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Electroforesis

Anaguano C.*; Cachumba J.*; García N.*; Villacres A.*.


LABORATORIO DE BIOQUIMICA

*Escuela Politécnica Nacional, Facultad de Ingeniería Química y Agroindustria


Quito, Ecuador
e-mail: cinthya.anaguano@epn.edu.ec , julio.cachumba@epn.edu.ec, nathalia.garcia@epn.edu.ec , ana.villacres@epn.edu.ec

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presentes en las proteínas proporcionan un punto isoeléctrico
1. ¿Qué es la electroforesis? propio a cada una de ellas. (Peña et, 2004).
La electroforesis es un proceso de separación de moléculas en
Mientras que la influencia del pH, se atribuye mediante el
una mezcla, el cual consiste en el movimiento de las moléculas
punto isoeléctrico que es el pH donde la carga eléctrica neta
en un gel o un fluido dentro de un campo eléctrico
de la proteína es cero. Las técnicas electroforéticas se
relativamente uniforme. La separación de las moléculas se
generan a un pH constante por medio de una solución buffer.
puede dar en función de su carga, afinidad y tamaño. Se puede
(Castiñeiras, Fuentes, Queraltó, 1998)
separar distintos tipos de moléculas como proteínas, ácidos
nucleicos, plásmidos, ADN y ARN (Cruces, 1998, p. 14;
6. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Mendez, 2011).

2. ¿Cómo se determina el peso molecular mediante Castiñeiras, M. Fuentes, X. Queraltó, J. (1998).” Bioquímica
este método? Clínica y Patología Molecular: Volumen I”. (2da Edición).
Editorial Reverté. Barcelona, España. Pp: 170
Para determinar el peso molecular de una proteína
desconocida mediante electroforesis, se debe aislar la muestra Cruces. (1998). “Electroforesis Capilar”. (1ra edición).
en el mismo gel con un grupo de estándares de peso España: Editorial Universidad de Almería servicio de
molecular . Después de haber establecido los estándares y la publicaciones
muestra de proteína desconocida, el gel se procesa con la
tinción deseada y luego se decolora alrededor de 12 a 14 Khan Academy. (2017). “Electroforesis en Gel”. Recuperado
horas para representar las bandas de proteína (Manz, Dittrich, de: https://es.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-
Iossifidis, 2015). technology/dna-sequencing-pcr-electrophoresis/a/gel-
electrophoresis
Después de ejecutar el gel, se debe determinar la distancia de
migración relativa (Rf) de los patrones de proteína y la Mendez. (2011). “Electroforesis” .Recuperado de:
https://quimica.laguia2000.com/general/electroforesis
proteína desconocida (Manz, Dittrich, Iossifidis, 2015).

𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒 𝑚𝑖𝑔𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒í𝑛𝑎


Peña A., Arroyo A., Gómez A., Tapia R., (2004).
𝑅𝑓 = “Bioquímica”. (3ra. Edición). México D.F., México:
𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒 𝑚𝑖𝑔𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒𝑙 𝑓𝑟𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑑𝑒𝑙 𝑡𝑖𝑛𝑡𝑒
Editorial Limusa.

Alternativamente, también se puede usar un software HA Van Lith, M. Haller, LFM Van Zutphen y AC Beynen.,
apropiado para determinar los valores de Rf de las bandas (1992) . Analytical Biochemistry (4ta. Edición). México D.F.,
México: Editorial Imperial
resultantes. Se realiza un gráfico con los valores obtenidos
de las bandas en el estándar, el logaritmo del peso molecular
Manz, A., Dittrich, P., Iossifidis, D. y Pamme, N.
del polipéptido desnaturalizado con SDS y su distancia (2015). Química bioanalítica . Londres: Imperial College
relativa (Rf ) (Lith, Haller, Zutphen, 1992). Press.

3. ¿Cuál es la influencia del pH y la fuerza iónica de la


solución reguladora en la separación?

Las proteínas poseen la capacidad de separarse mediante


electroforesis, debido a que obtienen carga eléctrica
dependiente del medio, por lo tanto, las fuerzas iónicas