AMINOÁCIDOS

PÉPTIDOS

PROTEÍNAS
 PROTEÍNAS
PÉPTIDOS

AMINOÁCIDOS

ácidos carboxílicos que poseen un grupo amino

α−aminoácido

enlace peptídico

sección corta de una proteína

 CLASIFICACIÓN DE LOS AMINOÁCIDOS

según la posición del grupo según la polaridad

amino en la cadena carbonada la cadena lateral

α-aminoácidos no polares
β-aminoácidos polares
γ-aminoácidos neutros, ácidos, básicos
 ESTRUCTURA Y ESTEREOQUÍMICA DE LOS α-AMINOÁCIDOS

D-aminoácido L-aminoácido

Se conocen más de 700 aminoácidos: 20 de ellos merecen especial atención porque

son los aminoácidos comunes (AA naturales) que forman las proteínas
ESTEREOQUÍMICA DE LOS α-AMINOÁCIDOS
Aminoácidos que se encuentran en las proteínas

Aminoácidos neutros

Aminoácidos con cadenas laterales no polares:

PI = Punto Isoeléctrico

Glicina (Gli) PI (5.97)

Alanina (Ala) PI (6.01)

Valina* (Val) PI (5.96)

Leucina* (Leu) PI (5.98)

Isoleucina* (Ile) PI (6.02)

Aminoácidos neutros:

Aminoácidos con cadenas laterales no polares:

Metionina* (Met)
PI (5.74)

Prolina (Pro)
PI (6.30)

Fenilalanina* (Fen) PI (5.48)

Triptófano* (Trp) PI (5.89)

Aminoácidos neutros
Aminoácidos con cadenas laterales polares :

Asparragina (Asn)
PI (5.41)

Glutamina (Gln) PI (5.65)

Serina (Ser) PI (5.68)

Treonina* (Tre) PI (5.60)

Tirosina (Tir) PI (5.66)

Cisteína (Cis)
PI (5.07)
Aminoácidos ácidos:

Ácido Aspártico (Asp) PI (2.77)

Ácido Glutámico (Glu) PI (3.22)

Aminoácidos básicos:

Lisina* (Lis) PI (10.76)

Arginina* (Arn) PI (9.74)

Histidina* (His) PI (7.59)

 COMPORTAMIENTO ÁCIDO-BASE DE LOS AMINOÁCIDOS

9los aminoácidos son especies anfóteras

forma catiónica zwitterión forma aniónica

especie presente en forma de sal especie presente en

medio ácido fuerte: a interna en el PI medio básico fuerte: a
valores de pH inferiores valores de pH
al PI superiores al PI
carga neta +1 carga neta 0 carga neta –1

en solución acuosa existe equilibrio entre el ión dipolar y las formas aniónica y catiónica
 9el Punto Isoeléctrico (PI) es el pH al cuál el aminoácido no posee carga neta

2.8 a 3.2 AA ácidos 4.8 a 6.3 AA neutros 7.6 a 10.8 AA básicos

Curva de titulación para la glicina

El PI puede calcularse a partir
de los valores de pKa
SEPARACIÓN DE AMINOÁCIDOS: ELECTOFORESIS

Técnica analítica. Separación de mezclas de aminoácidos sobre la base

de las diferencias en los valores de PI:

pH del buffer 6.0

Un aminoácido en su PI no se mueve en un campo eléctrico.

 SÍNTESIS DE AMINOÁCIDOS

1) AMINACIÓN DE α-HALOÁCIDOS
2) SÍNTESIS DEL ÉSTER N-FTALIMIDOMALÓNICO

Es un método más
general que el método
anterior.

El éster N-ftalimidomalónico se alquila de la misma forma que el éster malónico.

La hidrólisis y la descarboxilación da lugar a un α-aminoácido racémico.
Variante: SÍNTESIS DEL ÉSTER ACETAMIDOMALÓNICO

Etapas:

1- Formación del enolato del acetamidomalonato de dietilo

2- Reacción del enolato formado con un halogenuro de alquilo 1º (SN2)
3- Hidrólisis del grupo protector amida y de los grupos ésteres.
4- Descarboxilación.
3) AMINACIÓN REDUCTIVA

También puede emplearse NaBH4 como agente reductor:

En los procesos biológicos:
Síntesis enantioselectiva de aminoácidos:

98.7 % ee
RESOLUCIÓN DE AMINOÁCIDOS R,S

Método cinético:

La mezcla resultante de D-aminoácido y de L-aminoácidos desacilados se

separa fácilmente
 REACCIONES DE LOS AMINOÁCIDOS

A- Esterificación del grupo carboxilo

Los ésteres bencílicos son útiles como grupos protectores,

se regeneran los AA por tratamiento con H2 / Pd
 B- Acilación del grupo amino

Protección del grupo amino

Desprotección del grupo amino

C- Reacción con ninhidrina

Reacción
global
Color violeta
D- FORMACIÓN DE ENLACES PEPTÍDICOS PÉPTIDOS
Y PROTEÍNAS

ESTRUCTURA DE PÉPTIDOS Y PROTEÍNAS

Enlace amida: ENLACE PEPTÍDICO

si la cadena incorpora otro aminoácido ⇒ TRIPÉPTIDO...OLIGOPÉPTIDO..(4-10

residuos de AA) ....POLIPÉPTIDO (PM < 6000)

Las PROTEÍNAS son polímeros de los AA (PM = 6000 a 40.000.000)

 Geometría plana asociada al enlace peptídico:

estructura del dipéptido L-alanilglicina

Aminoácido N terminal Aminoácido C terminal

Ala-Gli
 Bradicinina

arginil prolil prolil glicil fenilanalil seril prolil fenilanalil arginina

Arg-Pro-Pro-Gli-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg
Algunos péptidos de importancia:

antibiótico edulcorante
ENLACES DISULFURO

cisteína cistina

polipéptido puentes disulfuro

en el polipéptido
9los puentes disulfuro se pueden manipular
Oxitocina humana
 DETERMINACIÓN DE LA ESTRUCTURA DE PÉPTIDOS:

ANÁLISIS DE AMINOÁCIDOS

1.Separación de las cadenas peptídicas individuales:

Ruptura de los enlaces disulfuro

ruptura permanente: oxidación con ácido peroxifórmico

2. Determinación de la composición en AA

9determinación de qué aminoácidos están presentes y en qué proporciones

1º paso) hidrólisis de los enlaces amida liberando los AA (HCl 6M, 6 hs)

2º paso) análisis del hidrolizado en un analizador de aminoácidos ó en un equipo

de cromatografía líquida de alta resolución (HPLC)

Cromatograma
obtenido por HPLC

determina los AA de un péptido pero no revela su secuencia

⇓
no indica el orden en el que los residuos están unidos entre sí
Esquema básico de la separación empleando un analizador de aminoácidos:
3- Ruptura del péptido en cadenas más cortas: Hidrólisis parcial

Cuando las proteínas son muy grandes se deben escindir en cadenas de hasta ≈
30 AA antes de determinar la secuencia de los mismos.

La ruptura se realiza vía hidrólisis ácida ó empleando enzimas:

- Tripsina: rompe la cadena en los grupos carboxilo de los AA básicos lisina y arginina

- Quimotripsina: rompe la cadena en los grupos carbonilo de los AA aromáticos

fenilalanina, tirosina y triptofano
 SÍNTESIS DE PÉPTIDOS

Implica la formación de enlaces amida entre los AA adecuados en la secuencia

apropiada

N,N-diciclohexilcarbodiimida
Acoplamiento de dos aminoácidos empleando DCC

DCC N,N-diciclohexilurea

Mecanismo:
 NIVELES DE LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS

9las proteínas tiene 4 niveles de organización

ESTRUCTURA PRIMARIA

se refiere a la secuencia de los AA en la cadena proteica

↓
tiene que ver con los enlaces covalentes peptídicos y disulfuro
 Oxitocina bovina

9todas las propiedades de las proteínas están determinadas, en

forma directa ó indirecta, por su estructura primaria
 ESTRUCTURA SECUNDARIA

se refiere al arreglo espacial de los AA que están cercanos entre

sí en la cadena proteínica
↓
tiene que ver con las relaciones conformacionales entre los AA vecinos: la
cadena proteica se pliega y se curva, siendo los puentes de H entre el hidrógeno
amídico y el oxígeno carboxílico los enlaces que estabilizan la estructura

Hélice α Lámina plegada β

Enlaces de H en la misma cadena Enlaces de H entre cadenas distintas

tienen forma de espiral, con los –R de Ordenamiento laminar:

los AA proyectándose hacia fuera los enlaces peptídicos
se encuentran en el plano de la
lámina plegada y los –R de los AA
se alternan para reducir repulsiones
Conformación en hélice α
Conformación en lámina plegada β
 ESTRUCTURA TERCIARIA

se refiere a la forma como la cadena proteínica se dobla

↓
es su conformación tridimensional completa
 Plegamiento único de la cadena proteica definido por todas las
interacciones no-covalentes (enlaces de hidrógeno, enlaces
iónicos, atracciones electrostáticas, interacciones hidrofóbicas)

Carboxipeptidasa A
Pérdida de la estructura terciaria por acción del calor:

Desnaturalización de proteínas
 ESTRUCTURA CUATERNARIA

9 sólo se da en las proteínas que contienen más de una cadena

9se refiere a la forma en que se organizan las subunidades cuando

las proteínas son agregados de 2 ó más cadenas

9depende del mismo tipo de interacciones que fijan la estructura terciaria

Comparación esquemática de los niveles de estructura de las proteínas

Hemoglobina
 DESNATURALIZACIÓN DE LAS PROTEÍNAS

Desnaturalización ⇒ pérdida de la estructura tridimensional y de la actividad

biológica de una proteína, manteniéndose los enlaces
peptídicos.

Diversos factores alteran las conformaciones de las proteínas:

1) calor
2) la luz ultravioleta
3) los ácidos y las bases
4) los solventes orgánicos
5) las sales de iones metálicos pesados
CLASIFICACIÓN DE LAS PROTEÍNAS
ENZIMAS
LA ESTRUCTURA ES TODO
GRACIAS!!!!