UNIVERSIDAD DE CARABOBO FACULTAD DE CIENCIAS DE LA

SALUD ESCUELA DE CIENCIAS BIOMÉDICAS Y TECNOLÓGICAS

T.S.U EN HISTOTECNOLOGÍA
TRABAJO MONOGRÁFICO

COLORACIONES ALTERNATIVAS A LAS COLORACIONES

HEMATOXILINA/EOSINA

AUTORES:
MORENO ALEJANDRO
MARTINEZ
FRANCISCO
RODRIGUEZ MARIA
SEQUERA ERIKA
 OCTUBRE ,2019

INTRUDUCION

In the present work it will be announced through research in various articles referring to
laboratory supplies, specifically to alternative dyes to hematoxylin/eosin. Taking into
account the analysis, reflections and final conclusions, it will start from there for the
realization of the current research, in order to give effective, effective, efficient and
accessible alternatives to carry out the praxis in the various studies and techniques
applied to the tissues of the human body, which perform pathology laboratories. Given
the circumstances experienced for years in Venezuela, the obtaining of the relevant
reagents fort the studies and the full operation of the laboratories in the country, have
been severely affected, thus hindering studies and learning in the area of histopathology
beyond the situation in the country, research is a vital necessity for the innovation of
science, seeking to give better results, lower costs, demonstrate scientific character and
personal development of professionals, students and academics . it is expected that the
results obtained in the research will go beyond and be used in the daily practice of the
subject.

En el presente trabajo se dará a conocer mediante investigaciones en variados artículos

referentes a los insumos de laboratorios, específicamente a colorantes alternativos a la
Hematoxilina/Eosina. Tomando en cuenta los análisis, reflexiones y conclusiones
finales, se partirá de allí para la realización de la actual investigación, con el fin de dar
alternativas efectivas, eficaces, eficientes y accesibles para llevar a cabo la praxis en los
diversos estudios y técnicas aplicadas a los tejidos del cuerpo humano, que realizan los
laboratorios de anatomía patológica. Dadas las circunstancias vividas ya hace años en
Venezuela, la obtención de los reactivos pertinentes para los estudios y el pleno
funcionamiento de los laboratorios en el país, se han visto afectados de manera grave,
dificultando así los estudios y el aprendizaje en el área de la Histopatología. Más allá
de la situación vivida en el país, la investigación es una necesidad vital para la
innovación de la ciencia, buscando dar mejores resultados, abaratar costos, demostrar
carácter científico y desarrollo personal de los profesionales, estudiantes y académicos.
Se espera que los resultados obtenidos en la investigación transciendan más allá y sea
empleado en la práctica diaria de la materia.
UNIDAD TEMÁTICA I
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
El planteamiento del problema sugiere propuestas de solución para ser demostrada (1).
Consiste en exponer y establecer fuentes de información, de manera amplia y detallada,
otorgando métodos para recolectar y procesar dicha información (2).

En Venezuela, la constante escases de reactivos (colorantes), ha llevado a los

laboratorios de Anatomía Patológica a indagar en busca de medidas alternas, que
permitan cumplir con las técnicas específicas de investigación y que además otorguen
resultados viables.

Para esto es necesario conocer los diferentes componentes, similitudes y usos de los
colorantes que podrían sustituir a la llamada Coloración de rutina.

Esta problemática demanda un profundo análisis y un conjunto de reflexiones sobre los

diversos colorantes que podrían cumplir este rol.

Es pertinente señalar, que dicha tinción “está basada en dos etapas, la primera una
tinción nuclear por un colorante básico (hematoxilina) y la segunda, una tinción
citoplasmática por un colorante xantenico ácido (eosina)” (3).

Por lo expuesto anteriormente surgen los siguientes interrogantes:

¿Qué elementos constituyen la tinción hematoxilina-Eosina?

¿Qué colorantes podrían conformar la tinción alternativa?

¿Cuál sería la tinción alternativa?

OBJETIVOS
Objetivo General:
 ✓ Demostrar la existencia de Tinciones alternativas a la Hematoxilina-Eosina.

Objetivos Específicos:

✓ Identificar los elementos que constituyen la tinción de Hematoxilina Eosina

✓ Describir colorantes alternativos
✓ Establecer la tinción alternativa.
UNIDAD TEMATICA I OBJETIVO ESPECIFICO I

ELEMENTOS QUE CONSTITUYEN A LA TINCION DE RUTINA;

HEMATOXILINA EOSINA

La Hematoxilina Eosina (H.E) es la tinción de rutina por excelencia en los laboratorios

de anatomía patológica en todo en mundo, fue empleada por primera vez con fines
histológicos entre los años 1876-1880, por contemporáneos de Wilhelm Waldeyer entre
otros. Esta tinción a menudo provee información suficiente como para determinar un
diagnóstico fiable de alguna enfermedad basado en la organización celular.

Como su nombre lo indica, la tinción de H.E es una mezcla entra la hematoxilina y la

Eosina. La Hematoxilina en si misma no es un colorante, esta debe ser oxidada a
“Hemateina” (la hemateina es producto obtenido mediante la oxidación de la
hematoxilina en bruto extraída del “Palo de campeche”), sin embargo el producto usado
en la tinción es un complejo formado con Hemateína y los iones de aluminio, conocido
como “Hemateína de alumbre” ó “Hemalumbre”, pero se le denomina comúnmente
hematoxilina (4).

Por otro lado la Eosina “Y (amarilla) ” y “B (azulada)” son el resultado del Bromo
sobre la Fluorescencia (4).

Se argumenta que la H.E son moléculas orgánicas que poseen un sistemas conjugado de
doble enlace que representan orbitales moleculares altamente deslocalizados
extendiéndose sobre los anillos aromáticos. La luz blanca incidente contiene todas las
longitudes de ondas en el espectro visible. La hematoxilina absorbe la luz roja de baja
energía debido al sistema de dobles enlaces es más grande que el de la eosina, por lo
que los componentes teñidos por la Hematoxilina son azules. Por el contrario la eosina
absorbe el azul de la luz blanca incidente, permitiendo el paso del color rojo detectado.
1 -Tinción de Hematoxilina-Eosina. Vidal Santos Sara, Universidad Nacional de
Educación a distancia

http://e-spacio.uned.es/fez/eserv/bibliuned:master-Ciencias-CyTQ-
Ssantos/Santos_Vidal_Sara_TFM.pdf

En la histología se utilizan colorantes orgánicos obtenidos de moléculas simples como

el benceno o derivados, ya que estos se unen fácilmente al tejido y a sus estructuras
específicas

Será necesario hacer una aclaratoria entre los términos y especificar como nos
referiremos a estos. Desde un punto de vista químico, los colorantes tienen la capacidad
de absorber la luz incidente y generar cambios en las estructuras de sus moléculas,
permitiendo que la luz visible interaccione con determinados orbitales moleculares de la
misma. Los pigmentos son compuestos que contienen metales de transición y su color
se debe a cambios en los orbitales de los metales.

De acuerdo al trabajo investigativo de fin de master, módulo química orgánica de Vidal

Santos Sara. Establece: Las características más relevantes de los colorantes son las
siguientes

a) Absorben luz en el espectro visible (400-700 nm)

b) Poseen al menos un grupo cromóforo. Los cromóforos son los grupos funcionales de
la molécula responsables de la absorción de la radiación electromagnética de longitudes
de onda variables, dependiendo de la energía de las nubes de electrones. Por esta razón,
los cromóforos alteran la energía en la nube de electrones deslocalizados del colorante,
y esta alteración da como resultado que el compuesto absorba la radiación dentro del
rango visible
También cabe destacar la presencia de grupos auxocromos, grupos en la molécula de
colorante o tinte con influencia sobre el color (aunque el grupo responsable del color en
sí es el grupo cromóforo). Los auxocromos contienen pares de electrones sin compartir
que 6 se pueden deslocalizar junto con los electrones deslocalizados del cromóforo [5].
Los auxocromos pueden ser ácidos o básicos tales como [2]: Ácidos: grupo fenol
(Caromat-OH), grupo carboxílico (-COOH), grupo sulfónico (-SO3H) Básicos: -OH,
-OR, -SH, -NH2, -NHR, -NRR’, halógeno, etc.

c) Tienen un sistema conjugado por resonancia electrónica en una estructura alternada

entre enlaces dobles y simples, frecuentemente en complejas estructuras cíclicas.

Cuando alguna de estas características carece de la estructura molecular, el color se

pierde.

2 -Jocelyn H. Bruce-Gregorios, M.D. Técnicas Histopatológicas. JMC Press Inc.,

Quezon City, Filipinas. 1974
http://www.uam.es/departamentos/medicina/patologia/hematoxilina.htm

Por medio de las investigaciones y conclusiones de los autores ya mencionados en su

libro “Técnicas Histopatológicas”, se afirma que:

La Hematoxilina es un colorante natural que tiñe componentes aniónicos (ácidos)”

obtenido de la planta leguminosa “Haematoxylum campechianum” conocida también
con el nombre de “Palo de campeche”. Este es un colorante básico que tiñe de un color
azul-violeta a las estructuras ácidas como lo son los núcleos celulares debido a la
cantidad de ADN y ARN presentes, así como también el núcleo de los ribosomas y el
retículo endoplasmático rugoso también tienen gran afinidad hacia este colorante (5).

3-Sheehan, Dezna; Hrapchak, Barbara (1980). Theory and practice of Histotechnology

(2 Ed. edición). The C.V. Mosby Company. (en ingles)
https://web.archive.org/web/20080919164456/http://www.abbeycolor.com/eosin-y.php
En el libro “Theory and prctice oh Histotecnology” (en ingles) de los autores
previamente nombrados, se tiene en cuenta que:

La Eosina es un colorante en polvo, rojo, insoluble en agua, benceno o cloroformo, es

soluble en alcohol o soluciones alcalinas. Es de carácter ácido que tiñe sustancias
básicas a las cuales se les denomina eosinófilas . Este colorante se obtiene mediante la
acción del bromo sobre la fluorescencia, mediante la sustitución de grupos hidrógenos
por grupos halógenos o por grupos nitro en la fluorescencia. La eosina tiñe estructuras
como: citoplasma, colágeno y fibras musculares. Esta también se usa como
diferenciador para ciertos tipos de células entre los distintos tipos de fibras del tejido
conectivo y de las matrices (6).

Ahora bien, el estudio de Anatomía Patológica es uno de los pilares básicos del
diagnóstico médico. Esta ciencia se encargada de identificar las causas de diversas
enfermedades tanto a nivel macroscópico como microscópico.

Gracias a ella que se han podido observar gran variedades de tejidos, ayudando así, a
identificar la morfología, la posición relativa y la forma del núcleo de las células que lo
conforman.

Es pertinente señalar, que dicha tinción “está basada en dos etapas, la primera una
tinción nuclear por un colorante básico (hematoxilina) y la segunda, una tinción
citoplasmática por un colorante xantenico ácido (eosina)” (3).

Como ya hemos plateado anteriormente, en Venezuela la constante escasez de reactivos

(colorantes), ha llevado a los laboratorios de Anatomía Patológica a indagar en busca de
medidas alternas, que permitan cumplir con las técnicas específicas de investigación y
que además otorguen resultados viables. Para esto es necesario conocer los diferentes
componentes, similitudes y usos de los colorantes que podrían sustituir a la llamada
Coloración de rutina.
Por lo expuesto anteriormente surgen los siguientes interrogantes: ¿Cómo se encuentra
constituida la tinción hematoxilina-Eosina? ¿Qué colorantes podrían conformar la
tinción alternativa? ¿Por qué debería utilizarse una tinción alternativa?

Como objetivo general de esta investigación, se tiene: Demostrar la existencia de

Tinciones alternativas a la Hematoxilina-Eosina.

De igual forma, entre los objetivos específicos tenemos: Identificar los elementos que
constituyen la tinción alternativa, Describir colorantes alternativos y Establecer la
tinción alternativa

En consecuencia a lo anterior, esta investigación se justifica desde el punto de vista

social de la siguiente manera: Los sujetos involucrados tienden a sentir limitaciones
debido a la dificultad que les acarrea el no poseer todos los reactivos que constituyen la
HyE, por esta razón se planea identificar las posibilidades de sustituir en los laboratorios
de anatomía patológica a la Hematoxilina-Eosina por otros colorantes que compartan
sus funciones y características iónicas. Esto con la idea dar una alternativa factible y de
mayor acceso a todos el personal de laboratorio que hace vida y practica profesional en
el.

Desde el punto de vista científico: se puede señalar que muchos conocimientos respecto
a los colorantes y/o coloraciones, provienen de investigaciones o estudios realizados
alrededor del tiempo.

Desde el Punto de vista económico: Se platea una alternativa de bajo costo y de fácil
acceso para beneficio de todos los involucrados.
JUSTIFICACION

El estudio Anatomó Patológico es uno de los pilares básicos del diagnóstico médico.
Esta ciencia se encarga de identificar las causas de diversas enfermedades tanto a nivel
macroscópico como microscópico.

Por su parte un colorante se puede definir como un compuesto capaz de dar color a
células, tejidos, fibras y otros. A demás tienden a clasificarse como: Naturales aquellos
que provienen de plantas o animales, y artificiales, a aquellos que son derivados de
minerales procesados y manipulados en el laboratorio.

Ahora bien, la hematoxilina y la eosina, son de uso frecuente y se utilizan en histología

principalmente para poner en evidencia las características estructurales de las células
que componen los tejidos. Las particularidades de los compuestos que conforman esta
tinción hacen posible observar al microscopio óptico las células individualizadas.

Gracias a esta tinción se han podido observar grandes variedades de tejidos, ayudando
así, a identificar la morfología, la posición relativa y la forma del núcleo de las células
que lo conforman.

Es importante señalar que la situación de constate escasez en él país nos propone a

buscar nuevas alternativas para realizar los estudios anatomo patológicos a la hora de no
contar con los compuestos que componen esta coloración.

Por tal razón, la presente investigación pretende identificar las posibilidades de sustituir
en los laboratorios de anatomía patológica la Hematoxilina-Eosina por otros colorantes
que compartan sus funciones y características iónicas. Esto con la idea dar una
alternativa factible y accesible a los involucrados.