TRABAJO Nº 5

CONTENIDO SELECCIONADO:

Unidad N°6: Introducción al manejo de los microorganismos

Microscopia: Microscopio óptico y electrónico y Tinciones celulares (tinciones simples y
compuestas, tinción de Gram)

MATERIAL

Microscopio óptico, partes y uso. Observación al microscopio, tinciones. Técnica de Breed

Páginas de consulta recomendadas:

https://www.youtube.com/watch?v=9o5Nbn1VYK4
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm

ACTIVIDADES
 a) Tenga en cuenta las partes que se compone el microscopio óptico y clasifíquelas en los
tres sistemas que propone el video.
b) Especifique la función de cada una de las diferentes partes del microscopio?
c) ¿Cuánto aumento proporcionan los oculares?
d) ¿Cuánto aumento proporcionan los objetivos y con cuantos objetivos cuenta un
microscopio óptico?
e) ¿Cuales son los objetivos que se deben usar en seco y cuál en inmersión. ¿cuál es la
finalidad del uso de aceites de inmersión?
f) Complete el siguiente cuadro.

Tipo de estructura a Aumento del objetivo Aumento final del objeto

observar seleccionado observado
Glóbulo blanco
Célula muscular
Bacteria en forma de bacilo
Bacteria en forma de coco
Levadura
Staphylococcus
Streptococcus

g) Examen de muestras al microscopio: Investigue las diferentes modalidades de

preparado y observación de muestras al microscopio. Explique la utilidad y aplicación
de cada una de ellas.
h) Explique la diferencia entra tinción simple y compuesta. De un ejemplo de cada una de
ellas y busque una figura que las represente.

TÉCNICA DE BREED

Material informativo
El Método de Breed es una técnica de laboratorio que se utiliza para el recuento
de microorganismos y células somáticas en la leche. Fue presentado en 1910 por los biólogos
estadounidenses Samuel Cate Prescott y Robert Stanley Breed
Se trata de un método para el "recuento total", dado que se contabilizan los microorganismos
vivos y muertos o todas las células somáticas de la muestra.
Determinar el número de células somáticas en la leche está relacionada a la calidad sanitaria de
la vaca. Es una manera indirecta de diagnosticar mastitis.
El análisis de la calidad de leche cruda es una práctica frecuente en la industria láctea y tiene
como objetivo el control de la calidad de las muestras y de la materia que se introduce en la
usina de procesamiento, para culminar en un producto de consumo masivo que debe responder a
estándares de calidad.

Preparación de las muestras

Primeramente se debe homogeneizar la leche calentándola en un baño de agua a 40 °C para que
las células somáticas asciendan a la superficie junto con la grasa. El instrumental de laboratorio
debe estar limpio pero no necesariamente estéril dado que el método se basa en recuento de
células y para el mismo no es precisa la asepsia. Si posteriormente se van a realizar análisis
microbiológicos detallados con la misma muestra, sí es necesario que sea obtenida y
manipulada con material estéril.
Luego de extraída la muestra, es transportada al laboratorio en conservadoras a 4 °C. Puede
conservarse en estas condiciones hasta veinticuatro horas.
Para la toma de muestras existen dos condiciones básicas a tener en cuenta:
La primera es representar el volumen total de leche de donde fue extraída y la segunda es ser
conservada y transportada a la temperatura correcta de manera de que no se vean modificadas
sus propiedades de origen, previo al análisis en el laboratorio. En caso de demora en la
consecución del análisis, debe agregarse a la leche algún conservante que no altere los
posteriores resultados analíticos.
Deben realizarse extendidos de 0,01 mL y de 1 cm2 sobre portaobjetos exentos de grasa (los
cuales se limpian con xilol).
Luego de dejar secar, se colorea y efectúa el recuento. Para ello se realiza el promedio de
células existentes en el campo del microscopio, dividiendo el total de células somáticas entre el
factor microscópico (FM) que corresponde al número de campos en 1 centímetro, es decir en
100 milímetros, obteniéndose de esa manera el número de células somáticas por mililitro de
leche.
Para el cálculo del numero de células somáticas / ml se emplea la siguiente fórmula.

F. nº de células

Nº = --------------------------------

Nº de franjas o campos

Donde F es:

1ml . (10.10)mm2

F = --------------------------------
Los reactivos utilizados son soluciones de Azul de metileno que se preparan
disolviendo el mismo en agua destilada y alcohol de acuerdo a los siguientes valores: 5
a) Solución alcohólica de Azul de metileno:

 0,3 g Azul de metileno

 30 mL Alcohol 96º
 100 mL Agua destilada
b) Solución Breed:

 0,6 g Azul de metileno

 54,0 mL Alcohol etílico 96º
 40,0 mL Tetracloroetano
 6,0 mL Àcido acético