PRÁCTICA NÚMERO 3

LEY DE BEER: CURVA DE CALIBRACIÓN

OBJETIVOS

1. Elaborar una curva de calibración a partir de la medición de la absorbancia de soluciones

estándar de sulfato de cobre(II).
2. Determinar la concentración de una solución de concentración desconocida de sulfato de
cobre(II) a partir de la curva de calibración.

INTRODUCCIÓN

Un gran número de moléculas, iones y complejos son capaces de absorber luz a una longitud
de onda dada en la región ultravioleta y/o visible. La Ley de Beer establece que la absorbancia
de una muestra, a determinada longitud de onda, depende de la cantidad de especie
absorbente con la que se encuentra el haz de luz al pasar por la muestra. La ley dice que tres
fenómenos son responsables de disminuir la cantidad de luz después que esta pasa por algún
medio que absorba:
1) La cantidad (concentración) de materia que absorbe en el medio.
2) La distancia que la luz tiene que viajar a través de la muestra (trayecto óptico).
3) La probabilidad de que el fotón de cierta longitud de onda sea absorbido por el material
(coeficiente de absorción o de extinción molar).
La expresión matemática de la ley de Beer es:
A = log(I0/I) = bc (1)
Donde:
A = absorbancia
I0 = intensidad de la luz antes de entrar a la celda
I = intensidad de la luz después de salir de la celda
c = concentración molar del soluto
b = longitud de la celda (cm)
= coeficiente de extinción molar

En la Figura 3.1A se muestran los espectros de absorción de soluciones de diferente

concentración de un determinado compuesto. Como se puede observar, este analito presenta
tres máximos de absorción (393, 426 y 491 nm). En general, cuando se utilizan soluciones de
concentración adecuada, la ley de Beer se obedece en forma rigurosa para una especie
absorbente. La gráfica de concentración vs. absorbancia a uno de estos máximos se conoce
como curva de calibración (Figura 3.1B). Cuando existe un comportamiento lineal entre ambas

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variables, es posible realizar un ajuste lineal, el cual conduce a la ecuación para una recta y =
mx + b. 2

0.700
-6
1.00X10 M
0.600 (A) -6
(B)
3.00X10 M 0.600
-6
0.500 5.00X10 M
-6
0.500
7.00X10 M
0.400 -5
0.400
1.00X10 M

A393
0.300 0.300

0.200 0.200
y = 64217x + 0.0135
0.100 0.100 R² = 0.995

0.000 0.000
400 450 500 550 0.00E+00 3.00E-06 6.00E-06 9.00E-06
(nm) c (M)

Figura 3.1. (A) Espectros de absorción UV-Vis de soluciones de diferente concentración del
compuesto. (B) Curva de calibración utilizando el máximo de absorción a 393 nm. 3

A partir de la ecuación de la recta se puede determinar la concentración (x) en una

muestra desconocida mediante la lectura de la absorbancia a esa longitud de onda, por ejemplo,
si una solución presenta una absorbancia de 0.300, el cálculo indica que su concentración es
4.46 X10-6 M.

EQUIPO, MATERIALES Y REACTIVOS

a) Equipo
Espectrofotómetro ultravioleta visible
Computadora portátil por equipo

b) Materiales
2 vasos de precipitados de 100 mL
2 celdas de vidrio o de plástico
5 tubos de ensayo de 15 X 125 mm
1 gradilla
2 pipetas volumétricas de 1 mL
2 pipetas volumétricas de 2 mL
1 pipeta volumétrica de 5 mL

2 Para la ecuación de la ley de Beer, y es la absorbancia, x es la concentración, m es la pendiente (que corresponde al producto
b y b es el intercepto en el eje de las y (teóricamente b es igual a cero, pero el error experimental lo aleja ligeramente de ese
valor).
3 El análisis de regresión lineal es una técnica estadística utilizada para estudiar la relación entre variables. El término R2,

mostrado en la gráfica, se conoce como coeficiente de determinación y se considera como un índice para medir el grado de
relación de dos variables cuantitativas. Si R2 = 1 existe una correlación perfecta, mientras que un valor alejado de 1 indica una
baja correlación.

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 1 piceta
1 pipetor o jeringa para pipeta
7 pipetas Pasteur
1 agitador
Paño suave para celdas
1 recipiente para residuos

c) Reactivos
Solución de CuSO4 0.100 M
Solución problema de CuSO4
Agua destilada

SEGURIDAD

Usted trabajará con sulfato de cobre(II) pentahidratado, CuSO4·5H2O, el cual es irritante

al contacto con la piel y vías respiratorias; es moderadamente tóxico por ingestión e
inhalación.
Utilice lentes, bata y guantes (si es de piel sensible).
Para mayor información sobre los riesgos de este compuesto consulte: Flinn Scientific,
Inc. Chemical and Biological Catalog Reference Manual, P.O. Box 219, Batavia, IL
60510.

PROCEDIMIENTO

1. Encender el espectrofotómetro 15 minutos antes de iniciar las lecturas.

2. Seleccionar la opción d
ingresar la longitud de onda de trabajo (para esta práctica, 810 nm).
3. Hacer el blanco utilizando el mismo disolvente en el que se prepararon las disoluciones.
4. Colocar aproximadamente 15 mL de la solución estándar de CuSO4 0.100 M en un vaso de
precipitado y aproximadamente 15 mL de agua destilada en otro vaso de precipitado.
5. Etiquetar cinco tubos de ensayo limpios y secos, 1-5 y preparar las soluciones estándar de
acuerdo a la siguiente tabla, asegurándose de mezclar muy bien con el agitador y de limpiar
el agitador entre cada uso.

Tubo mL de agua destilada mL de CuSO4 0.100 M

1 4.00 1.00
2 3.00 2.00
3 2.00 3.00
4 1.00 4.00
5 0.00 5.00

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6. Leer la absorbancia a 810 nm de las cinco soluciones estándar y de la muestra problema e
introducir los valores obtenidos en la tabla de resultados.
Manejo de Residuos
7. Una vez terminada la práctica, colocar las soluciones en el recipiente adecuado para
residuos.

RESULTADOS

Anotar los valores de absorbancia de cada disolución en la siguiente tabla:

Tubo Concentración de CuSO4 (M) Absorbancia
1
2
3
4
5
Muestra problema

ANÁLISIS DE DATOS

1. Calcular la ecuación de la regresión lineal (la línea de mejor ajuste) de absorbancia vs.
concentración para las soluciones estándar de CuSO4 que cumplieron con la ley de Beer
e imprimir una gráfica que muestre los datos y la ecuación de la regresión lineal.
2. Determinar la concentración de la solución desconocida de CuSO 4.
3. Con los datos obtenidos por los demás equipos que recibieron la misma muestra
problema, calcular la incertidumbre del resultado.
4. Describir un método alternativo para determinar la concentración molar de la solución
desconocida CuSO4, utilizando el valor de absorbancia obtenido para una de las
soluciones estándar.

CUESTIONARIO

1. ¿Cuáles son las principales limitaciones de la ley de Beer?

2. El método más ampliamente utilizado para realizar un ajuste lineal es el método de
mínimos cuadrados. Explicar brevemente en que consiste dicho método.

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3. ¿Cómo se ve afectada la absorbancia de una solución si en lugar de utilizar una celda
de 1 cm de paso óptico si se utiliza una celda de 2 cm?
4. Una solución de una muestra problema de concentración 1 mM presenta una
absorbancia de 1.2. Si de esta solución se toman 2 mL y se diluyen a 5 mL ¿cuál será el
valor la absorbancia de la nueva solución?

REFERENCIAS

Modern Analytical Chemistry. David Harvey. 1ª edición. 2000. Editorial Mc Graw-Hill.

Capítulo 20.
Fundamentals of analytical Chemistry. Douglas A. Skoog, Donald M. West, F. James
Holler y Stanley R. Crouch. 9ª edición. 2014. Cengage. Capítulo 24.
American Society for testing and Materials. Annual book of Standards. 1994.

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