TECNICAS PARA ESTUDIO DE LAS CELULAS:

TINCION CELULAR
Ramos f. yanis (1), Yánez p.yerlis (2), morales g. Jesus (3), guerreo f.aldair (4),
romero angélica (5), alquerque c.angie (6)

RESUMEN

Se emplearon las distintas técnicas para el estudio de las células

microscópicamente, mediante los diferentes tipos de tinción; para así identificar
su estructura. En esta práctica se utilizó la tinción de células fúngicas, células
epiteliales humanas, células vegetales y tejido adiposo; lo cual nos permitió
identificar sus diferencias y como está conformada cada una de estas células.
Para esto se empleó colorantes como: solución de lugol, solución de azul de
metileno, Sudan III o IV y solución verde Jano. Se encontraron hifas en la
observación de células fúngicas, se denoto la diferencia entre célula animal
(epitelio bucal) y la célula vegetal, además de esto la presencia de leucoplasto
y cloroplasto en células vegetales. Al finalizar la práctica, adquirimos destrezas
para el manejo de las distintas técnicas para la observación de las células y
también el uso de los distintos colorantes para lograr dicho objetivo.

Palabras claves: técnicas, tinción, colorantes, células.

ABSTRACT
To use different techniques for the study of cells microscopically, through
different types of staining; To identify its structure. In this practice staining of
fungal cells, human epithelial cells, plant cells and adipose tissue were used;
Which allowed us to identify their differences and how each of these cells is
shaped. Dyes such as lugol solution, methylene blue solution, Sudan III or IV
and green solution were used for this purpose. Hyphal was observed in the
observation of fungal cells, the difference between the animal cell (buccal
epithelium) and the plant cell, in addition to the presence of leucoplast and
chloroplast in plant cells. At the end of the practice, we acquired skills to
manage the different techniques for the observation of cells and also the use of
different dyes to achieve this goal.
Keywords: techniques, staining, dyes, cells.

INTRODUCCIÒN

Práctica de laboratorio 08/09/17

Las células son pequeñas y complejas, por ello es difícil observar sus estruc-
turas y descubrir su composición molecular. Nuestra capacidad de ver los deta-
lles estructurales de las mismas depende de los instrumentos de que dispon-
gamos. 
La tinción es un método sencillo para incrementar el contraste entre la célula y
su entorno y por lo tanto contribuye a mejorar la imagen observada. Las
técnicas de tinción con diversos colorantes facilitan la observación al aumentar
notablemente el contraste. La mayoría de los tejidos, sobre todo los de los
animales, son incoloros y por ello necesitamos teñirlos para observar sus
características morfológicas con el microscopio óptico. Ello se consigue con el
uso los colorantes, sustancias coloreadas que son capaces de unirse de
manera más o menos específica a estructuras del tejido aportándoles color. Se
utilizan normalmente para teñir a las células y componentes tisulares que van a
ser observados con el microscopio óptico y por ello se realizan
habitualmente sobre secciones de tejido, siendo las más utilizadas las
secciones obtenidas a partir de inclusiones en parafina u obtenidas en el
criostato. [ CITATION Ram14 \l 3082 ]
Un colorante se define como una sustancia capaz de dar color a células,
tejidos, fibras, etcétera. De acuerdo con su origen, se pueden dividir en:
colorantes naturales, los cuales son extraídos de plantas o animales, y
colorantes artificiales, que son aquellos de minerales procesados y
manipulados en el laboratorio
La molécula de un colorante tiene normalmente dos componentes importantes:
uno que aporta el color, denominado cromógeno, y otro que posibilita la unión a
elementos del tejido denominado auxocromo. El cromóforo es la organización
molecular dentro del cromógeno responsable de la absorción de un espectro
determinado de longitudes de onda. El auxocromo que se une al cromógeno
puede influir en su coloración y muchos colorantes tienen más de un grupo
auxocrómico. El auxocromo puede ser un grupo ionizable, un grupo que
reacciona covalentemente con iones metálicos (mordientes) o puede
reaccionar covalentemente con el sustrato. Los colorantes son normalmente
hidrosolubles y se caracterizan por unirse a ciertas moléculas presentes en los
tejidos gracias a afinidades electro-químicas. Hay colorantes que carecen de
grupos ionizables y sirven para teñir sustancias grasas, como gotas de lípidos.
Los colorantes son los elementos principales de las tinciones generales.
Atendiendo a los objetivos que se persigan, los métodos de coloración se
clasifican en: Tinción simple, tinción compuesta y tinción especial.
Tinción simple: En la tinción simple se utiliza un solo colorante con el que se
tiñe rápidamente el microorganismo, utilizándose fundamentalmente para
observar su morfología y tamaño. Los colorantes empleados con mayor
frecuencia para este tipo de tinción son los siguientes: azul de metileno, violeta
cristal y fucsina fenicada, entre otros.

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Tinción compuesta: En este tipo de tinción, se utiliza más de una sustancia
tintórea. Los colorantes se aplican, a la preparación, separados o juntos,
formando parte de una solución. En consecuencia se puede determinar
algunas características propias de diversos géneros que permiten diferenciarlo
de los demás, por lo que reciben también el nombre de coloraciones
diferenciales. Entre los métodos más utilizados se encuentran: La coloración de
Gram. y la de Ziehl Neelsen. [ CITATION Fac17 \l 3082 ].

MATERIALES Y REACTIVOS

 Microscopio
 Portaobjetos y laminillas
 Puente de coloración
 Beaker
 Frasco lavador
 Papel filtro
 Algodón
 Hoja de elodea
 Plátano
 Cultivo de hongo
 Guantes
 Solución de lugol
 Solución de azul de metileno
 Sudan III o IV
 Solución verde Jano
 Aceite de inmersión
 Solución de levadura al 10%
 Solución salina al 0.9%
 Agua destilada

METODOLOGIA
Para la práctica de tinción celular se realizaron una serie de procedimientos en
los cuales se pretendía encontrar: Células fúngicas(hifas de hongos);En ésta
se tomó con el asa bacteriológica una pequeña muestra de hifas de hogo
cultivado (en este caso se usó un pan) y se colocó en el portaobjeto
agredandole una gota de solucion salina isotonica y se observo en el
microscopio; luego se tomó una muestra de solución de levadura, se agregó al
portaobjeto y se coloreo con azul de metileno, colocando un cubreobjetos y se
observó en el microscopio con objetivos de 40x.
Después de esto, se procedió con las células epiteliales humanas, y Se hizo
un raspado con el palillo y se obtuvo la muestra del epitelio bucal, se hizo un
extendido de esta sobre un portaobjeto, y se agregó una gota de verde Jano;

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dejando actuar este colorante durante 10 minutos, se le coloco un cubreobjetos
y se observó en el microscopio.
De la misma forma se montó la muestra para determinar las células vegetales
(leucoplastos en plátano) De un plátano verde se corta una rodaja y con una
cuchilla se realizó un raspado fino, se colocó la muestra en el portaobjeto y se
agregó una gota de agua y se le coloco un cubreobjetos se miró en el
microscopio con objetivos de 40x y, se agregó una gota de lugol por
capilaridad y se observó nuevamente. Luego se hizo el montaje para
determinar cloroplastos en hojas de elodea en el cual se tomó una hoja de
elodea y se colocó en el portaobjetos, se le agrego una gota de agua destilada,
se cubrió con el cubreobjetos y se observó en el microscopio con los objetivos
de 40x.
Así mismo se procedió en la determinación de núcleos de cebollas en la cual
se desprendió la epidermis de la cebolla, se colocó en el portaobjetos
agregándole una gota de agua y se cubrió con el cubreobjetos se observó en el
microscopio con objetivos de 40x, luego se aplicó una gota de lugol, por
capilaridad y se observó nuevamente.
Y por último se realizó el montaje de tejido adiposo (tejido graso animal) Se
tomó una muestra delgada del tejido graso animal, y se colocó en el
portaobjetos, se le agrego una gota del colorante sudan III y se observó en el
microscopio con objetivos 40x.

ANALISIS Y RESULTADOS

Hifas de hongos: los hongos pueden desarrollarse sobre cualquier medio o

superficie, se reproducen por medio de esporas.

En esta muestra obtenida del moho del pan con el objetivo de 10x se
observaron esporas; son típicamente unicelulares formadas tras un proceso de
división; desarrollan directa o indirectamente un organismo sin unión a otra
célula para la observación d estas (células fúngicas) se aplicó el método de
preparación no coloreada utilizando la solución salina isotónica como diluyente
con el fin de proporcionar una concentración adecuada para la observación al
microscopio.

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Con el objetivo 40x aumentándose el tamaño de la imagen se observó
además de las esporas un conidióforo este es un estructura microscópica
especializada en la producción asexual de miles de esporas llamada conidios.

40x

Levaduras
La levadura es un organismo eucariota capaz de producir descomposición a
través de la fermentación de cualquier cuerpo orgánico la mayoría se multiplica
por gemación.

La técnica de coloración utilizada fue la tinción simple ya que solo se usó el

azul de metileno con el objetivo de 10x se observaron que estas células están
algunas agrupadas formando cadenas y habían otras aisladas debido al efecto
del colorante se tornaron azules.

40x
Luego cuando se aumentó el tamaño de la imagen con el objetivo de 40x se
observaron en cadenas, agrupadas y en formas circular notándose su forma
circular.

Células epiteliales humanas

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El epitelio es el tejido formados por una o varias capas de célula al utilizar el
método de tinción simple aplicando un solo colorante básico (solución verde
Jano ) el cual en esta práctica se usó para la tinción de mitocondrias.

Con el objetivo 10x se observaron estructuras de dicha célula su aspecto

plano irregular con la presencia de su núcleo rodeado de su membrana
plasmática y citoplasma.

40x

Con el objetivo de 40x al aumentar la amplitud de la imagen se observa más

detalladamente la estructura de la célula, el núcleo se ve más definido al igual
que su membrana plasmática y su citoplasma.

Leucoplastos en plátano
Los leucoplastos forman parte de los plásmidos y estos se encargan de
almacenar almidón o e algunas ocasiones proteínas o aceites. Para la
observación de estos se usó la técnica de tinción simple aplicando solución de
lugol como colorantes para la identificación de estos ya que sirve para
determinar la presencia de almidones. Con el objetivo 10x se observan una
cierta cantidad de estas células de formas ovaladas estas células se tiñeron de
azul-violeta intenso.

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 40x
Con el objetivo de 40x se detalla mucho mejor la célula su membrana y el
centro plástico.

Cloroplastos en hojas de elodea

los cloroplastos es el orgánulo donde se realiza la fotosíntesis los organismos
eucariotas autótrofos.

Con el objetivo 10x se observaron estructuras adheridas unas con otras

formas rectangular pero de líneas irregulares que encajan entre si notándose
su pared celular.

40x

Con el objetivo 40x a mayor aumento se identificó el orgánulo cloroplastos

(cloroplastos) en formas de puntos verdes que se encontraban en los bordes y
algunos en el centro de dicha célula vegetal en este procedimiento no se
lleva a cabo ningún tipo de coloración.

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Núcleos de la cebolla sin lugol

40 x

40x

En la observación del núcleo de la epidermis

de la cebolla primeramente con la muestra en fresco, se determinó la
membrana usando el objetivo de 40x y se denoto el núcleo pero no tan

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definido. Al agregar la solución diluida de lugol, como técnica de coloración
simple, con el objetivo de 40x se pudo identificar su núcleo, su membrana
plasmática, y el citoplasma con mayor definición. A diferencia de la
observación sin lugol; debido a la coloración dada por este se pudo identificar
con mayor facilidad el núcleo y la demás estructura celular de esta muestra;
estas células presentan un solo núcleo, por lo tanto son monoclueadas.

Tejido adiposo
El tejido adiposo es un tejido conjuntivo especializado en el almacenamiento de
lípidos. Se puede considerar como un tejido conectivo un tanto atípico puesto
que posee muy poca matriz extracelular. Mediante la técnica de coloración
simple, usando como colorante el Sudan III.

40x

Se observó con el objetivo 10X la presencia de grasa blanca de acuerdo con

sus características celular grande, de color blanco, y además poseen una sola
y gran gota de grasa, la cual ocupa prácticamente todo el citoplasma. También
se observa la presencia de grasa parda; esta presenta una coloración rosa,
numerosas gotas de lípidos, son más pequeños.

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Con el objetivo 40X se observaron gran cantidad de grasa blanca y poca
presencia de grasa parda, por medio del colorante se pudo identificar su
composición lipídica.

CONCLUSION
Notándose que el estudio de las células a nivel de microscopio resulta difícil,
por la falta de contraste entre esta y el medio que la rodea; mediante esta
práctica se pudo llevar a cabo el uso de los distintos colorantes, por medio de
las diferentes técnicas de tinción,  Se utilizan normalmente para teñir a las
células y componentes tisulares que van a ser observados con el microscopio
óptico y por ello se realizan habitualmente sobre secciones de tejido.
Obteniendo resultados mucho mejores; ya que se pudo observar cada
estructura de las diferentes células (fúngicas, animal, vegetal) pudiendo asi,
establecer diferencias y relaciones entre estas.

ANEXOS
Preguntas complementarias,
1. ¿para qué son utilizados los colorantes vitales?

Colorantes vitales. Son aquellos que ejercen su acción en las partes vivas
de las células sin alterar su metabolismo. Son preferidos los colorantes
vitales que son retenidos por la célula durante el tiempo necesario para
poder realizar la observación, El proceso se llama tinción y se hace sólo
para su estudio, ya que el colorante lo que hace, es resaltar sus relieves
estructurales .
2. ¿Qué colorantes se emplean para hacer coloraciones simples?

Las tinciones se basan en la utilización de colorantes que pueden

clasificarse como naturales o sintéticos. Los naturales se utilizan
principalmente con fines histológicos. La mayor parte de los colorantes que
se utilizan para teñir bacterias son sintéticos, muchos de ellos son las
anilinas y los derivados del benceno, se habla de coloración simple cuando
una muestra extendida se tiñe con un solo colorante. Si la preparación se
tiñe con safranina, las bacterias adquirirán un color rojo, si se tiñen de azul
de metileno se teñirán de azul, es decir adquirirán el color del único
colorante que se utilizó. Este proceso permite distinguir la morfología y
estructura internas de la célula bacteriana, como por ejemplo, la presencia
de endosporas bacterianas. Existen coloraciones especiales que permiten
poner en manifiesto estructuras bacterianas como por ejemplo: flagelos,
capsulas, endosporas, etc. (Pérez, 2003).
3. ¿A qué se refiere una tinción negativa?

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 Es el reverso del procedimiento de tinción usual: las células se dejan sin
teñir pero se colorea un cambio el medio que las rodea. Lo que se ve, por
tanto, es el perfil de las células. La sustancia utilizada para la tinción
negativa es un material opaco que no tiene afinidad por los constituyentes
celulares y que simplemente rodea las células, tal como la tinta china (que
es una suspensión de partículas de carbono coloidal) o la nigrosina (un colorante
negro insoluble en agua). La tinción negativa es un modo satisfactorio de aumentar
el contraste de las células en microscopia óptica, pero su máxima utilidad está en
revelar la presencia de cápsulas alrededor de las células bacterianas.
Tinción negativa es una técnica de microscopía que permite contrastar las
muestras mediante una sustancia opaca a los fotones (microscopía óptica) o a los
electrones (microscopía electrónica). En el primer caso, se emplea nigrosina o tinta
china; para el caso de bacterias que esporulan, esta técnica permite visualizar las
esporas como entes refringentes sobre un campo de fondo oscuro.

4. ¿Cómo actúa un colorante ácido y un colorante básico?

Los colorantes ácidos tiñen de rosa estructuras cargadas positivamente que

se denominan estructuras eosinòfilo, los ácidos le dan color azul fuerte a las
células blancas llamadas basófilos.

Los colorantes básicos tiñen de morado estructuras cargadas

negativamente, que se llaman basófilos, los básicos les dan color naranja a
las células blancas llamadas eosinòfilo
El ejemplo más tradicional es la tinción hematoxilina (colorante básico),
eosina (colorante ácido): los citoplasmas salen más o menos eosinòfilo (de
color rosa y los núcleos basófilos (morados)
Esto se debe a que tiene afinidad por el colorante acido o básica.
5. ¿De los colorantes empleados cuales son ácidos y cuales son
básicos?

Azul de metileno: colorante básico

Verde Jano: colorante básico.

BIBLIOGRAFIA

Práctica de laboratorio 08/09/17

Jessica, R. (2014 de octubre de 2014). microbiologia. Obtenido de
http://microbiologia3bequipo5.blogspot.com.co/2014/10/metodos-y-tecnicas-de-
tincion.html

Vigo, F. d. (13 de 01 de 2017). Tinciones generales. Obtenido de

https://mmegias.webs.uvigo.es/6-tecnicas/5-general.php

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