MÉTODOS DE IONIZACIÓN

EN ESPECTROMETRÍA DE
MASAS Y APLICACIONES,
MÉTODOS DE ANÁLISIS

Cristian López, Martin

Castillo, Laura Ramírez
 Electron Impact (EI):
La forma mas común y clásica de ionización.
Durante la Segunda Guerra Mundial, Arthur Jeffrey Dempster, un físico

estadounidense-canadiense, desarrolló esta técnica y la uso.

Este proceso se da en dos etapas, la primera es donde los analitos son

vaporizados con calor y la segunda es la ionización que ocurre cuando analito

está en fase gaseosa.
Un electrón de muy alta energía (~ 70 eV) bombardea la muestra de fase

gaseosa y el radical catiónico

La principal debilidad es la pérdida del pico de iones moleculares.
 Instrumentación

El cátodo, puede ser un

filamento delgado de
alambre de tungsteno o
renio. Se calienta hasta
emitir electrones, se aplica
un potencial de 70 V para
aumentar su energía
cinética a 70 eV y así
producir iones positivos.
Se aplica un campo
magnético débil en paralelo
al recorrido electrónico,
para repeler las cargas
positivas y acercar un poco
las cargas negativas.
Aplicaciones
• Análisis de materiales
arqueológicos.
• Análisis ambiental.
• Analisis de fluidos
biológicos.
• Forense: Para análisis
de anestesicos por
microextracción en
espacio de cabeza
Ionización Química (Chemical
Es
Ionization CI)
una técnica de ionización suave y muy útil cuando no se observa ion
molecular en el espectro de masas EI. Burnaby Munson y Frank H Field en
1966 introdujeron la ionización química por primera vez.
La ionización es afectada por reacciones sobre la molécula con iones de un

reactivo gaseoso generado por ionización EI.

El reactivo gaseoso (metano, isobutano y amoniaco) es empleado con un

exceso formando iones CH5 + , C4H9+ , y NH4+ respectivamente con

especies predominantes.
 Instrumentación
Para facilitar las reacciones entre los iones-gases, la cámara se
mantiene a prueba de gas con una presión alrededor de 1 torr.​Los
electrones se producen a través de un filamento de metal, que está
hecho de tungsteno, renio o rodio​y viajan a una distancia más larga
en la cámara de ionización, debido a la alta energía que posee. A
diferencia de EI, el imán y la trampa de electrones no son necesarios
para el CI, ya que el haz de electrones no viaja al final de la cámara.
La presión dentro de la cámara se mantiene por debajo de 10−4 torr.6
 Aplicaciones
• Elucidación de compuestos orgánicos, por que elimina la
molécula más estable
• Facilitar la detección del ion molecular.
Ionización por Electrospray
(Electrospray Ionization
Es uno de los métodos de ionización más recientemente desarrollados en
espectrometría de masas. Este método es llevado a cabo a presión
ESI)
atmosférica a diferencia de otros métodos, por lo que se le conoce también
como un método de ionización a temperatura ambiente (atmospheric
pressure ionization API).
La muestra en fase líquida de gran tamaño (biomoléculas) se puede ionizar

usando (ESI)
A menudo se combina con LC (LS-MS)

El analito solvatado se alimenta a través de un tubo capilar con diferencial de

carga muy alto

La gota de carga se evapora e ioniza el analito
Aplicaciones Método APCI

●
Este metodo tiene la ventaja de utilizar cormatografia liquida o
●
de gases de alta eficiencia acoplada
●
Las muestras que no son termoestables o menos polares, son leidos con
●
Mayor facilidad en este metodo
●
Utiliza agua como gas reactivo, en corrientes inertes de Nitrogeno o Helio
●
Funciona bajo presion atmosferica aumentando la colision molecular,
●
Intensificando la mejora de eficiencia y la eficiencia de ionizacion.
●
 TITULO

“Unravelling the Distribution of Secondary

Metabolites in Olea europaea L.: Exhaustive
Characterization of Eight Olive-Tree Derived
Matrices by Complementary Platforms (LC-
ESI/APCI-MS and GC-APCI-MS)”

“Desentrañar la distribución de
secundariaMetabolitos en Olea europaea L .:
ExhaustivoCaracterización de ocho olivos
derivadosMatrices por plataformas
complementarias(LC-ESI / APCI-MS y GC APCI-MS)”
OBJETIVO

Conocer los metabolitos secundarios provenientes del olivo europeo y de

Su diferentes partes de donde se realizaró el muestreo, clasificandolos se
Su contenido, asigandoles una tecnica mas idonea, y demostrar en cada t
De muestra cuales son los metabolitos en mayor presencia.
Contexto
●

el olivo europeo es una arbol que ha existido desde hace mucho tiempo,
de el se ha utilizado sus aceites y extractos con usos terapeuticos, los
cuales han sido validados con documentos cientificos en investigaciones.

Pero todo esta investigacion va a partir que los metodos de extraccion del
olivo genera muy pocos residuos ambientales, por lo que se esta
realizando toda la investigacion de todos los metabolitos que contenga
este planta.
La caracterizacion de cada fraccion de olivo es crucial cuando se buscan
nuevas fuentes de compuestos bioactivos, por lo que se encontraron
compuestos como :

Acidos fenolicos

Secoiridoides

Flavonoides

Lignanos
Metodologia

Para la preparacion de las 8 muestras u 8 matrices consistio en la

aplicación de un protocolo poco selectivo destinado a la extraccion.

Las hojas y los tallos se secaron atemperatura ambiente y almacenado en

un lugar fresco y oscuro.

Se procesó una porción de 5 kg de frutas frescas.por medio de un molino

de aceite para obtener VOO(Virgin olive oil)
 Tratamiento de las matrices

Olmo,L.(2018)Unravelling the Distribution of Secondary Metabolites in Olea

europaea L. pag 11,”recuperado de” https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/302413
Resultados

Los resultados principales para los metodos acomplados a APCI

fue la mejor opción para fenoles simples y analitos relacionados con los
ácidos grasos. También dio buenos resultados para el resto de las clases
químicas consideradas. En particular para lignanos, tocoferoles y
esteroles si se compara con los otros enfoques.

Olmo,L.(2018)Unravelling the Distribution of Secondary Metabolites in

europaea L. pag 7,”recuperado de” https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubm
La interfaz APCI en LC-MS produjo mejor ionización para los compuestos
menos polares. Por lo tanto, en polaridad negativa, un tercio del total del
área del cromatograma correspondió a ácidos grasos y derivados, y casi
los otros dos tercios fueron absorbidos por los ácidos triterpénicos

La distribución de los metabolitos determinados en las ocho muestras

analizadas se puede verificar enTabla ácidos grasos y derivados, así como
ácidos triterpénicos en LC-APCI-MS ( - );y alcoholes triterpénicos,
tocoferoles y esteroles en LC-APCI-MS (+)

Olmo,L.(2018)Unravelling the Distribution of Secondary Metabolites in O

europaea L. pag 9,”recuperado de” https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubme
Fotoionización a Presión Atmosférica
Atmospheric Pressure Photo-Ionization
(APPI)
 Fundamento
La técnica APPI se considera APCI cambiando la descarga de
corona por una lámpara de fotones. Consiste en usar una
lámpara de descarga que genera fotones que tienen la longitud
de onda en el rango ultravioleta. Si los fotones son absorbidos
por moléculas que tienen energía de ionización, que es menor
que la energía de los fotones, puede ocurrir la ionización de las
moléculas.
M + h ν → M +. + e - 
Novedad: En esta metodología se pueden analizar muestras no polares y
también con especies agotadas de oxigeno, con las que el APCI no puede
trabajar.
 Aplicaciones
Ø Se puede usar para varios analitos, ya sea para productos
farmacéuticos, como compuestos no esteroideos o esteroideos, o para
compuestos de bajo peso molecular.
Ø Medio ambiente: Análisis de pesticidas y compuestos
orgánicos volátiles.
Ø Esteroides poco polares, ya que los métodos ESI y APCI son
menos efectivos para éste tipo de compuestos.
 Instrumentación
Novedades respecto a los anteriores métodos es la lampara de
radiación UV y un calentador que se mantenga entre 350°C –
550°C.
Ventajas
• Método capaz de caracterizar y cuantificar moléculas no
polares y poco polares.
• Moléculas de tamaños entre 0 y 2500 unidades.
• Complemento de APCI para masas pequeñas.

Desventajas
• No funciona con compuestos muy polares
• No analiza muestras de más de 2500 unidades.
• Método complejo de ionización (costoso)
 Profiling Murchison Soluble
Organic Matter for New
Organic Compounds with
APPI-
Objetivo and
general: ESI-FT-ICR
Generar MSde los
la descripción química
orgánicos solubles del meteorito de Murchison por aproximación
no dirigida utilizando una fuente de fotoionización a presión
atmosférica (APPI) acoplado a un espectrómetro de masas de
resonancia de ciclotrón iónico de transformada de Fourier de alta
resolución (FT-ICR MS).
 Introducción
Las condritas carbonáceas son un subconjunto importante de
meteoritos. Esta clase de meteoritos se pueden describir con una
composición química comparable a las del sol. Teniendo una visión
molecular de la materia orgánica soluble meteorítica seguramente
aumentará nuestra comprensión y conocimiento sobre la evolución
química de compuestos orgánicos. Según el tipo de roca y las
composiciones elementales e isotópicas, uno de los más conocidos y
estudiados es el meteorito Murchison que cayó en 1969, en
Australia.
Todos los estudios realizados implican ionización por
electropulverización (ESI) o desorción por ionización por
electropulverización. (DESI) fuente en los modos de iones negativos
y positivos. Los menos polares y especies agotadas de oxígeno estos
métodos no necesariamente las detecta, por lo tanto, la descripción
química del material no puede ser el más exhaustivo. Se pueden
emplear algunas fuentes de ionización para tales compuestos
químicos, como la fotoionización a presión atmosférica (APPI), la
ionización química a presión atmosférica (APCI) o ionización por
desorción láser (LDI).
 Metodología
Preparación de la
muestra

30 mg de
Centrifugado Sobrenadante
meteorito

Extracción
Triturado con 1 mL de
con 1 mL de metanol y 40
metanol µL de
tolueno
 Metodología
Condiciones de los equipos
• APPI: La fuente APPI (APPI II, Bruker) se utilizó para realizar la
adquisición en detección positiva modo. La muestra se infundió
con un caudal de 900 µL / h. La temperatura del gas de secado y
el flujo se mantuvo a 200 C y 2 L / min, respectivamente, y la
presión del gas nebulizador fue 2,5 bar. El voltaje capilar era de
3.5 kV y la fuente se calentó a 350 C. El espectro de masas fue
adquirido entre m / z 92 y 1200 y 300 escaneos se acumularon.
• ESI: La fuente de ESI (Apollo II, Bruker Daltonics) se usó tanto en
modo de iones negativos como positivos. Las soluciones
metanólicas se infundieron con un caudal de 120 µL / h. La
temperatura del gas de secado y los caudales se mantuvieron a
180 C y 4 L / min, respectivamente, y la presión del gas
nebulizador fue 2,2 bar. En modo de detección negativa, el voltaje
capilar se ajustó a 4 kV y mientras que, en iones positivos modo,
se mantuvo a 3,6 kV. El espectro de masas de iones negativos
varía de m / z 147 a 2000 y resulta de la acumulación de 5000
escaneos. Para el experimento en modo de iones positivos, se
realizaron 3000 escaneos acumulado y el espectro de masas varía
de m / z 92 a 1500.
Principales resultados
 Desorción Ionización por
Electrospray (DESI)
Desorption Electrospray Ionization
(DESI)
DESI ocurre cuando las partículas de analito son solvatadas por un flujo de
solvente ionizado.
El analito solvatado se expulsa de la muestra y barre hacia el analizador de

masas.
El mecanismo y los espectros son muy similares a ESI.
 APLICACIONES DESI
se puede usar en una gran variedad de aplicaciones
pruebas farmaceuticas

control de calidad / aseguramiento

armas químicas

residuos de explosivos

 huellas digitales latentes

Huella digital con cocaína
Análisis directo en tiempo
real (DART)
Direct Analysis in Real
Time (DART)
se desarrolló inicialmente en 2003 e informó 2005
muy similar al metodo DESI (solvente gaseoso en lugar de líquido)

los experimentos originales recogieron contaminantes (pegamento)

Aplicaciones Método DART

DART tiene muchas de las mismas ventajas que DESI

Pequeña preparación de muestra

 Adaptable a casi cualquier matriz

DART se usa en muchas de las mismas áreas forense

Inspección de alimentos
Titulo

Application of direct analysis in real time to the study of chemical vapor

generation mechanisms: identification of intermediate hydrolysis
products of amine-boranes

Aplicación del análisis directo en tiempo real al estudio del vapor

químico.mecanismos de generación: identificación de hidrólisis
intermediaproductos de aminas-boranos

Objetivo

Dilucidar y comprobar las teorias previstas en la literatura, a partir del estudio

de las aminas-boranos para la determinacion de oligoelemtenos
Las aminas-boranos generan en sus reacciones intermedias hidrolisis de
metales con alta pureza. Las teoria menciona que el NaBH 4 (THB) como
amina-boranos, NH 3 · BH 3 (AB),t- BuNH 2 · BH 3 (TBAB), hidroliza con
mayor eficiencia respectivamente, pero utilizando distintas soluciones
acuosas boranos la relacion fue inversa THB> AB> TBAB en comparacion
con el SbH3 y Hg0 que es TBAB> AB> THB.

Ademas en pH´s acidos, las condiciones de hidrolisis de las aminas-

boranos son mas lentas;para cuando la acidez supera las 3mol/L en el
AB, libera primero un mol de H, y luego genera la hidrolisis completa,
mientras que para TBAB comienza que comienza con eldesplazamiento
de amina protonada:R3-N4-BH3 + H3O+ → (H2O)BH3 + R3-NH

mientras que el metodo en la literatura propuesto fue :

comienza con la pérdida dehidrógeno molecular :R3-N4BH3 + H3O+ →

(H2O)R3-NBH2[
En los metodos usados para comprobar las hidrolisis, no todas las
ionizaciones fueron posibles comprobar, debido que estaban por fuera
del minimo lectura del rango de masa del Orbitrap (<50 Da), hubieron
volatilizaciones.
Resultados

las formaciones intermedias de las aminas-boranos estan limitadas por el

limite de rango del DART, pues existen moleculas intermedias con pesos
moleculares muy pequeños.

La literatura afirma que el orden de Hidrolisis para los compuestos

borados, es TBAB> AB> THB, pero en las lecturas, se confirmo que no
para todos los casos, el mecanismo es el mismo, por el cual, la
investigacion tuvo limitaciones, junto con la conclusion anterior, es dificil
proponer un mecanismo correcto, pues son casos especificos.
 Bibliografía
1. Spectrometric Identification of Organic Compounds, 7th Edition Robert
M. Silverste2005
Robert M. Silverstein . Spectrometric identification of insect sex

attractants. Journal of Chemical Education 1968, 45 (12) , 794. DOI:

10.1021/ed045p794
David F. Boltz and Melvin G. Mellon. Light absorption

spectrometry. Analytical Chemistry 1968, 40 (5) , 255-273. DOI:

10.1021/ac60261a024
Olmo,L.(2018)Unravelling the Distribution of Secondary Metabolites in

Oleaeuropaea L, Moleculas,”recuperado desde

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/30241383.
D’Ulivo,lucia.(2019)Application of direct analysis in real time to the study

of chemical vapor generation mechanisms: identification of intermediate

hydrolysis products of amine-boranes,Crossmark,”recuperado
desde”https://link.springer.com/article/10.1007/s00216-019-01598-4.
Gunter Gauglitz , David S. Moore, Manual de espectroscopia, 2014.