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BUENAS PRACTICAS EN
Gases Masas
Slide 3
Introducción a la técnica
Tipos de espectrómetros:
• AMS (Accelerator Mass Spectrometry)
• Gas Chromatography-MS
• Liquid Chromatography-MS
• ICP-MS (Inductively Coupled Plasma-Mass spectrometry )
• IRMS (Isotope Ratio Mass Spectrometry)
• Ion Mobility Spectrometry-MS
• Sistemas TOF
• Tandem MS
• …
Diagrama básico – Simple Cuadrupolo
+
+. + + Salida de
e
datos
Fuente de
ionización Analizador Detector
cuadrupolar
Masa = m = 73
Sistema Carga = z = 1
de vacio
m/z = 73
Esquema GC/MSD
Separa los Genera los iones Separa los Detecta los
ALS
compuestos y los fragmentos iones iones
GC Fuente de Cuadrupolo Electro multiplicador
ionización Dinodo
Columna
Vacio
Esquema GC/MSD
Separa los Genera los iones Separa los Detecta los
ALS
compuestos y los fragmentos iones iones
GC Fuente de Cuadrupolo Electro multiplicador
ionización Dinodo
Columna e-
246
100
Durante la ejecución, el cuadrupolo escanea (por ejemplo) de 35 m/z 318
210
Vacío 0
40 80 120 160 200 240 280 320
SQ GC/MSD: Espectro de ejemplo a 24.065 minutos
Abundancia Normalizada
246
100
318
50
176
105 210
123
75 87 99 140 281
50 62 184 233 267
0
40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320
m/z
SQ GC/MSD: Procesando un dato SCAN
210
0
23.8 23.9 24.0 24.1 24.2 24.3 40 80 120 160 200 240 280 320
Time (min) m/z
SQ GC/MSD: Busqueda en librería
246
100
Espectro 318
desconocido La búsqueda de espectros
desconocidos contra NIST u
otras bibliotecas se usa
50 ampliamente para la
identificación de compuestos.
176
105 210
123
75 87 99 140 281
50 62 184 233 267 El software de deconvolución
0 espectral de NIST (AMDIS) y
40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320
MassHunter SureTarget se
puede utilizar para producir
246 espectros con los iones de los
100
picos superpuestos
Librería eliminando la matriz.
105
75 87 123 210
50 99 140 281
62 184 233
39
0
40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 Cl Cl
(mainlib) p,p'-DDE
SIM: Single Ion Monitoring
246
100
318
Full Scan
Spectrum
35-500 amu
50 Durante la ejecución cromatográfica,
176 el cuadrupolo está programado para
monitorizar un pequeño número de
iones por analito en rangos de tiempo
105 210 específicos.
123
75 87 99 140 281
50 62 184 233 267
0
40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320
246
Se gasta más tiempo midiendo cada
100 ion frente a lo que es Scan.
318
SIM
Monitoring 8 Ions Esto proporciona ~ 10 veces mejor
Instead Of 465 señal a ruido y mejor precisión de
área. Sin embargo, se pierde la
50 capacidad de buscar espectros por
incógnitas inesperadas.
79 263 277
0
20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320
11 Agilent Technologies
SQ GC/MSD: Selectividad limitada MSD
TIC Extracto de
espinaca
El pico p, p’-DDE es visible en este
extracto de espinaca, pero la línea de base
muestra que el SQ solo tiene una
selectividad limitada sobre otros
compuestos de matriz que también tienen
m / z 246 como fragmento.
20 22 24 26 28 30
20 22 24 26 28 30
12 Agilent Technologies
Tecnicas de ionizacion
EI, PCI y NCI
Tecnicas de Ionizacion: Electron Ionization (EI)
Ionización: +.
ABC + e - ABC + 2e -
Molécula Ion molecular
Neutra excitado
Fragmentación:
. .
ABC+ AB + C+
.
A+ + BC
.
AB+ +C (Pérdida de neutros)
.
AC + +B (Reordenamiento)
etc.
C+ AB+
Abundancia de la +
ABC.
señal A+ +
AC
m/z
Técnicas de Ionización: Ionizacion Quimica Positiva (PCI)
Mecanismo Fragmentación
Técnicas de Ionización: Ionizacion Química Negativa (NCI)
Química
Técnicas de ionizacion: EI vs PCI
Espectros
Pero… como jugar con los iones?
Filtrado, seleccion y deteccion
Filtro de masas cuadrupolar
Composición
Polo Positivo
RF
Componentes Amplitud
RF Frecuencia
DC Polo Negativo
Amplitud
RF DC
Amplitud Amplitud
Los potenciales en el cuadrupolo de RF y DC: Los voltajes compuestos en ambas pares de barras son
-Vdc - VrfcosΩt iguales en magnitud y opuestos en signo.
+Vdc - VrfcosΩt
M+
*
Filtrando la Masa seleccionada
Barra Positiva
M+
M+
*
SIM Versus Scan
masa 1
Voltaje Voltaje
Quad Quad
amu masa 2
amu
masa 3
Tiempo de interscan
Tiempo de Scan Tiempo interscan
Tiempo total de SCAN CICLO DE TIEMPO SIM
Abundancia Abundancia
m/z m/z
Total Ion Chromatogram (TIC)
6000000
32
4000000
31
35
2000000
30 36
Time 5.25 5.26 5.27 5.28 5.29 5.30 5.31 5.32 5.33
82
1000000 1000000
303
82 182
303 166
166
M/Z 50 100 150 200 250 M/Z 50 100 150 200 250
1000000 1000000
303
182
303
166 82
166
M/Z 50 100 150 200 250 M/Z 50 100 150 200 250
SQ GC/MSD: Resumen
Limitaciones
• Selectividad sobre interferencias de matriz
• Selectividad respecto a algunos detectores GC (uECD, FPD, NPD, SCD, etc.)
• La resolución de masa de la unidad limita la interpretación espectral de desconocidos
Trucos y consejos a la hora de trabajar con GCMS
Consejos generales
Usar la información que proporciona el equipo
Prevenir
Chequeo visual de
errores
Diagnósticos Run / Stop
Fuente y filamentos
Vent/Pumpdown
Actualizar y usar
registros Logbook y
Tunes
Mantenimiento Preventivo – GC
Frequency Description Remarks
Tubo de Cobre limpio: 5180-4196 • Usar gases de grado 99.999% o
• Presión: diaria superior.
Gas Portador Filtro GCMS: RMSH-2
• Filtros: según necesidad • Usar filtros de metal o con
Filtro GCMS con indicador: CP17973 indicador .
Septa: 5183-4757
• Usar septum de bajo sangrando o
Merlin Microseal: 5181-8833 Merlin Microseal.
• Dependiendo del volumen
Portal de Inyección Liner UI: 5190-2293 o 5190-2295 • Usar Liner apropiado.
y tipo de muestra
Viton O-ring: 5188-5365 • Limpiar o reemplazar sellos (sello
de oro sólo cambiar).
Gold plated seal UI: 5190-6144
Conservar alguno
Autotune Semanal
periódicamente
Rellenar si necesario. NO
PFTBA Semestral 05971-60571
rebosar.
Realizar tareas
de
Conocer la Evitar columnas Evitar columnas Usar patrones mantenimiento Mantener un
muestra. Rangos de diámetro de gran espesor para evaluar el preventivo para registro
de concentración ancho de película. sistema minimizar los (logbook)
posibles
problemas.
Sintonizado (Tuning) MS con PFTBA
Espectro Perfluorotributilamina (PFTBA: C12F27N PM:671)
Scan: 10.00 - 650.00 Samples: 16 Thresh: 500
117 peaks Base: 69.00 Abundance: 1974784
100 69
F 3 C - F 2C - F 2C - F 2 C
Vial/Electroválvula
..
N CF2 - CF2 - CF2 - CF3 para introducción vapores
219 de solución de sintonizado:
F 3 C - F 2C - F 2C - F 2 C
50 PFBTA
131
264
414 (GCD) 502 614
0
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 550 600 650
Mass Abund Rel Abund Iso Mass Iso Abund Iso Ratio
69.00 1974784 100.00 70.00 20344 1.03
219.00 1161216 58.80 219.95 45968 3.96
502.00 56648 2.87 503.00 5690 10.04
Tensión de EM 1000-3000 v
Abundancia absoluta
isotope ratios
Mal vacío
Baja sensibilidad
• GC: Septum, liner, gold seal, temperatura de la columa, parámetros de
split/splitless, jeringa, etc.
• MS: Revisar tune reports, parámetros de data acquisition
(tune file, EM voltage), vacío.
Contaminación
• Conexión y estado de Portal de Inyección/Columna- ¡puntos activos!
• Septum/sangrado de columna
• Disolventes de limpieza
• Huellas dactilares (¡guantes!)
Fugas
• Examinar Standard Spectra Tune report (masa 28<10 %, por lo menos…)
• Localizar posibles fugas a través de Manual Tune/Repeat Profile con algún gas
como:
• Argón - masa 40
• CO2 - masa 44
Troubleshooting
Pérdida de sensibilidad y/o contaminación. ¿Cómo identificar un fuente sucia?
Mala reproducibilidad
STUNE.U presenta:
• Low high-mass abundance (502)
• Improper isotope ratios (M + 1)
• High background
• High EM voltage
Enjuagar con
Disolvente
NO EXPONER
a Disolvente
Limpieza de la Fuente de Iones
EM gastado
Mal instalado
Backstream
HED sucio
Problemas típicos
• No arranca
• Anti-suck-back no operativo
(cámara del cuádruplo con gotitas
de aceite)
• Poco/demasiado aceite
• Fuga aceite
• No se hace Gas-Ballast
Venteo del sistema
Usar siempre el procedimiento de venteo antes de intentar abrir el MSD!
Asegurarse que : Bomba difusora esta fría / Bomba turbo parada
Trucos y consejos en el desarrollo de métodos en GCMS
Indice
Consideraciones
cromatografía
Consideraciones
detección
Rutina y mantenimiento
Uso de patrones internos
Normaliza errores
Buena practica para volumétricos o de Se suele añadir al
mejorar la precisión inyección, procesos final del proceso de
y la exactitud. de evaporación de extracción inicial.
extractos.
Consideraciones
cromatografía
Consideraciones
detección
Rutina y mantenimiento
Selección de la columna
Temp
Consideraciones
cromatografía
Consideraciones
detección
Rutina y mantenimiento
Optimizacion de las condiciones del MS
Consideraciones
cromatografía
Consideraciones
detección
Rutina y mantenimiento
Rutina de mantenimiento diario (Bacth 50 muestras)
Cambio de liner.
Cambio de septum.
Comprobar del primer pinchazo la resolución de picos isomèricos (-HCH vs -HCH y/o
p,p’-DDD vs o,p’-DDT)
Comprobar perdida de sensibilidad o forma de pico.
Comprobar el RTL
Requerimientos de controles de calidad. Ejemplo
Durante proceso de
En rutina
validación
Recuperaciones, precisión al
LOQ
(5 replicas)
✓ Sobre Matriz
✓ Factores de correlación R2 > 0.990
✓ % RSD ≤ 20%
✓ Residuales < 20% (dif calc vs conc real) (80-120%)
Agilent CrossLab
Smart Alerts software
Diagnóstico basado en la Aplicación
Agilent 7890 GC Agilent Intuvo 9000 GC Agilent 8860 GC Agilent 8890 GC Agilent Infinity and Infinity II Agilent Infinity and Infinity II
and GC/MS systems and GC/MS systems and GC/MS systems and GC/MS systems 1260 LC systems 1290 LC systems
Próximamente: •Espectroscopía
•LC/MS systems
Smart Alerts – GC / GCMS
GC/GCMS LC
ALERTAS
Consumibles
Cuando se alcanza el limite de uso
PM
Cuando se aproxima el momento de
realizar un PM.
Alerta de avería
Cuando el instrumento falla. Posibilidad
de contactar con Agilent
Smart Alerts: 1, 2, 3
1 2 3
Instalación en 10 min. Se comparan los límites del instrumento con Notificación
No Internet connection required
los definidos en función de la aplicación
(customizable)
Smart Alerts Dashboard
Límites customizables
Smart Alerts GC - GCMS
Consumibles de GC-GCMS
Smart Alerts LC
Notificación por email!
Smart Alerts Emails
Links incluidos en la
notificación:
• Pedir consumibles
• Requerir mantenimiento
preventivo
Notificación de avería
Fault Indicator
Fault Alerts
Agilent
Conclusiones
Estar familiarizado con las variables de dichos componentes y como pueden afectar a los
2 resultados.
Tener capacidad crítica para modificar dichas variables y poder obtener métodos
3 analíticos robustos y optimizados.
jose.rivero@agilent.com
manuel_otero@agilent.com