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INFORME DE ESPECTROFOTOMETRIA

PRESENTADO POR
Guerrero Caroline
Toloza Karina

DOCENTE
Deivis Gutierrez.

PROGRAMA
Microbiologia.
Universidad popular del César
2020-1
RESUMEN
La espectrofotometría es una de las técnicas más ampliadas y frecuentemente
empleadas en el análisis químico que permite determinar la concentración de un
compuesto en solución, está basada en el proceso de absorción de la radiación
ultravioleta visible por una molécula (Fernández. A 2018) Es posible gracias al
espectrofotómetro que mide la absorbancia de una determinada muestra. El
objetivo de esta práctica es conocer la longitud de onda ideal para trabajar con
nuestra muestra, el procedimiento realizado para ello fue realizar soluciones y se
pasó a medirlas al espectrofotómetro con una determinada longitud de onda,
nuestro blanco fue el agua. Los resultados obtenidos en esta practica fueron los
esperados ya que
Esta practica fue de gran utilidad ya que nos permitio conocer a que longitud de
onda se puede trabajar con nuestra solucion
ANALISIS DE RESULTADOS
ACTIVIDAD 1

Análisis cualitativo de resultados: Observa la relación entre el color de las


cubetas y el valor de absorbancia. Comparando las 3 medidas, ¿observas alguna
dependencia entre el valor de absorbancia y la mayor o menor concentración de
pNF en la cubeta?
Rta:
La cubeta 1, con el color más transparente, ya que tiene mayor cantidad de agua y
la menor de pNF obtuvo la menor medida de absorbancia.
La cubeta 2 con un amarillo pálido por tener mayor cantidad de pNF y la menor
cantidad de agua, obtuvo la segunda medida más alta.
La cubeta 3 solo con pNF Obtuvo la medida más alta de absorbancia.
Por lo que se puede observar que mientras mayor es la cantidad de pNF usada, la
medida de absorbancia es directamente proporcional.

Análisis cuantitativo de resultados: Calcula la concentración de pNF en la


mezcla final de cada cubeta, sabiendo que la concentración en la botella es de 80
µM pNF. Prepara una tabla con los datos y traza una gráfica representando A
frente a C. ¿Cómo puedes describir lo que observas?
SE UTILIZA LA FORMULA: C1. V1= C2. V2

Cubeta
1: 80x1
= C2 C2 = C1. V1 26,67
uM
V2
3
Cubeta 2: 80x2 = C2 53,33 uM
3
Cubeta 3: 80x3 = C2 80 uM
3

Chart Title
1.8
1.6
1.4 f(x) = 0.02 x − 0.01
R² = 1
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
20 30 40 50 60 70 80 90

Tabla de residuo
x y yres residuos residuos absolutos
26,67 0,527 0,3123063 0,2146936 0,214693617
8 2
53,33 1 0,6295603 0,4274396 0,427439617
8 2
80 2 0,9469333 0,6430666 0,643066617
8 2
1,8888001 1,2851998
5 5

y= mx + b
m 0,0119
b -0,00506662
r2 1

ACTIVIDAD 2

Análisis cualitativo de resultados: Observa la relación entre el color de las


cubetas y el valor de absorbancia. Comparando entre sí las medidas, ¿observas
alguna dependencia entre la absorbancia y la mayor o menor concentración de
proteínas en la cubeta?
Rta: La cubeta 1, sin cantidad de proteína Bradford y con mayor cantidad de
reactivo Bradford que se trabajó como un blanco obtuvo la menor medida de
absorbancia.
La cubeta 2 con 1 ml de proteína Bradford y 2 ml de reactivo Bradford, obtuvo la
segunda medida más alta.
La cubeta 3 solo con más cantidad de proteína Bradford obtuvo más alta de
absorbancia.
Por lo que se puede observar que mientras mayor es la cantidad de proteína
Bradford usada, la medida de absorbancia es directamente proporcional.

Análisis cuantitativo de resultados: Calcula la concentración de proteínas en la


mezcla final de cada cubeta, sabiendo que la concentración en la botella es de
800 mg/ℓ. Prepara una tabla con los datos y traza una gráfica representando A
frente a C. ¿Cómo puedes describir lo que observas?
800X1/3= 266.6
800X273=533.3

Chart Title
0.4

0.35 f(x) = 0 x + 0
R² = 1
0.3

0.25

0.2

0.15

0.1

0.05

0
0 100 200 300 400 500 600
Tabla de residuos

x y yres residuos residuos


absolutos
0 0 0,0029758 -0,00297587 0,002975868
7
266,6 0 0,1895958 0,00340413 0,003404132
7
533 0 0,3760758 -0,00807587 0,008075868
7
0,5686476 -0,00764761
1

y= mx + b
m 0,0007
b 0,0029758
7
r2 0,9992

Chart Title
0.01

0
0 100 200 300 400 500 600
0

-0.01

-0.01

-0.01

ACTIVIDAD 2 a
Análisis cualitativo de resultados: Observa la relación entre el color de las
cubetas y el valor de absorbancia. Comparando entre sí las medidas, ¿observas
alguna dependencia entre la absorbancia y la mayor o menor concentración de
proteínas en la cubeta?
Rta:
La cubeta 1, sin cantidad de proteína Bradford y con 1 ml de reactivo Bradford y 2
ml de agua que se trabajó como un blanco obtuvo la menor medida de
absorbancia.
La cubeta 2 con 1 ml de proteína Bradford y 1 ml de reactivo Bradford, y un 1 ml
de agua obtuvo la segunda medida más alta.
La cubeta 3 solo con más cantidad de proteína Bradford, 1 ml de reactivo Bradford
y nada de agua obtuvo más alta de absorbancia.
Por lo que se puede observar que mientras mayor es la cantidad de proteína
Bradford usada, la medida de absorbancia es directamente proporcional.

Análisis cuantitativo de resultados: Calcula la concentración de proteínas en la


mezcla final de cada cubeta, sabiendo que la concentración en la botella es de
800 mg/ℓ. Prepara una tabla con los datos y traza una gráfica representando A
frente a C. ¿Cómo puedes describir lo que observas?
800X1/3= 266.6
800X273=533.3

Chart Title
0.7
0.6 f(x) = 0 x − 0
R² = 1
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 100 200 300 400 500 600

Tabla de residuo

x y yres residuos residuos


absolutos
0 0 -0,00164635 0,0016463 0,001646349
5
266,6 0 0,31827365 0,0067263 0,006726349
5
533,3 1 0,63831365 0,0216863 0,021686349
5
0,95494095 0,0300590
5

y= mx + b
m 0,0012
b -0,00164635
r2 0,9999

Chart Title
12
10
8
6
4
2
0
0 2 4 6 8 10 12

ACTIVIDAD 3
Cubeta 1 Cubeta 2 Cubeta 3

Análisis cualitativo de resultados: Compara los 3 espectros. ¿Qué efecto se


observa al diluir la hemoglobina de partida? ¿Cambia la posición (λ) de los picos
de absorción máxima? Describe lo que observas.
Rta:
Sensibilidad más alta es la cubeta 3.
Sensibilidad ni muy alta ni muy baja es la cubeta 2.
Sensibilidad menor es la cubeta.1
entre más concentración más pronunciado es el pico.
2ª medida: Observando el espectro, anota dos longitudes de onda (de la región
visible, no ultravioleta) en las que haya un pico (un máximo local de absorción). A
continuación, mide y anota la absorbancia de las 3 cubetas a cada una de esas
dos longitudes de onda. Representa tus resultados en una gráfica, considerando
que la concentración de partida de hemoglobina (en la botella) es de 200 mg/ℓ.

580
0.16
0.14
410
f(x) = 0 x − 0.01
0.12 R² = 1 1.6
0.1 1.4 f(x) = 0.01 x − 0.62
0.08 1.2 R² = 0.97
0.06 1
0.04 0.8
0.02 0.6
0 0.4
40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 0.2
0
40 60 80 100 120 140 160 180 200 220

Tabla de residuo
410
x y yres residuos residuos
absolutos
66,6 0,016 0,088194 - 0,072194845
85 0,072194
85
133,33 1 0,795545 0,144454 0,144454663
34 66
200 1 1,502259 - 0,072259818
82 0,072259
82
2,386 -5,6899E-
16

y= mx +
b
m 0,010600
19
b -
0,617777
62
r2 0,9696

580
x y yres residuos residuos
absolutos
66,6 0,043 0,0881948 -0,04519485 0,045194845
5
133,33 0 0,7955453 -0,70554534 0,705545337
4
200 0 1,5022598 -1,35725982 1,357259818
2
2,386 -2,108

y= mx + b
m 0,00076461
b -0,00926331
r2
0.2 580
410
0,99896455
0
40 60 80 100 120 140 160 180 200 220
-0.2
0.1
-0.4
-0.6
-0.8
0
-1
40 60 80 100 120 140 160 180 200 220
-1.2
-1.4
-1.6
Análisis cuantitativo de resultados: ¿Cómo puedes describir las conclusiones
de lo observado? ¿Cuál de las longitudes de onda sería útil para determinar la
concentración de muestras problema de hemoglobina?
Rta:
Basándose en el valor de r2 que indica la linealidad de las rectas, se escoge el de
valor cercano a 1, ya que indica una menor dispersión de los datos, es decir mayor
precisión. Por lo tanto, la longitud de onda λ=410 es la mejor elección ya que tiene
un valor que es mayor a la de λ=580

CONCLUSIÓN
Al terminar este informe hemos obtenido conocimientos muy fructíferos, ya que
aplicamos los conocimientos explicados anteriormente por el profesor, entrando en
otro contexto podemos observamos que la absorbancia nos permite conocer y
determinar la concentración de cualquier sustancia siempre y cuando se cumpla
con todos los parámetros. Finalmente comprendimos la importancia de saber
manejar el equipo es de vital importancia para nosotros como futuros
microbiólogos ya que está asociado a nuestra cotidianidad

BIBLIOGRAFIA

Fernández. A 2018, Espectros de absorción.


https://knoow.net/es/ciencias-tierra-vida/biologia-es/espectro-de-absorcion/