DETERMINACIÓN ANALÍTICA DE FÓSFORO

INORGÁNICO EN AGUAS NATURALES

Trabajo de investigación

NOMBRE Y APELLIDO:

- Carmen Nicole Alayza Perla

- Maria Fernanda Figueroa Martinez
- Carlos Alejandro Mejia Silva

PROFESOR:

- Olga Vadimovna Kostenko

CURSO:

- Química analítica (3B)

2021
 DETERMINACIÓN ANALITICA DE FÓSFORO INORGÁNICO EN AGUAS
NATURALES

OBJETIVOS:

● General: Reconocer las características del contaminante y los métodos

analíticos que se utilizan para la detección de este mismo.

● Específicos:
➔ Identificar el analito.
➔ Reconocer las consecuencias en el medio ambiente por la
presencia del analito.
➔ Detallar el proceso analítico para la detección de fósforo
inorgánico.

INTRODUCCIÓN:

El fósforo inorgánico (ver figura 1) es una sal la cual proviene del ácido
fosfórico mezclados con iones metálicos. Este compuesto está formado por
un átomo de fósforo central, el cual está rodeado por cuatro átomos de
oxígeno, presentado en una disposición tetraédrica (ver figura 2). Del mismo
modo, al analito, normalmente, se le asigna la abreviatura de Pi y un pH
fisiológico (pH 7), está compuesto por una mezcla de iones HPO42− y H2PO4−.
Asimismo, el fósforo inorgánico es un anión, ya que presenta una carga
negativa de -3.

Figura 1: Fórmula química

PO4 3-
Figura 2: estructura
El fósforo inorgánico en el ambiente, normalmente, se encuentra en aguas
naturales (lagos, lagunas, pantanos, ríos, etc), sin embargo, las
concentraciones de este mismo tienden a estar cerca o inferiormente de los
niveles de detección en aguas cristalinas (aproximadamente de 1 a 10 µg / L).
Además, es demasiado complejo dar un nivel totalmente exacto del analito
(fósforo inorgánico reactivo soluble), ya que los métodos analíticos que se
utilizan para la detección de este analito, detectan, al mismo tiempo, a la
matriz de la muestra.

Por otro lado, el fósforo inorgánico se usa comúnmente para la producción de

fertilizantes, los cuales se usan con gran magnitud en las tierras de cultivo.
No obstante, este compuesto de manera soluble, se suele inmovilizar con
gran rapidez por la fijación del suelo, y posteriormente, deja de estar libre
para la absorción de plantas, lo que ocasiona que el suelo se pierda y
disminuye su eficiencia para el uso de cultivos.

Adicionalmente, el fósforo inorgánico es fundamental para las plantas, ya que

les permite crecer y desarrollarse. En el caso de los hongos, el fósforo
inorgánico es muy importante, ya que en el proceso de transducción de
señales, este compuesto ayuda a la regulación de la expresión de varios
genes que participan en la captación de fuentes extracelulares. A

Asimismo, el fósforo inorgánico es de suma importancia porque en muchas

zonas del mundo, se usa este compuesto como fertilizante para zonas de
cultivos, los cuales carecen de cierta cantidad de fósforo, convirtiendo al
fósforo inorgánico en un gran fertilizante que regula la cantidad de fósforo en
la tierra y, también, aumenta la fertilidad de dicho suelo, haciendo que los
cultivos sean mucho mejores.

De la misma manera la presencia de fosfatos inorgánicos en el agua pueden

llegar a ser un grave problema siempre y cuando se presente en una gran
cantidad, lo que conlleva a que se produzca la eutroficación. Este último
suceso puede ser perjudicial para más de un ecosistema, debido a que puede
presentar pérdidas de flora y fauna, los cuales traen consigo pérdidas
económicas.
PROCESO ANALITICO:

3.1 Formular la cuestión:

Determinar la concentración de fósforo inorgánico en aguas naturales.

3.2. Selección de los procesos analiticos:

El método que se verá reflejado en el presente trabajo de investigación es la

Espectrofotometría, este es un método cuantitativo de análisis químico e
instrumental, que nos sirve para poder medir la cantidad de luz que absorbe
una sustancia química (Absorbancia) midiendo la intensidad de la luz cuando
un haz de luz pasa a través de la solución muestra. Su uso en los diferentes
campos se basa principalmente en calcular la cantidad de concentración de
algún analito en específico y para ello se apoya en una determinada longitud
de onda en la que cada compuesto puede absorber luz.

Espectrofotometría de absorción molecular VIS-UV

Es utilizada en gran medida para realizar análisis cuantitativos y cualitativos a

especies químicas inorgánicas, orgánicas y bioquímicas que se encuentran
presente en alguna muestra. La técnica está basada principalmente en la
medición de absorción de radiación UV o visible por determinadas moléculas,
esta radiación corresponde a regiones del espectro electromagnético las
cuales provocan transiciones electrónicas a determinadas longitudes de onda
específicas de la muestra. Este método es adecuado para longitudes de
onda de entre 380 nm y 780 nm.

● Instrumentos para el metodo de espectrofotometria:

Espectrofotómetro
El instrumento fundamental en esta técnica analítica es el espectrofotómetro, este
instrumento nos permite medir las longitudes de onda y la intensidad emitida por la
muestra que se desea analizar, para luego expresar el resultado en valores
numéricos denominados como absorbancia. Existe una diversidad de
espectrofotómetros y esto se debe a la utilidad específica que llega a tener, en este
sentido se encontrará tantos fotómetros como tipos de espectrofotometría haya.
Debido a esta gran variedad el costo de este equipo de laboratorio puede variar
entre los S/ 3000 y S/ 15 000 soles, dependiendo la marca y utilidad que se le vaya
a dar, sin embargo todos estos equipos cuentan con algunas partes importantes y
fundamentales, las cuales son:
Fuente: Es la encargada de generar radiación electromagnética
Monocromador
- Rendija de entrada: Delimita la luz proveniente de la fuente
- Dispositivo de dispersión: Como indica su nombre, se encarga de la
dispersión de la luz.
- Rendija de salida: Lugar por donde la cual la radiación monocromática, se
dirige a la muestra.
-
Compartimiento de muestras: Lugar donde se ubican las muestras que van a ser
analizadas, incluyendo el blanco.

Detector: Encargado de convertir la señal de luz en una señal eléctrica. Idealmente

esta señal debe ser lineal, con bajo ruido y a la vez amplificada en varias etapas del
dispositivo

Lentes y espejos: A lo largo de todo el recorrido de luz dentro del

espectrofotómetro, se encuentra una serie de lentes y espejos, cuyo propósito es
transmitir y enfocar la radiación a través de todas las partes del instrumento. (Ver
figura 3)

Figura 3: Partes internas de un espectrofotómetro

CELDAS O CUBETAS

Ya que el espectrofotómetro que se va a utilizar debe de ser de 190 nm a 900

nm, normalmente se utilizan cubetas de vidrio de silicato, pero para el visible
se utilizan celdas de plástico, las que se utilizaran en este caso para el
método.
 Figura 4: Celdas de plástico para el método de espectrofotometría VIS-UV

Adicionalmente, las celdas más usadas tienen ventanas que son

perpendiculares a la dirección del rayo, con el fin de reducir las pérdidas por
reflexión. Del mismo modo, la longitud de la trayectoria más usada en las
celdas para realizar estudios en las regiones UV y visible es de 1 cm.
También, cabe resaltar que el precio de los diferentes tipos de celdas ronda
entre los 100 a 500 dólares, todo depende del material y el tamaño de cada
una.

Por otro lado, la calidad de los resultados que se obtendrá depende de

manera crítica de la manera en que se hace uso y mantienen estas mismas.
Por ejemplo, las huellas digitales, grasa y otros depósitos en las paredes
pueden alterar significativamente las características de transmisión de una
celda. Por lo que es fundamental limpiar profundamente las celdas antes y
después de hacer uso de ellas. Igualmente, se debe evitar tocar las ventanas
después de que se terminó con la limpieza de estas.

● Ley de Lambert - Beer

La Ley de Lambert - Beer, nos da a conocer la relación que existe entre la

absorbancia de luz de longitud de onda fija y la concentración, podemos decir
como conclusión que la absorbancia es directamente proporcional a la
concentración de la solución de la muestra que se quiere analizar. La
distancia recorrida por la luz que atraviesa la muestra se le conoce como
camino óptico y generalmente se mide en cm. (Figura 4).
 Figura 4: Esquema que representa el fenómeno que nos describe la Ley de
Lambert Beer

Este dato que nos indica:” la absorbancia es directamente proporcional a la

concentración de la solución”, lo podemos expresar mediante la siguiente
ecuación:

A = εcl
log (I / I 0 ) = εcl

Donde podemos indicar que A= Absorbancia, es la cantidad de energía

absorbida por lo que es una sustancia pura o en solución. También podemos
decir que para hallar la Absorbancia en la ecuación, ε = es el coeficiente de
extinción molar y por último l = es la longitud de la cubeta.
La Ley de Lambert - Beer es también llamada una ley límite, esto nos quiere
decir que solo se logra cumplir en determinadas condiciones: luz
monocromática y soluciones diluidas.
Es fundamental emplear una disolución estándar del analito en nuestro
disolvente y también es importante considerar que este a una temperatura
similar para obtener la absortividad al momento del análisis.De manera
continua, se aplican diversas series de disoluciones estándar del analito para
así poder lograr generar una curva de calibración, o también llamado “curva
de trabajo”, de A con respecto de c, o para obtener una ecuación de regresión
lineal. Esta ecuación descrita en la Ley de Lambert - Beer, nos permitirá
calcular el valor del coeficiente de extinción molar, que corresponde a la
pendiente de la recta.
 MÉTODO DE CLORURO ESTANOSO
Este método se basa en la reacción del fósforo contenido en la muestra como
ortofosfato con el ácido molíbdico para formar el ácido 12-molibdofosfórico
según la rección:
+ +
𝐻3𝑃𝑂4 + 12(𝑁𝐻4) 𝑀𝑜𝑂4 + 21𝐻 ↔ (𝑁𝐻4) 𝑃𝑂4 • 12𝑀𝑜𝑂3 + 21𝑁𝐻4 + 12𝐻2𝑂
2 3
El ácido 12-molibdofosfórico es reducido por el cloruro de estaño a azul de
molibdeno según la reacción:
(𝑁𝐻4) 𝑃𝑂4 • 12𝑀𝑜𝑂3 + 𝑆𝑛𝐶𝑙2 → 𝑎𝑧𝑢𝑙 𝑑𝑒 𝑚𝑜𝑙𝑖𝑏𝑑𝑒𝑛𝑜
3
Este compuesto de composición desconocida tiene una mezcla de Mo (VI) y
Mo (V) que absorbe a 690 nm. La intensidad del color azul formado depende
de la concentración de fosfato añadida al heteropolímero. Este método es
aplicable cuando el contenido de fósforo de la muestra está entre 0.01 mg P /
L y 6.0 mg P / L. Todo el fósforo en la muestra debe estar en forma de ion
ortofosfato (PO4) 3- porque el método espectrofotométrico es principalmente
específico para este fosfato (PO4)) 3- ion. La materia orgánica de la muestra
se destruye por descomposición con persulfato de amonio y ácido sulfúrico, la
ruptura de los enlaces orgánicos del fósforo (C-P y / o C-O-P) y la
descomposición del polifosfato en ortofosfato.
3.3. Planificación de la muestra analitica:
Materiales:
- espectrofotómetro
- cubetas o celdas de plástico
- Balanza analítica
- autoclave
- embudo
- papel filtro
- EPP
Reactivos:
- muestra de agua - Fosfato monobásico de potasio
- fenolftaleína (𝐶20𝐻14𝑂4) (
anhidro 𝐾𝐻2𝑃𝑂4 )
- hidróxido de sodio (𝑁𝑎𝑂𝐻) - Cloruro estanoso dihidratado
- ácido sulfúrico (𝐻2𝑆𝑂4) (𝑆𝑛𝐶𝑙2 • 2𝐻2𝑂)
- agua (𝐻2𝑂) - Heptamolibdato de amonio
⎡
- Ácido nítrico concentrado(𝐻𝑁𝑂3) (
tetrahidratado⎢ 𝑁𝐻4 )6 𝑀𝑜7𝑂24 • 4𝐻2𝑂⎤⎥
⎣ ⎦
⎡ ⎤
- (
Persulfato de amonio⎢ 𝑁𝐻4 ) 𝑆2𝑂8⎥ - (
Glicerol 𝐶3𝐻8𝑂3 )
⎣ 2 ⎦
Preparación de disoluciones:
- DISOLUCIÓN MADRE DE FOSFATO
Pesar 219,5 mg de fosfato monobásico de potasio anhidro previamente secado a 105ºC
durante dos horas y, posteriormente, aforar con agua a 1 L
Reacción:
+ −
𝐾𝐻2𝑃𝑂4 → 𝐾 + 𝐻2𝑃𝑂4
− + 2−
𝐻2𝑃𝑂4 → 𝐻 + 𝐻𝑃𝑂4
2− + 3−
𝐻𝑃𝑂4 →𝐻 + 𝐻𝑃𝑂4
− −
𝐻2𝑂 +𝐻2𝑃𝑂4 → 𝐻3𝑃𝑂4 + 𝑂𝐻
- DISOLUCIÓN ÁCIDO FUERTE
Adicionar 300 mL de ácido sulfúrico concentrado a 600 mL de agua. Dejar enfriar y
agregar 4 mL de ácido nítrico concentrado y aforar a 1L con agua.
Reacción:
+ −
𝐻2𝑆𝑂4 → 𝐻 + 𝐻𝑆𝑂4
− + 2−
𝐻𝑆𝑂4 → 𝐻 + 𝐻𝑆𝑂4
+ −
𝐻𝑁𝑂3 → 𝐻 + 𝑁𝑂3
- DISOLUCIÓN DE CLORURO ESTANOSO
Pesar 2,5 g de cloruro estanoso dihidratado y disolver en 100 mL de glicerol.
Calentar en baño de agua y agitar con una varilla de vidrio.
∆
Reacción: 𝑆𝑛𝐶𝑙2•2𝐻2𝑂 + 𝐶3𝐻8𝑂3→ 𝑆𝑛𝐶𝑙2•2𝐻6𝑂4𝐶3
- DISOLUCIÓN DE HEPTAMOLIBDATO DE AMONIO TETRAHIDRATADO
Disolver 25 g de heptamolibdato de amonio tetrahidratado en 75 mL de agua.
Agregar 280 mL de ácido sulfúrico a 400 mL de agua, enfriar y adicionar al
heptamolibdato de amonio tetrahidratado y diluir a 1 L.

3.4. MUESTREO

MUESTRA AGUA NATURAL

Cantidad de muestra a recolectar 500 ml (envases de plástico)

Temperatura de conservación de la 4°C

muestra

Tiempo de preservación 28 días de conservación

3.5. Preparación de la muestra:
Preparación de la muestra por medio de la digestión con persulfato

MÉTODO DE CLORURO ESTAÑOSO

3.6. ANÁLISIS
3.7. Tratamiento de los datos obtenidos

De manera general es muy importante la representación gráfica de la Ley de

Lambert-Beer, nos podemos dar cuenta que la representación gráfica es una recta
lineal, donde en el eje de coordenadas, el eje Y representa los valores de la
Absorbancia y en el eje X, representa las concentraciones del analito de la muestra
a analizar.

Luego de haber realizado el gráfico, se utiliza el procedimiento de la curva de

calibración, esta curva de calibración se aplica cuando se desconoce los valores
del coeficiente de Absortividad molar, y también en los casos en los cuales se
necesita realizar una reacción previa para generar que el analito se convierta en
una especie absorbente. En la práctica normalmente, nuestro analito no absorbe la
luz visible, sin embargo, es muy práctico transformarlo en una especie absorbente
a través de una reacción previa que lo transforme en un compuesto coloreado.

Es de suma importancia que en este procedimiento se prepare una serie de

soluciones de concentración conocida del analito que se desea cuantificar, realizar
la reacción previa para poder generar el compuesto absorbente y luego calcular la
Absorbancia de dichas soluciones coloreadas en el instrumento denominado
“Espectrofotómetro UV-Vis”. Obtendremos una tabla de datos correspondientes a
pares ordenados (eje x; eje y) reconocidos, los que podremos dar a conocer en un
gráfico de eje cartesianos. En el eje X contiene las concentraciones que se conoce
de las soluciones, en el eje Y se advierte las absorbancias medidas en el equipo
(figura 6).

Figura 6: Ejemplo de la representación gráfica de los datos de la tabla.

 La curva de calibración que se logra obtener será nuestro punto inicial para poder
transformar la medida de Absorbancia de cualquier muestra no conocida en un
valor de concentración para el analito. Se puede realizar gráficamente o también
despejando el valor de X que se vincula y familiariza a la medida Y (A), en la
ecuación que se presenta de la recta de calibración obtenida.

3.8. Interpretación de los resultados

1. Cuadro del resumen.

MÉTODO NORMA EQUIPO MATERIALES MUESTRA INTERFERENC VENTAJAS DESVENTAJAS

IA

ESPECTR NMX-AA-0 ESPECTRO ● espectrofotómetr AGUA Arseniato, Resultados Tiempo que demora
OFOTOME 29-SCFI-2 FOTÓMETR o fluoruro, torio, rápidos para poder usar el
TRÍA 001 O ● cubetas o celdas bismuto, sulfuro, equipo
● muestra de agua tiosulfato, Alta precisión
● reactivos tiocianato o Interferencia de los
● EPP excesos de Versatilidad resultados si no se
● Balanza analítica molibdato prepara
● autoclave interfieren. Técnica fácil correctamente el
● embudo de realizar espacio
● papel filtro
Técnica Limitación de la
económica linealidad de la
curva de calibración
por la incapacidad
de registrar un
espectro de
absorción y ancho
de banda de la
fuente
Conclusiones.

● Se considera de suma importancia al método de espectrofotometría, debido a que

nos permite identificar cualitativa y cuantitativamente una variedad de analitos
como el fósforo inorgánico presente en las muestras de agua.
● Se concluye que algunas de las ventajas que se puede identificar del método
analítico utilizado, son las de rapidez, eficiencia en el costo, exactitud, precisión,
asimismo, se puede identificar que hay un margen de error mínimo.
● En conclusión, el grado de dificultad que se halló en el método de
espectrofotometría es mínimo, ya que el procedimiento analitico no es tan
complejo, pero de una u otra manera el procedimiento antes del análisis, es un
poco más laborioso.
Anexos.
● Glosario.

CARMEN NICOLE ALAYZA PERLA

1. TRANSDUCCIÓN: La transducción se puede definir como el proceso de

transferencia genética desde una célula donadora a otra receptora
mediatizado por partículas de bacteriófagos que contienen ADN genómico
de la primera.
2. DISPOSICIÓN TETRAÉDRICA: geometría molecular en la que un átomo
central se encuentra en el centro enlazado químicamente con cuatro
sustituyentes que se encuentran en las esquinas de un tetraedro.

FIGURA 1: EJEMPLO DE UNA DISPOSICIÓN TETRAÉDRICA

3. RADIACIÓN MONOCROMÁTICA: Radiación electromagnética que, a

efectos prácticos, tiene una sola longitud de onda. Por extensión se aplica a
cualquier tipo de radiación rnonoenergética.
4. CALIBRACIÓN: Conjunto de operaciones que establecen, bajo condiciones
específicas, la relación entre los valores de una magnitud indicados por un
instrumento o sistema de medición, o los valores representados por una
medida materializada y los valores correspondientes de la magnitud,
realizados por los patrones, efectuando una corrección del instrumento de
medición para llevarlo a las condiciones iniciales de funcionamiento
5. EXACTITUD: Proximidad de concordancia entre el resultado de una
medición y un valor verdadero del mensurando.
6. MENSURANDO: Magnitud particular sujeta a medición.

CARLOS ALEJANDRO MEJIA SILVA

1. EUTROFICACIÓN: Aporte en exceso de fósforo inorgánico a las aguas.

FIGURA 1: Eutroficación en el lago Chaohu - China.

 2. HIDRÓFILA: Comportamiento de toda molécula que tiene afinidad por el
agua.
3. ACRÓNIMO: Sigla que se pronuncia como una palabra.
4. INTERFERENCIAS: Sustancias, reactivos y elementos distintos al analito
que puede confundir la medición espectrofotométrica.

FIGURA 2: Gráfico representativo de los componentes de una muestra.

5. PATRÓN DE REFERENCIA: Patrón, en general de la más alta calidad

metrológica disponible en un lugar dado, o en una organización determinada
del cual se derivan las mediciones realizadas en dicho lugar.

MARIA FERNANDA FIGUEROA MARTINEZ

1. AGUAS SUPERFICIALES: Todos los cauces de aguas superficiales sean ríos,

esteros, lagos, tranques, zonas húmedas o estuarios, interactúan con el agua
subterránea

Figura 1: Ejemplo de recojo de muestra en aguas superficiales.

2. TETRAÉDRICA: Es una clase de geometría molecular en la que un átomo central
se encuentra en el centro enlazado químicamente con 4 sustitutos.

Figura 2: Geometría molecular tetraédrica

3. LONGITUD DE ONDA: Es la distancia física que existe entre dos puntos a partir de
los cuales la onda se repite.

Figura 3: Esquema de la longitud de onda

4. ABSORBANCIA: En la espectrofotómetro la absorbancia es una medida de la

radiación que logra absorber una sustancia cuando sobre ésta inciden las ondas
electromagnéticas mayormente en la región visible.
 Figura 4: Absorbancia del analito

5. RADIACIÓN MONOCROMÁTICA: Nos quiere decir que es la radiación magnética

que, a efectos prácticos presenta una sola longitud de onda.

Figura 5: Monocromador
6. EPP: Equipos de Proteccion Personal, fundamental para los laboratorios.

Figura 6: EPP de laboratorio

7. DIGESTIÓN DE LA MUESTRA: El resultado tras la digestión es una disolución

acuosa ácida de la muestra, adecuada para su posterior análisis mediante técnicas
espectroscópicas

Figura 7: Preparación de la muestra

8. CURVA DE CALIBRACIÓN: Se utiliza para entender la respuesta instrumental a

un analito y para predecir la concentración de analito en una muestra

Figura 8: Ejemplo de la curva de calibración

 6.2 Bibliografía ( Norma técnica, artículos, etc.)

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