medio
de Stuart o Amies, realizando el cultivo de la misma en el menor tiempo posible
(menos de 2 horas).

Fig. 3. Toma de muestra de exudado faríngeo

 MEDIOS PARA EL AISLAMIENTO

STAPHYLOCOCCUS AUREUS

Cultivo de S. aureus en Agar sangre. Temperatura

óptima de crecimiento entre 34-37ºC. A las 18-24
horas se observan colonias de 1-3 mm. El color
amarillo es debido a la producción de carotenoides,
que puede ser favorecida si se incuba a
temperatura ambiente y luz natural durante 24-
48h. El tipo de estriado que se utiliza es por
cuadrantes.

Cultivo de S. aureus en Agar sal y manitol. Temperatura

óptima de crecimiento entre 34-37ºC. A las 18-24 horas se
observan colonias de 1-3 mm. El color amarillo es debido a
la fermentación del manitol. El tipo de estriado que se
utiliza es por cuadrantes.

STREPTOCOCCUS PYOGENES

Streptococcus pyogenes: Cultivo en Agar sangre a 37ºC.

Se observa microbiota faríngea con Streptococcus
pyogenes. Las colonias de S. pyogenes están rodeadas
de un zona de hemólisis completa (β) el tipo de estriado
que se utiliza en el medio es por cuadrantes.
 TINCIÓN GRAM

Staphylococcus aureus Tinción de gram.

Microscopía óptica 1000 aumentos. S. aureus se
observa como cocos gram positivos dispuestos en
racimo.

Streptococcus pyogenes Tinción de gram.

Microscopía óptica. 1000 aumentos. S. pyogenes se
observa como cocos gram positivos dispuestos en
cadenas o pares.

 DIAGRAMA DICOTÓMICO PARA LA IDENTIFICACION

  PROTOCOLO PARA PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Catalasa

La catalasa es una enzima que poseen la mayoría de las bacterias aerobias.

Descompone el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno. El desprendimiento de
burbujas procedentes del oxígeno indica que la prueba es positiva.

Resultado: Negativo para streptococcus (faríngea), positivo para staphylococcus

(nasal)

Coagulasa

Permite determinar la capacidad de coagular el plasma por la acción de la enzima

coagulasa. Se utiliza para diferenciar S. aureus (coagulasa positivo) de otras
especies de Staphylococcus. La prueba de la coagulasa en tubo se puede leer
tras incubación de 4h, pero si es negativa debe incubarse hasta 24h.

Resultado: Positivo para S. aureus

 PROTOCOLO PARA ANTIBIOGRAMA

El antibiograma es la prueba microbiológica que se realiza para determinar la

susceptibilidad (sensibilidad o resistencia) de una bacteria a un grupo de
antibióticos.

Debido a que Staphylococcus aureus es resistente a los antibióticos

betalactamicos se realizó la prueba de bacitracina, que nos sirve para la
diferenciación de Staphylococcus de Micrococcus.

Para la prueba se realizó una solución bacteriana de acuerdo al estándar de

McFarland para ejecutar el antibiograma de S. pyogenes y S. aureus, se coloco
un sensidisco de Trimetoprim-sulfametoxazol con bacitracina juntos para S.
pyogenes, solo para comprobar la resistencia, mientras que para S. aureus se
utilizacoron 4 sensidiscos: clindamicina, penicilina, oxacilina y trimetoprim con
sulfametoxazol.

Interpretación bacitracina para S. aureus:

Bacitracina Interpretación
Sensible Micrococcus
Resistente Staphylococcus
 Interpretación de antibiograma para S. pyogenes :

bacitracina trimetoprim/sulfametoxazol ident. presuntiva

sensible resistente streptococcus beta-hemoliticos grupo a
resistente resistente streptococcus beta-hemoliticos grupo b
resistente sensible streptococcus beta-hemoliticos no
pertenecientes al grupo a o b
sensible sensible descartar grupo a o b con pruebas
serologicas

T/S
Clin

Peni Oxa

Antibiótico Valor referencia Interpretación Valor medido

(Resistente, intermedio, sensible) (mm)

Clindamicina ≤14 15-20 ≥21 sensible 30

Trimetoprim/sulfametoxazo ≤10 11-15 ≥16 Sensible 25

l
Penicilina ≤10 11-12 ≥13 Resistente -

Oxacilina ≤28 no aplica ≥29 Resistente 10

 FUENTES:
 J. Linares ,Sensibilidad de Staphylococcus aureus a los antibióticos,
Servicio de Microbiología. Ciudad Sanitaria Príncipes de España.
L'Hospitalet de Llobregat, Barcelona. https://esteve.org/wp-
content/uploads/2018/01/136595.pdf
 Ana Fernández Olmos Celia García de la Fuente Juan Antonio Saéz
Nieto Sylvia Valdezate Ramos, Metodos de identificación bacteriana en
el laboratorio de microbiología, Procedimientos en Microbiología Clínica
Recomendaciones de la Sociedad Española de Enfermedades
Infecciosas y Microbiología Clínica, 2010.
https://www.seimc.org/contenidos/documentoscientificos/procedimientos
microbiologia/seimc-procedimientomicrobiologia37.pdf
 Elmer W. Koneman, Stephen Allen, Koneman. Diagnostico
Microbiologico/ Microbiological diagnosis: Texto Y Atlas En Color/ Text
and Color Atlas, Ed. Médica Panamericana, 2008.
https://books.google.com.mx/books?
id=jyVQueKro88C&dq=diagrama+dicotomico+para+streptococcus&sour
ce=gbs_navlinks_s
 Iván Kosky Valencia Cruz, Raquel Calderón Morales, Juan Edgar
Callisaya H. Magda Choque Huanca, Evaluación de medios de cultivo
para el aislamiento de Streptococcus pyogenes en pacientes con
diagnóstico clínico de faringoamigdalitis, BIOFARBO, 18(1), Junio 2010,
http://www.scielo.org.bo/pdf/rbfb/v18n1/a06v18n1.pdf