FUNDAMENTOS DE LA CROMATOGRAFIA DE GASES ACOPLADA A MASAS

1. Cromatografía de gases
La cromatografía de gases (GC) es una técnica que separa mezclas complejas en sus
componentes individuales para su identificación y cuantificación. Es una técnica vaporiza la
mezcla de muestra en compuestos gaseosos y los separa en función del punto de ebullición de
los compuestos y su adsorción diferencial en un soporte poroso sólido o líquido 1.
1.1 Fundamentos
La mezcla de muestra se inyecta, se vaporiza y fluye hacia la columna controlada térmicamente
por un gas inerte. Los compuestos de muestra pueden interactuar con la fase estacionaria a
través de diversas fuerzas intermoleculares, como las fuerzas de Van der Waals y las
interacciones dipolo-dipolo. Algunos compuestos tienden a interactuar más fuertemente debido a
su polaridad, lo que resulta en una mayor concentración en la fase estacionaria en comparación
con la fase móvil (es decir, un coeficiente de partición más alto) 2.
Como resultado, estos compuestos están fuertemente retenidos en la columna y tienen un mayor
tiempo de retención (RT) en comparación con los compuestos de interacciones más débiles con
la fase estacionaria. A medida que pasa el tiempo, con un flujo continuo de gas inerte y una
columna con control térmico, las variaciones en los coeficientes de partición de los compuestos
dan como resultado la separación de los compuestos en una mezcla. Los compuestos separados
eluyen posteriormente de la columna y se detectan 2.

Fig. 1 Principio de separación de GC. El compuesto en rojo tiene una interacción más fuerte con la fase
estacionaria y se retiene más tiempo en la columna. Esto da como resultado la separación de la mezcla
donde el compuesto rojo tiene un tiempo de retención más largo que el compuesto azul (RTred> RTblue).

1.1.1 Factores que influyen la separación de compuestos en cromatografía de gases 3

La separación de compuestos en un GC depende principalmente de dos factores:
 La polaridad (es decir, la interacción del compuesto con la fase estacionaria en la columna
de GC)
  El punto de ebullición del compuesto (es decir, la volatilidad). Cuanto más bajo es el punto
de ebullición, mayor es la tendencia del compuesto a estar en la fase gaseosa; así, viaja
más rápido en forma gaseosa a través de la columna.
Los compuestos con puntos de ebullición similares, eluyen con respecto a su polaridad, donde
los compuestos de interacción más débil con la fase estacionaria eluyen primero.
1.1.2 Tiempo de retención3
El tiempo que tarda el compuesto en viajar desde el puerto de inyección hasta el detector se
denomina tiempo de retención. La RT para un compuesto específico depende de varios factores,
como el tipo y las dimensiones de la columna, el tipo y flujo de gas portador, la temperatura y el
método analítico de GC utilizado. Dados los mismos parámetros analíticos, típicamente se
espera el mismo cromatograma y RT de compuestos. Sin embargo, en realidad, los RT del
mismo compuesto separados por columnas GC de incluso el mismo lote de fabricación pueden
diferir ligeramente. Por lo tanto, el uso de índices relativos de retención o retención, una forma
estandarizada para la comparación de los datos de retención de GC, puede facilitar y permitir
que GC sea una herramienta excelente para el análisis cualitativo.
2. Cromatografía de gases acoplado a gases
La cromatografía de gases-masas es una técnica que combina la capacidad de separación que
presenta la cromatografía de gases con la sensibilidad y capacidad selectiva del detector de
masas. Esta combinación permite analizar y cuantificar compuestos trazas en mezclas
complejas con un alto grado de efectividad 4.
2.1 Fundamentos
La espectrometría de masas (MS) cuando esta acoplada a un GC, ioniza inmediatamente los
compuestos eluidos gaseosos, separa los iones al vacío en función de sus relaciones de masa a
carga (m / z) y finalmente mide la intensidad de cada ion. Estas intensidades se registran para
producir una serie de espectros de masas que muestra las intensidades relativas de iones contra
m / z. Del espectro de masas, podemos obtener información sobre el peso molecular, la
estructura molecular e identificar muestras desconocidas. El resultado final de GC/MS es el
cromatograma de masas2.
Fig 2. Cromatograma de masas GCMS típico (verde y naranja), cromatograma de iones totales (TIC, rojo)
y espectro de masas (azul)

2.1.1 Ionización de electrones2

En GC/MS, la fuente de iones convierte las moléculas gaseosas en iones cargados mediante
bombardeo electrónico o colisión/reacción con un gas reactivo. La ionización electrónica (EI) y la
ionización química (CI) son los principales modos de ionización utilizados en GCMS.
A. La ionización electrónica (EI)2
Como su nombre lo indica, los electrones chocan con las moléculas gaseosas para formar iones.
Los electrones se generan a partir de un filamento calentado y se aceleran mediante un alto
voltaje hacia la cámara fuente de iones. Las moléculas gaseosas eluidas del GC chocan con
estos electrones (es decir, haz de electrones de 70eV) en la cámara EI. De la colisión, se elimina
un electrón de la molécula para formar el ion molecular (M +). En algunos casos, el ion molecular
es estable y no sufre ninguna fragmentación adicional. Casi siempre, la ionización en EI no solo
se detiene en el ion molecular (M+). Existe un exceso de energía y se puede producir ion
molecular metaestable (M+*). La inestabilidad de este ion M+* y el exceso de energía provoca una
mayor fragmentación en iones m / z más pequeños (también conocidos como iones
fragmentarios). Debido a esta razón, la IE se conoce comúnmente como ionización dura donde la
fragmentación es bastante extenso y rara vez se observa ion molecular. Estos iones (iones de
fragmentos cargados) se producen y luego se aceleran al analizador de masas.
 Fig 3. Ionización electrónica, sus procesos y diseño de cámara de fuente de iones

B. Ionización Química (CI)

La ionización química (CI), un tipo de ionización suave, a menudo se emplea en GCMS para la
detección de iones moleculares. CI existe en dos modos: positivo y negativo, y generalmente se
usa como una técnica de ionización complementaria a la IE. En Ionización química positiva (PCI),
los iones positivos son de interés y se generan y extraen en el proceso de ionización. Por otro
lado, durante la ionización química negativa (NCI), los iones negativos se adquieren y se forman
predominantemente2.
B.1 Ionización química positiva (PCI)
Similar a EI, CI también requiere electrones emitidos por el filamento. Sin embargo, estos
electrones de alta energía se liberan y aceleran en la cámara para colisionar con los gases
reactivos. La PCI se puede describir simplemente en estos tres pasos:
 Las moléculas de gas reactivo y estos electrones de alta energía colisionan y sufren
ionización electrónica.
 Los iones reactivos se forman a partir de esta ionización
 Las moléculas de muestra colisionan y reaccionar con estos iones reactivos para formar
iones.
 Fig 4. Ionización química positiva (PCI), sus procesos y diseño de cámara de fuente de iones

B.2 Ionización química negativa (NCI)

Los iones negativos se forman predominantemente en la ionización química negativa (NCI). Los
procesos son iniciados por un filamento calentado que emite electrones. Estos electrones de alta
energía colisionan con los gases reactivos (también conocidos como gases reguladores en el
NCI) y se desaceleran para formar electrones "térmicos" de baja energía. Estos electrones
"térmicos" colisionan aún más con las moléculas de muestra (M), ionizando y formando iones
con carga negativa (M-). Similar a PCI, NCI es una técnica de ionización suave ya que estos
electrones térmicos de baja energía no tienen suficiente energía para fragmentar ampliamente la
molécula de muestra. En algunos casos, la fragmentación de las moléculas de muestra puede
ocurrir cuando los electrones con suficiente energía colisionan con estas moléculas de muestra 5.
No todos los compuestos son adecuados para NCI. Este modo de ionización es altamente
sensible, selectivo y es principalmente aplicable para la detección de compuestos con una gran
afinidad electrónica. Se emplea comúnmente para el análisis de compuestos halogenados y
organofosforados6.

Bibliografia:
1. McNair HM, Miller JM. Basic gas chromatography. 2nd ed. Malden: Mass: Wiley-
InterScience; 2009.
2. Fundamental Guide to GCMS [Internet]. Solutions.shimadzu.co.jp. 2020 [citado 17 Julio
2020]. Disponible en: https://solutions.shimadzu.co.jp/an/n/en/gcms/ico220013.pdf?
_ga=2.81725076.288612295.1595027716-1769011036.1595027716
3. Hübschmann H. Handbook of GC-MS: Fundamentals and Applications, 3rd ed.
Weinheim :Wiley-VCH; 2015.
4. Sarria R. CROMATOGRAFIA DE GASES ACOPLADO A ESPECTROMETRÍA DE MASAS
[Internet]. ResearchGate. 2017 [citado 17 Julio 2020]. Disponible en:
https://www.researchgate.net/publication/324558249_CROMATOGRAFIA_DE_GASES_A
COPLADO_A_ESPECTROMETRIA_DE_MASAS
5. Kitson F, Penton Z, Sparkman O. Gas chromatography and mass spectrometry. 2nd ed.
Boston: Elsevier; 2011.
6. Barón E, Eljarrat E, Barceló D. Analysis of Halogenated Flame Retardants by Gas
Chromatography Coupled to LRMS, HRMS, MS–MS, and TOF-MS. Comprehensive
Analytical Chemistry.2013;61:373–401.