GRUPO: 4AV1

PRÁCTICA 2. CURVA TIPO DE AZUCARES REDUCTORES

Las enzimas son biocatalizadores que aceleran las reacciones químicas. El
proceso organizado del metabolismo solo es posible porque cada célula dispone
de un contenido enzimático determinado genéticamente. 
La cinética enzimática estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por
enzimas. Estos estudios proporcionan información directa acerca del mecanismo
de la reacción catalítica y de la especifidad del enzima. La medida se realiza
siempre en las condiciones óptimas de pH, temperatura, presencia de cofactores,
etc., y se utilizan concentraciones saturantes de sustrato. 

La curva tipo de azucares

reductores es un método
de química analítica empleado
para medir la
concentración de una sustancia
en una muestra
por comparación con una serie
de elementos de
concentración conocida.
La curva tipo de azucares reductores es un método de química analítica empleado
para medir la concentración de una sustancia en una muestra por comparación
con una serie de elementos de concentración conocida.
Es importante determinar la concentración de azúcares reductores totales en una
muestra, y con esta cuantificación se obtiene una curva de calibración siguiendo el
método del ácido 3,5 dinitrosalicílico (DNS). El método DNS determina la
presencia de grupos carbónicos libres (C=O) de los azucares reductores. El
procedimiento se basa en una reacción redox, que ocurre en la utilización de ácido
3,5 dinitrosalicílico para provocar la oxidación de los azucares y al mismo tiempo
su propia reducción endotérmica.
Después de esto se continua con la determinación, haciendo lecturas de
absorbancia en el espectrofotometro a 540 nm.

La curva tipo es la representación gráfica en un eje de coordenadas, de la

Absorbancia frente a la Concentración. Se ensayan varias soluciones de
concentración de azucares reductores conocida y se determinan sus
absorbancias, construyéndose así la curva tipo que servirá posteriormente para
conocer la concentración de azucares reductores a partir de la absorbancia
obtenida, mediante la interpolación lineal

La cinética de reacciones catalizadas

por enzimas
(en las que la velocidad
depende de las
condiciones en las que se lleva a
cabo la reacción),
se determina en primer lugar por las
propiedades

OBJETIVOS
 Construir una curva de azúcares reductores
  Establecer la relación entre la concentración de azúcares con la
observancia de cada muestra
DIAGRAMAS
2.1 PROCEDIMIENTO

a) Preparar una serie

de tubos de acuerdo
con la tabla 2.1

TABLA 2.1. MEZCLA DE REACCIÓN

b) Ajustar el c) Anotar las lecturas

espectrofotómetro a de absorbancia para
cero con el tubo cada tubo en la
testigo. siguiente tabla:

TABLA 2.2. ABSORBANCIA A 540 nm

PREPARACIÓN DE REACTIVOS
1) Sacarosa 0.2 M

Disolver 68.32g de Llevar a 1000 ml

sacarosa con agua destilada

2) Regulador de acetatos 0.05M Ph 4.7

Mezclar 1 litro de la solución

de ácido acético 0.05 M con
1 litro de la solución de
acetato de sodio 0.05 M.

Verificar el pH y ajustar
a 4.7 si es necesario.

A) Solución de ácido acético 0.05 M.

Medir 2.88 mL de ácido

acético glacial (frío) y aforar a
1 litro con agua destilada.

B) Solución de acetato de sodio 0.05M.

Pesar 6.8 g de acetato

3) 3,5-dinitrosalicilato
de sodio y aforar en 1
litro de agua destilada.
 Disolver en caliente 5
g de ácido 3,5-
dinitrosalicílico en 100
mL de NaOH 2 N
Adicionar 150 gramos
de tartrato de sodio a
250 mL de agua
destilada y calentar
hasta disolución
Mezclar las dos
soluciones y ajustar el
volumen final a 500 mL
con agua destilada.

(8 g de NaOH en 100
mL de agua destilada).

4) Glucosa 5 mM- Fructosa 5 mM

Pesar 0.9 g de Mezclarlas y llevar

glucosa y 0.9 g de a 1000 mL con
fructosa agua destilada.

BIBLIOGRAFIA

Enzimas. Cinética enzimática. (s. f.). ehu.eus. Recuperado 19 de abril de 2021, de

http://www.ehu.eus/biomoleculas/enzimas/enz3.htm#e

Instituto Politécnico Nacional. (s. f.). 7. Bradford Y DNS - Enzinetic UPIIG. enzineticupiig.

Recuperado 19 de abril de 2021, de

https://sites.google.com/site/enzineticupiig/bradford-y-dns