3a. La provitamina A se determina como β-caroteno.

Para lo cual se hace una

extracción previa, se purifica por cromatografía de columna y el extracto se diluye
a un volumen conocido y se mide a 450 nm. Para determinar el contenido de esta
sustancia en un alimento se preparó la siguiente curva de calibración:

Estánda Concentración (molar) Absorbancia

r

1 0 0,0

2 0,3 0,13

3 0,5 0,23

4 0,7 0,36

5 0,9 0,48

6 1,0 0,62

A partir de los datos de la tabla:

- Grafique los datos experimentales de absorbancia en función de la

concentración.

Absorbancia Vs Concentración
0.7
0.62
0.6
0.48
0.5
Absorbancia

0.4 0.36

0.3 0.23
0.2 0.13
0.1
0
0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2
Concentración

- Utilice el método de mínimos cuadrados para realizar un ajuste lineal que le

permita determinar la ecuación correspondiente.
Tabla 1. Método de mínimos cuadrados.
X Y
Concentrac Absorban X*Y X^2
ión (Molar) cia
0 0 0 0
0,3 0,13 0,039 0,09
0,5 0,23 0,115 0,25
0,7 0,36 0,252 0,49
0,9 0,48 0,432 0,81
1 0,62 0,62 1
3,4 1,82 1,458 2,64

Los valores que se encuentran subrayados en color azul aguamarina

corresponden a la sumatoria de las columnas.
y=mx+b
m=∑ XY −¿ ¿ ¿
n=Número de datos
3,4 ×1,82
1,458−
6
m=
3,42
2,64−
6
m=0,5981

b=
∑ Y −m× ∑ X
n n
1,82 3,4
b= −0,5981×
6 6
b=−0,0356

y=0,598 x−0,0356

3b. A partir de la curva de calibración del numeral anterior se requiere calcular la

concentración de provitamina A en una muestra para lo cual se tomó 10 mL y se
llevó a un volumen de 100 mL. La lectura de absorbancia de esta solución fue de
0,21. Determine la concentración de provitamina A en la muestra.
X: Concentración (molar)
Y: Absorbancia
y=0,598 x−0,0356
y +0,0356
x=
0,598
0,21+0,0356
x=
0,598
x=0,4106

Para una absorbancia de 0,21 la concentración molar de provitamina A es de

0,4106.
3c. Cuáles son las propiedades que debe tener una molécula para que sea posible
cuantificarla por espectroscopia UV-Vis?
Teniendo en cuenta que la espectroscopia UV-Vis es uno de los métodos más
conocidos en técnicas analíticas ya que es es muy versátil y capaz de detectar
casi cualquier molécula. Con espectroscopia UV-Vis, la luz de UV-Vis se pasa a
través de una muestra y se mide la Transmitancia de la luz por una muestra. De la
Transmitancia (T), la absorbancia se puede calcular como A =-log (T).
Este tipo de espectrofotometría se utiliza de manera cualitativa para identificar
grupos funcionales o confirmar la identidad de un compuesto, así mismo, se utiliza
de forma cuantitativa para conocer la relación que guarda la concentración del
analito con la absorbancia de la ley de Beer. Otras aplicaciones son para
cuantificar la cantidad de ADN o proteínas en una muestra, para análisis de aguas
y como un detector para muchos tipos de cromatografía.
[ CITATION Uni07 \l 9226 ]

Las propiedades que una molécula debe tener para que sea posible cuantificarla
por espectroscopia UV-vis son principalmente:
- Contengan un cromoforo, es decir, es una sustancia que tiene muchos
electrones capaces de absorber energía o luz visible, y excitarse para así
emitir diversos colores.
- Capacidad de las moléculas para absorber radiaciones, entre ellas las
radiaciones dentro del espectro UV-visible.
- Habitualmente la espectroscopia UV-visible se utiliza en compuestos que
contienen iones metálicos de transición y compuestos orgánicos muy
conjugados.
[ CITATION Día02 \l 9226 ]
Para dar una mejor explicación de esto, se requiere conocer de las transiciones
electrónicas y con esto se conoce que tipo de compuestos pueden ser analizados
en cada región y los derivados de estos.
- Transiciones σσ*. Se presentan en todos los compuestos orgánicos. Son en
general de gran energía e intensidad.

- Transiciones σπ* y πσ*. Son posibles solo en compuestos insaturados. Son

transiciones de baja intensidad en el UV lejano.

- Transiciones nσ*. Se presentan en compuestos con heteroátomos (O, N, S,

Hal), generalmente en la región cercana a los 200 nm.

- Transiciones ππ*. Presentes solo en compuestos insaturados. En ausencia

de conjugación estas transiciones se presentan en UV de vacío.

- Transiciones nπ*. Presentes en compuestos insaturados con heteroátomos

(grupos carbonilo, nitro, azo, tiocarbonilo). Dan lugar a bandas débiles es
decir, de baja energía de transición.

[CITATION Yol \l 9226 ]

3d. ¿Qué papel juega el coeficiente de partición del compuesto en la separación

por cromatografía?
El coeficiente de repartición se define como la razón de la concentración de una
especie química o soluto entre dos medios en equilibrio. El medio puede ser un
gas como el aire; un líquido como el agua o el aceite; o una mezcla compleja
como la sangre u otros tejidos.
[ CITATION Gab19 \l 9226 ]

Este coeficiente es de suma importancia en la que se conoce como cromatografía

de reparto debido a que esta va en función del coeficiente de reparto Kd, y se
basa en la separación de una mezcla de sustancias mediante el reparto existente
entre la fase móvil (líquido o gas) y la fase estacionaria (líquido) soportada sobre
un sólido adecuado.
Es importante conocer este coeficiente para aplicar el tipo de cromatografía
mencionado en la separación de mezclas de compuestos de polaridad media y
alta, como por ejemplo las cromatografías sobre papel, sílice hidratada y
cromatografía liquida de alta eficacia en fase reversa.
[ CITATION Lui02 \l 9226 ]
Entonces, cuando un soluto entra al sistema cromatográfico inmediatamente se
reparte o distribuye entre la fase móvil y la estacionaria. Si la fase móvil se para en
cualquier momento, el soluto establece un equilibrio de distribución entre las dos
fases.
La concentración en fase está dada por el coeficiente termodinámico de reparto:
K = Cs/Cm
Donde Cs y Cm son las concentraciones de soluto en la fase estacionaria y móvil,
respectivamente. Cuando K = 1, el soluto se encuentra igualmente distribuido
entre las dos fases. El coeficiente de reparto determina la velocidad promedio de
cada zona de soluto conforme la fase móvil avanza a lo largo de la columna.
[ CITATION Gom08 \l 9226 ]

Bibliografía

Bacelona, U. A. (2007). UAB. Obtenido de

http://sct.uab.cat/saq/es/content/espectrofotometria-uv-vis
Bolivar, G. (2019). Lifeder. Obtenido de https://www.lifeder.com/coeficiente-
particion/
Díaz, N. A. (2002). Espectrofometría: Espectros de absorción y cuantificación
colorimétrica de biomoléculas . Cordoba . Obtenido de
https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-
mol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETRIA.pdf
Gomis Yagües, V. (2008). Cromatografía: principios generales. Universidad de
Alicante. Departamento de Ingeniería Química.
Luis. (2002). Conceptos fundamentales de cromatografía.
Rios, Y. (2015). Obtenido de Espectroscopia UV-visible: http://www.yolanda-
rios.net/materiales/UVTeoria.pdf