Guía Unificada de Laboratorios Código FLA-23 v.

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Departamento de Bacteriología y Lab. Clínico
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1. Título

Guía 7. Medios Selectivos y diferenciales

2. Objetivo

Familiarizarse con el uso y función de medios especializados para la selección y

diferenciación de bacterias

2.1Objetivos Específicos

- Identificar los componentes de cada uno de los medios de cultivo ensayados los cuales
permiten la selección y diferenciación de microorganismos.
- Interpretar las reacciones bioquímicas asociadas a los componentes de los medios
selectivos y diferenciales durante el crecimiento bacteriano.
- Reconocer las características metabólicas (carácter fenotípico clásico) que permiten
una identificación microbiológica preliminar.

3. Marco Teórico

Las bacterias son microorganismos muy versátiles que poseen una enorme capacidad de
utilización de diversos compuestos nutritivos, desde moléculas inorgánicas sencillas hasta
compuestos orgánicos complejos. La diferencia en la capacidad del empleo de los
nutrientes constituye parte de las bases para la identificación tradicional de los
microorganismos.
Existen numerosos medios de cultivo que permitirán diferentes propósitos:
 Aislar tipos bacterianos de una población mixta de microorganismos.
 Diferenciar grupos bacterianos cercanamente relacionados, con base en la apariencia
microscópica de las colonias y las reacciones bioquímicas con el medio.
 Identificar microorganismos en diferentes muestras biológicas y no biológicas
 Diferenciar el efecto de sustancias sobre los microorganismos.
 Caracterizar e identificar los microorganismos según su habilidad para producir
cambios químicos en diferentes medios.

Además de permitir a los microorganismos su nutrición y crecimiento un medio de cultivo

puede estar constituido químicamente para obtener un solo propósito o combinar varios
aspectos en un solo medio, aislando grupos específicos de microorganismos y
diferenciándolos de otros morfológica y bioquímicamente semejantes.

Algunos medios empleados para seleccionar y/o diferenciar grupos de bacterias son:

AGAR SALADO MANITOL: Este medio de cultivo contiene altas concentraciones de sal
(7.5% de NaCl), lo cual inhibe el crecimiento de la mayoría de las bacterias diferentes a
los Staphylococcus. El manitol incorporado en el medio, realiza una función diferencial
pues solo algunos Staphylococcus pueden fermentarlo. La adición de rojo de fenol, como
indicador de pH, permite detectar la producción de ácido como resultado de la vía
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fermentativa para el metabolismo del manitol, estos microorganismos forman una zona
amarilla periférica a su crecimiento. Staphylococcus que no fermenten el manitol no
producirán este cambio de coloración.

AGAR MAC CONKEY: La presencia de cristal violeta en su composición permite una

inhibición del crecimiento de organismos Gram positivos permitiendo el aislamiento de
bacterias Gram negativas. La inclusión de lactosa, sales biliares y rojo neutro como
indicador de pH, permite la diferenciación de bacterias entéricas con base en su habilidad
para fermentar la lactosa en dos grandes grupos: fermentadores (bacilos coliformes) y no
fermentadores (bacilos disentérico, tifoideo y paratifoideo) de lactosa. Los
microorganismos entéricos fermentadores de lactosa producen ácido como producto final
de su metabolismo, creciendo con la formación de colonias de color rojo-rosado, si la
cantidad de ácido se producida es en grandes cantidades la zona periférica al crecimiento
apreciará como una zona roja causada por la precipitación de las sales biliares y la
absorción del rojo neutro. Las bacterias entéricas no fermentadoras de lactosa, no
producirán ácido formándose colonias incoloras y frecuentemente transparentes.

AGAR EOSINA-AZUL DE METILENO (EMB): Los azúcares lactosa y sacarosa y los

colorantes eosina y azul de metileno permiten la diferenciación entre microorganismos
entéricos fermentadores de lactosa - sacarosa y microorganismos entéricos no
fermentadores, adicional a la identificación de Escherichia coli la cual crece formando
colonias azul oscuro con un brillo verde metálico causado por la gran cantidad de ácido
producido por la fermentación y la precipitación de los colorantes en la superficie de su
crecimiento. Otras bacterias entéricas como las del género Enterobacter, producirán
colonias rosadas, mucoides y densas. Bacterias entéricas que no fermentan la lactosa -
sacarosa crecerán como colonias incoloras, las cuales debido a su transparencia,
parecerán tomar el color vinotinto del medio de cultivo. Este medio también inhibe
parcialmente el crecimiento de microorganismos Gram positivos permitiendo un
crecimiento abundante de los microorganismos Gram negativos, si ambos están
presentes en la muestra.

AGAR XILOSA- LISINA- DESOXICOLATO DE SODIO (XLD): Es un medio selectivo y de

diferencial para el aislamiento y la diferenciación de patógenos entéricos Gram negativos
(Salmonella y Shigella) a partir de muestras clínicas. Es adecuado en especial para el
aislamiento de especies de Shigella.
Utiliza el desoxicolato de sodio como agente selectivo y, por consiguiente, inhibe los
microorganismos Gram positivos. La xilosa se incorpora en el medio dado que la
fermentan prácticamente todos los entéricos, excepto Shigella, y esta propiedad hace
posible la diferenciación de dicha especie. La lisina se incluye para permitir la
diferenciación del grupo Salmonella de los organismos no patógenos, dado que, sin lisina,
Salmonella fermentaría rápidamente la xilosa y no se distinguiría de las especies no
patógenas. Cuando Salmonella agota el suministro de xilosa, la lisina es atacada por la
enzima lisina descarboxilasa, lo que genera un cambio a un pH alcalino que imita la
reacción de Shigella. Para evitar el cambio similar en los organismos coliformes positivos
a la lisina, se
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añaden lactosa y sacarosa para producir ácido en exceso. Para aumentar la capacidad de
diferenciación, se incluye un sistema indicador de H2S, formado por tiosulfato sódico y
citrato férrico amónico, para la visualización del ácido sulfhídrico producido, lo que origina
la formación de colonias con centros de color negro. Los organismos no patógenos no
productores de H2S no descarboxilan la lisina; por tanto, la reacción ácida producida por
dichos organismos evita el oscurecimiento de las colonias, lo que sucede sólo con pH
alcalino o neutro
La degradación de ácido de xilosa, lactosa y sacarosa produce un viraje a amarillo del
indicador de pH. El tiosulfato y la sal de hierro revelan la formación de ácido sulfhídrico
por la precipitación de sulfuro de hierro, formando colonias negras. Las bacterias que
decarboxilan la lisina producen cadaverina y se reconocen por la presencia de un color
rojo púrpura en el medio de cultivo, causado por el aumento de pH. Varias de estas
reacciones pueden presentarse simultáneamente o sucesivamente dando lugar a diversos
matices de color del indicador de pH o a un viraje de amarillo a rojo o púrpura durante una
incubación prolongada.

AGAR HECKTOEN ENTERIC (HE): El agar HE es un medio de cultivo selectivo para la

identificación de bacterias intestinales patógenas. La alta concentración de sales biliares
inhibe el desarrollo de todas las bacterias Gram positivas. La fucsina ácida reacciona con
el Azul de bromotimol, virando a amarillo al bajar el pH del medio por acción de los ácidos
que se pueden producir a partir de la fermentación de los tres hidratos de carbono que
contiene el medio (salicina, lactosa, sacarosa). La combinación de tiosulfato y una sal de
hierro dan una coloración negra a las colonias H2S positivas.
Las bacterias fermentadoras rápidas de lactosa forman colonias de color naranja brillante
a rosa salmón.
Las colonias de las bacterias no fermentadoras de lactosa, sacarosa, salicina y
productoras de H2S son de color azul verdoso con típicos centros negros por el gas H2S.
Las colonias de las bacterias no fermentadoras de lactosa, sacarosa, salicina; no
productoras de H2S son verde azulosas.

AGAR SHIGELLA-SALMONELLA (SS): Es un medio de cultivo selectivo y diferencial. La

selectividad, está dada por la sales biliares y el verde brillante, que inhiben el desarrollo
de bacterias Gram positivas, de la mayoría de los coliformes y el desarrollo invasor de
Proteus spp. Es diferencial debido a la fermentación de la lactosa, y a la formación de
ácido sulfhídrico a partir del tiosulfato de sodio.
Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar, acidifican
el medio haciendo virar al rojo el indicador de pH, obteniéndose colonias rosadas o rojas
sobre un fondo rojizo. Salmonella, Shigella y otros microorganismos no fermentadores de
lactosa, crecen bien en el medio de cultivo, y producen colonias transparentes. La
producción de ácido sulfhídrico se evidencia como colonias con centro negro debido a la
formación de sulfuro de hierro.

AGAR BISMUTO SULFITO (BS): Es un medio utilizado para el aislamiento y

diferenciación de Salmonella typhi. El verde brillante y el Bismuto sulfito inhiben
considerablemente la microbiota acompañante, el sulfato ferroso es un indicador de la
producción de sulfuro de hidrogeno generada por colonias de Salmonella H2S positivas.
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Generalmente, esta reacción provoca un precipitado marrón o negro en el medio y una

colonia con brillo metálico negro o verde

4. Materiales, equipos e Insumos

Equipos:
Incubadora

Materiales:
 Asas bacteriológicas
 Cinta de enmascarar
 Mechero de bunsen

5. Reactivos y Medios de cultivo

 Cultivos bacterianos en medios sólidos y líquidos
 Agar Salado Manitol
 Agar Mac Conkey (McK)
 Agar Eosina - Azul de Metileno (EMB)
 Agar Xilosa Lisina Desoxicolato (XLD)
 Agar Hecktoen Entérico (HE)
 Agar Shigella-Salmonella (SS)
 Agar Bismuto sulfito (BS)

6. Procedimiento
1. Reconozca e identifique la composición, apariencia y color de cada uno de los medios
de cultivo a emplear.
2. Siembre cada uno de los medios de cultivo por agotamiento con las cepas bacterianas
entregadas por el docente, incube a 37C por 24 horas
3. Lea los resultados: Analice el crecimiento observado tomando como referencia el
catálogo del proveedor del medio de cultivo, lea las reacciones bioquímicas que
ocurrieron en cada uno de los medios

7. Nivel de Riesgo

Nivel 2 (Riesgo Medio)

8. Bibliografía

BROOKS Geo F., Batel Janet S., Morse Stephen A., Microbiología Médica de Jawetz,
Melnick y Adelberg. Editorial Manual Moderno. 26ª Edición.2014.
CULTIMED. Manual básico de Microbiología en:
http://www.ictsl.net/downloads/microbiologia.pdf
http://www.merckmillipore.com/CO/es/products/industrial-microbiology/culture-
media/dLWb.qB.5kgAAAFAX8JkiQpx,nav
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9. Anexos

CONSULTA
1. Qué uso tienen en microbiología los siguientes medios selectivos y/o diferenciales:
Agar Bilis-Esculina:
Agar chocolate con Telurito de Potasio
Agar Baird Parker

2. Complete el siguiente cuadro sobre los medios de cultivo selectivos y diferenciales

:
MEDIO DE FUENTE DE FUENTE DE INHIBIDOR INDICADOR REACCIONES USO
CULTIVO CARBONO/ AZUFRE DE pH BIOQUÍMICAS
NITROGENO (fermentación,
desaminación,
decarboxilación,
etc.)
MacConkey

EMB

XLD

HE

SS

BS

AGAR
MANITOL
SALADO

AGAR
CETRIMIDE