INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO #4

PRUEBAS CUALITATIVAS PARA CARBOHIDRATOS

MARÍA CAMILA ALMANZA

KEYLAR STEPHANÍA DAVID VILLADIEGO
JUAN DAVID PALOMO PÉREZ

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

QCO: YURY JANIO PARDO PLAZA

UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA
FACULTAD DE INGENIERÍAS
INGENIERÍA AMBIENTAL

MONTERÍA – CÓRDOBA

2.019
 INTRODUCCIÓN.

Los carbohidratos son compuestos que contienen cantidades grandes de grupos hidroxilo. Los
carbohidratos más simples contienen una molécula de aldehído a estos se los llama
polihidroxialdehidos o una cetona (polihidroxicetonas). Todos los carbohidratos pueden ser como
monosacáridos, oligosacáridos o polisacáridos (GONZALES & ARIAS, 2012, p.2).
Los carbohidratos se pueden clasificar como aldosas y cetosas, según posean la función aldehído (‒
CHO) o cetona (‒CO); además en su estructura poseen grupos hidroxilo (‒OH) (ESPINOSA, 2013,
p.21).
De acuerdo con lo anterior por medio de este informe se pretende identificar los carbohidratos por los
cambios que se dieron en las sustancias al ser mezcladas almidón, fructosa, y sacarosa, haciendo
referencia a estos como fuentes de carbohidratos, para luego al aplicarles los reactivos como el lugol
y el fehling a y b que permitieron identificar y comprobar los principales tipos de carbohidratos al que
pertenecían cada una de las mezclas, si fueron monosacáridos, disacáridos o polisacáridos, y así
verificar si fueron positivos o negativos teniendo en cuenta los colores que se adquirieron en cada una
de las sustancias y cuando fueron expuestas al calor con el baño maría. Existen muchos tipos de
carbohidratos se encuentran principalmente en los alimentos tipo almidón, como el pan, fideos y arroz,
así como en algunas bebidas endulzadas con azúcares. La principal función es proporcionar energía,
también desempeñan una función importante para la estructura y el funcionamiento de las células,
tejidos y órganos (JARAMILLO, BORBOR, GARCIA, & JOHN GONGORA, 2013, p.2).
 OBJETIVOS.
⮚ Reconocer la presencia de carbohidratos en una muestra problema mediante la prueba de
molish.
⮚ Diferenciar carbohidratos reductores de no reductores por su comportamiento frente al
reactivo de Benedict.
⮚ Realizar ensayos cualitativos para el reconocimiento de carbohidratos específicos.
 MARCO TEÓRICO.

● ¿QUÉ SON LOS CARBOHIDRATOS?

Los carbohidratos son unas biomoléculas que también toman los nombres de hidratos de carbono,
glúcidos, azúcares o sacáridos; aunque los dos primeros nombres, los más comunes y
empleados, no son del todo precisos, ya que no se tratan estrictamente de átomos de
carbono hidratados, pero los intentos por sustituir estos términos por otros más precisos no
han tenido éxito. Estas moléculas están formadas por tres elementos fundamentales: el
carbono, el hidrógeno y el oxígeno, este último en una proporción algo más baja. Su
principal función en el organismo de los seres vivos es la de contribuir en el almacenamiento
y en la obtención de energía de forma inmediata, sobre todo al cerebro y al sistema
nervioso.
Esto se cumple gracias a una enzima, la amilasa, que ayuda a descomponer esta molécula en
glucosa o azúcar en sangre, que hace posible que el cuerpo utilice la energía para realizar
sus funciones.

● TIPOS DE CARBOHIDRATOS.
Existen cuatro tipos, en función de su estructura química: los monosacáridos, los disacáridos, los
oligosacáridos y los polisacáridos.

Monosacáridos
Son los más simples, ya que están formados por una sola molécula. Esto los convierte en la principal
fuente de combustible para el organismo y hace posible que sean usados como una fuente
de energía y también en biosíntesis o anabolismo, el conjunto de procesos del metabolismo
destinados a formar los componentes celulares. También hay algunos tipos de
monosacáridos, como la ribosa o la desoxirribosa, que forman parte del material genético del
ADN. Cuando estos monosacáridos no son necesarios en ninguna de las funciones que les
son propias, se convierten en otra forma diferente como por ejemplo los polisacáridos.

Disacáridos
Son otro tipo de hidratos de carbono que, como indica su nombre, están formados por dos moléculas
de monosacáridos. Estas pueden hidrolizarse y dar lugar a dos monosacáridos libres. Entre
los disacáridos más comunes están la sacarosa (el más abundante, que constituye la
principal forma de transporte de los glúcidos en las plantas y organismos vegetales), la
lactosa o azúcar de la leche, la maltosa (que proviene de la hidrólisis del almidón) y la
celobiosa (obtenida de la hidrólisis de la celulosa).

Oligosacáridos
La estructura de estos carbohidratos es variable y pueden estar formados por entre tres y nueve
moléculas de monosacáridos, unidas por enlaces y que se liberan cuando se lleva a cabo un
proceso de hidrólisis, al igual que ocurre con los disacáridos. En muchos casos, los
 oligosacáridos pueden aparecer unidos a proteínas, dando lugar a lo que se conoce como
glucoproteínas.

Polisacáridos
Son cadenas de más de diez monosacáridos cuya función en el organismo se relaciona
normalmente con labores de estructura o de almacenamiento. Ejemplos de polisacáridos
comunes son el almidón, la amilosa, el glucógeno, la celulosa y la quitina.

● FUNCIÓN DE LOS CARBOHIDRATOS

Aunque su función principal es la energética, también hay ciertos hidratos de carbono cuya función
está relacionada con la estructura de las células o aparatos del organismo, sobre todo en el
caso de los polisacáridos. Estos pueden dar lugar a estructuras esqueléticas muy
resistentes y también pueden formar parte de la estructura propia de otras biomoléculas
como proteínas, grasas y ácidos nucleicos. Gracias a su resistencia, es posible sintetizarlos
en el exterior del cuerpo y utilizarlos para fabricar diversos tejidos, plásticos y otros
productos artificiales.
 MATERIALES Y REACTIVOS.

✔ Estufa o calentador.
✔ Pipetas de 5 y 10ml
✔ Beakers de 100 y 400ml
✔ 10 tubos de ensayo
✔ Pinza para tubos de ensayo
✔ Gradilla
✔ Gotero
✔ Papel tornasol
✔ Soluciones de glucosa, galactosas, ribosa, arabinosa, sacarosa, lactosa, fructosa,
almidón, leche.
✔ Solución de yodo
✔ Reactivo de molish
✔ Ácido sulfúrico concentrado
✔ Reactivo de benedict.
✔ Reactivo de barfoed
✔ Reactivo de vial
✔ Reactivo de selliwanoff
✔ Alcohol amílico
✔ Ácido clorhídrico concentrado
✔ Hidróxido de sodio 1M
 PROCEDIMIENTO.
Al llegar al laboratorio el docente hizo las respectivas aclaraciones relacionadas con la práctica a
realizar denominada Pruebas cualitativas para carbohidratos, en donde explicó cada una de las
reacciones que se llevarían a cabo posteriormente en el laboratorio.
⮚ PRUEBA DE MOLISH: En un tubo de ensayo se agrega 1ml del carbohidrato, que en esta
prueba será leche, se le agregan 5 gotas del reactivo de Molish y 1ml de ácido sulfúrico.
⮚ PRUEBA DE BENEDICT: Se toman 3 tubos de ensayo, al #1 se le agregó 0.5ml de lactosa,
al #2 0.5ml de glucosa, al #3 0.5ml de sacarosa. Estos tres tubos son llevados a calentar en
baño de María durante aproximadamente 3 minutos.
⮚ PRUEBA DE BARFOED: Se toman 3 tubos de ensayo, al #1 se le agrega 0.5ml de
galactosa, al #2 0.5ml de ribosa, al #3 0.5ml de almidón. Luego a los tres tubos se les
agrega NaOH al 20% y son llevados a baño de María por aproximadamente 2 minutos.
⮚ PRUEBA DE BIAL: Se toman 3 tubos de ensayo, al #1 se le agrega 0.5ml de ribosa, al #2
0.5ml de arabinosa, al #3 0.5ml de almidón. A los tres tubos de ensayo, se les agrega 1ml
de reactivo de vial, son llevados posteriormente a calentar en baño de María hasta hervir,
luego de unos minutos se ponen a reposar en la gradilla. Luego del reposo, se les agrega a
los tres tubos 1ml de H2SO4, ya que no se contaba la disponibilidad del alcohol amílico.
⮚ PRUEBA DE SELLIWANOFF: Se toman 3 tubos de ensayo, al #1 se le agrega 0.5ml de
fructosa, al #2 0.5ml de arabinosa, al #3 0.5ml de glucosa. A los tres tubos de ensayo se les
agrega 1ml de solución de selliwanoff y se llevan a calentar en baño de María por un minuto.
⮚ PRUBA PARA SACAROSA: Se toma 1 tubo de ensayo, al cual se le agrega 2.5ml de sacara
y 3 gotas de ácido clorhídrico. Se lleva a calentar en baño de María durante
aproximadamente 5 minutos, luego se deja en reposo en la gradilla y se le agrega 1ml de
NaOH. Se toma un tubo de ensayo extra al que está en uso, y el contenido de dicho tubo de
divide, dejando así igual cantidad de contenido en ambos tubos, denominados tubo A y tubo
B. al tubo A se le adiciona 1ml de reactivo de Benedict y al tubo B se le adiciona 1ml de
Selliwanoff.
⮚ PRUEBA PARA POLISACARIDOS: Se toma 1 tubo de ensayo, al cual se le agrega 1ml de
almidón, más una gota de solución de yodo. Este contenido es llevado a calentar a baño de
María por unos minutos, luego es llevado a la gradilla para dejar en reposo hasta
enfriamiento.
 RESULTADOS.

✔ PRUEBA DE MOLISH.
OBSERVACIONES CONTENIDO DEL TUBO

INICIALES 3 capas. Capa inferior incolora, sin precipitado, capa superior densa
y blanca con pequeñas burbujas. En lapa media se formó un
anillo morado delgado.

FINALES L3capas capas se ven reducidas a 2, la parte inferior que era

incolora pasa a tomar la coloración morada del anillo, ya que
este se volvió más grande. La capa superior continúa siendo
blanca y densa.

✔ PRUEBA DE BENEDICT.
OBSERVACIONES TUBO #1: lactosa TUBO #2: glucosa TUBO #3: sacarosa
INICIALES Una sola capa, contenido incoloro
+ REACTIVO DE BENEDICT
Coloración azul Coloración azul Coloración azul

+ BAÑO DE MARÍA Coloración verde Coloración verde Continúa azul

FINALES Coloración rojo ladrillo.
Coloración rojo ladrillo.
Coloración azul.

✔ PRUEBA BARFOED:
OBSERVACIONES TUBO #1: Galactosa
TUBO #2: Ribosa TUBO #3: Almidón
INICIALES Coloración azul, unaColoración
sola azul-lilaColoración
casi azul baja.
capa incolora
+ NaOH 2’: Coloración verde2’: Coloración naranja2’: formación de dos
+ BAÑO DE MARÍA 5’: coloración naranja
5’: coloración rojo ladrillo capas,
fuerte precipitado color
azul.
5’: dos capas, precipitado
adquiriendo
coloración verde
FINALES Coloración rojo ladrillo
Coloración verde oscuro
Coloración verde bajo
✔ PRUEBA DE BIAL:
OBSERVACIONES TUBO #1: Ribosa TUBO #2: Arabinosa
TUBO #3: Almidón
INICIALES Contenidos incoloros, no hay precipitado.
+ BAÑO DE MARÍA El contenido adquirió una coloración amarilla turbia, con pequeñas
+REPOSO partículas negras en su interior, sin precipitado.
+ H2SO4 Contenido de 3 capas,
Contenido de 2 capas,
Contenido de 3 capas, no
capa inferior precipitado de hay precipitado,
turbia con un color negro capa inferior
anillo rojo ladrillo concentrado, incolora, capa
que lo divide de la resto del media de
capa media que contenido de coloración negro
tiene un color color turbio con concentrado y
negro pequeñas capa superior
concentrado con partículas. turbia con
pequeños partículas
destellos azules, negras.
capa superior
incolora con
pequeñas
partículas.

✔ PRUEBA DE SELLIWANOFF:
OBSERVACIONES TUBO #1: Fructosa TUBO #2: Arabinosa
TUBO #3: Glucosa
INICIALES Contenido sin coloración ni precipitado
FINALES Contenido con un Contenido
leve con un Contenido
leve incoloro, una
subtono rosado, subtono amarillo, sola capa, no
una sola capa, no una sola capa, no hay precipitado.
hay precipitado. hay precipitado.

✔ PRUEBA PARA SACAROSA:

OBSERVACIONES TUBO 1 CON SACARA
INICIALES No hay coloración
+NAOH Adquiere una coloración amarilla fuerte
+ BAÑO DE MARÍA
TUBO A (Benedict) Adquirió una coloración amarilla baja
TUBO B (Selliwanoff) Adquirió una coloración rojo ladrillo

✔ PRUEBA DE POLISACARIDOS:
OBSERVACIONES TUBO 1 (ALMIDÓN + SLN YODO)
INICIALES Coloración morada, una sola capa
FINALES Al calentar no hubo cambios.
Al enfriar el contenido pasó a tener una
coloración azul.
 ANÁLISIS DE RESULTADOS.

✔ PRUEBA DE MOLISH: En esta prueba obtuvimos que: En el tubo de ensayo se

formaron dos capas en las cuales su parte superior era granulosa y en la parte
inferior de la capa se formó un concentrado grueso de color blanco. La prueba de
molish, es una prueba que da positiva en presencia de lactosa que es un azúcar
reductor, es la prueba que reduce al azúcar de la leche dando una coloración al
formar el complejo.

✔ PRUEBA DE BENEDICT: En esta prueba obtuvimos los siguientes resultados:

En el primer tubo el cual contenía lactosa, se pudo observar la formación de un precipitado de
color rojo, lo cual indica que hay presencia de azúcar reductora.
En el segundo tubo el cual contenía Glucosa, se pudo observar la formación de un precipitado
de color rojo, lo cual indica que hay presencia de azúcar reductora.
En el tercer tubo el cual contenía sacarosa, no se observó ninguna reacción.
Reactivo de benedict, Es oxidante suave capaz de oxidar al azúcar de la leche ya que este
azúcar presenta al grupo carbonilo que al encontrarse libre hace que el azúcar sea
reductor, esta prueba se basa en la capacidad del carbohidrato de reducir el Cu2+ en
 un medio alcalino a Cu+. Este Cu+ se oxida y precipita en forma de Cu2O, lo que
proporciona la coloración positiva de la reacción.

✔ PRUEBA DE BARFOED: En esta prueba obtuvimos los siguientes resultados:

En el primer tubo el cual contenía galactosa se observó la formación de un precipitado de
color rojo ladrillo, lo cual indica la presencia de monosacáridos.
En el segundo tubo el cual contenía ribosa se observó la formación de un precipitado de color
verde oscuro, lo cual indica la presencia de monosacáridos.
En el tercer tubo el cual contenía almidón se observó una coloración de color verde bajo.
Reactivo de barfoed; Siempre da una prueba positiva en presencia de azúcar reductora
porque al formarse el óxido que al precipitarse da una coloración, mientras que este
reactivo en presencia de almidón que es un polisacárido no reductor no podrá formar
al oxido cuproso dando una prueba negativa.

✔ PRUEBA DE BIAL: En esta prueba obtuvimos los siguientes resultados:

En el primer tubo el cual contenía ribosa se observaron 3 capas, capa inferior turbia con un
anillo rojo ladrillo que lo divide de la capa media que tiene un color negro concentrado
con pequeños destellos azules, capa superior incolora con pequeñas partículas.
En el segundo tubo el cual contenía arabinosa se observaron 2 capas, precipitado de color
negro concentrado, resto del contenido de color turbio con pequeñas partículas.
En el tercer tubo se observó un contenido de 3 capas, no hay precipitado, capa inferior
incolora, capa media de coloración negro concentrado y capa superior turbia con
partículas negras.
Prueba bial, es una prueba para identificar azucares pentosas, ya que la pentosa al reaccionar
con ácido clorhídrico forma el furfural.

✔ PRUEBA DE SELLIWANOFF: En esta prueba obtuvimos los siguientes resultados:

En el primer tubo el cual contenía fructosa se observó la aparición de una coloración rosada
lo que indica que esta prueba es positiva para cetosas.
En el segundo tubo el cual contenía arabinosa se observó un leve subtono amarillo.
En el tercer tubo el cual contenía glucosa no se presentó cetosas.
Prueba salliwanoff, se usa para azúcares aldosa y cetosa que en presencia de ácidos
minerales y calentándolas sufren deshidratación la cual da como resultado la
formación de un anillo pentagonal de furfural que luego se condensa dando una
coloración roja.

✔ PRUEBA PARA SACAROSA: En esta prueba obtuvimos los siguientes resultados:

En la prueba de Benedict observamos una coloración amarilla baja.
En la prueba de Selliwanoff observamos un color rojizo denso.
Con el NaOH se observa una coloración amarilla fuerte.
Prueba sacarosa, es un disacárido que carece de poder reductor esto se debe a que carece
de aldehído y cetonas libres y al aplicar la prueba de Benedict y Salliwanoff están dan
 positivas, la hidrolisis acida hace que la glucosa y fructosa reaccionen con el reactivo
de Benedict y Salliwanof.

✔ PRUEBA DE POLISACARIDOS: Observamos que al calentarse pierde el color y al

enfriarse vuelve el color azul. Prueba polisacárido, reaccionan con el yoduro de
potasio dando como resultado un poli yoduro toma una coloración azulina indicando
la presencia del halógeno en el almidón.

CUESTIONARIO.

1. Escriba una de las reacciones en las diferentes pruebas para carbohidratos.

2. Explique los resultados de cada una de las pruebas realizadas.
3. Explique estructuralmente, porqué la maltosa es un azúcar reductor y porqué el almidón no lo
es.
4. Consulte enfermedades producidas por el mal metabolismo de los carbohidratos.
5. ¿por qué la celulosa a pesar de estar formada por moléculas de glucosa es insoluble en agua?
6. ¿por qué la sacarosa es un azúcar no reductor? Consulte las posibles estructuras de las
muestras problemas.
7. Consulte el fundamento de otras técnicas usadas para la determinación de la glucosa en el
laboratorio.
 SOLUCIÓN DEL CUESTIONARIO.
1. .
● PRUEBA DE MOLISH:

● PRUEBA DE BENEDICT.
● PRUEBA DE BARFOED:

● PRUEBA DE BIAL:
 ● PRUEBA DE SELLIWANOFF:

2. LA RESPUESTA SE ENCUENTRA EN EL ANÁLISIS DE RESULTADO.

3. La maltosa hace parte de los azucares reductores porque tiene un carbono anomérico libre
capaz de oxidarse, si puede oxidarse, entonces puede reducir a otro compuesto.
En cambio el almidón, si bien sí posee carbonos anoméricos libres capaces de oxidarse, hay muy
pocos en comparación a la cantidad de unidades de monosacáridos que lo componen, es
decir, para ser más específicos solo los de los extremos de la larga cadena que compone al
almidón, puede oxidarse y se estima que una cadena de almidón que a su vez incluye
ramificación tiene más de 10000 residuos de monosacáridos, entonces, si bien el almidón
puede oxidarse, su poder reductor es prácticamente nulo, debido al muy bajo rendimiento.

4.
- GLUCOGENOSIS: Las enfermedades por almacenamiento de glucógeno (glucogenosis)
se producen cuando hay un defecto en las enzimas involucradas en el metabolismo del
glucógeno, dando lugar a anomalías del crecimiento, debilidad y confusión.

- GALACTOSEMIA: La galactosemia (un alto nivel de galactosa en la sangre) es

consecuencia de la falta de las enzimas necesarias para metabolizar la galactosa, un
 azúcar presente en la lactosa (azúcar de la leche). Se crea un metabolito tóxico para el
hígado y los riñones. Este metabolito también daña el cristalino del ojo, produciendo
cataratas.

- INTOLERANCIA HEREDITARIA A LA FRUCTOSA: La intolerancia hereditaria a la

fructosa está causada por la falta de la enzima necesaria para metabolizar la fructosa.
Una cantidad muy pequeña de fructosa provoca niveles bajos de glucosa en la sangre, lo
que puede derivar en lesión renal y hepática.

- MUCOPOLISACARIDOSIS: Los mucopolisacáridos son un grupo de trastornos

hereditarios en los cuales las moléculas complejas de azúcar no se degradan
normalmente y, por lo tanto, se acumulan en cantidades perjudiciales en los tejidos del
organismo. El resultado es una apariencia facial característica y anomalías en los huesos,
los ojos, el hígado y el bazo, a veces acompañadas de retraso mental.

- TRASTORNOS DEL METABOLISMO DEL PIRUVATO: Los trastornos del metabolismo

del piruvato tienen su origen en la imposibilidad de metabolizar una sustancia denominada
piruvato. Estos trastornos causan una acumulación de ácido láctico y diversas anomalías
neurológicas.

5. La celulosa tiene una estructura lineal o fibrosa, en la que se establecen múltiples puentes de
hidrógeno entre los grupos hidroxilo de distintas cadenas yuxtapuestas de glucosa,
haciéndolas impenetrables al agua, lo que hace que sea insoluble en agua, y originando fibras
compactas que constituyen la pared celular de las células vegetales.

6. La sacarosa es el término técnico para el azúcar de mesa, tales como la caña de azúcar o
azúcar blanco. Se compone de la combinación de una molécula de glucosa y una molécula
de fructosa. La razón por la que la sacarosa es un azúcar no reductor es que no tiene
ningún aldehído libre o un grupo ceto. Además, su carbono anomérico no está libre y no se
puede abrir fácilmente su estructura para reaccionar con otras moléculas.

7.

- GLUCOSA-DESHIDROGENASA: En el método de la glucosa-deshidrogenasa, la glucosa

es utilizada para reducir un cromóforo que permita ser medida espectrofotométricamente
o para generar una corriente eléctrica.
- GLUCOSA-OXIDASA: La glucosa-oxidasa es una flavoenzima que cataliza las reacciones
descritas a continuación. La reacción de la peroxidasa puede medirse
espectrofotométricamente, y se inhibe con concentraciones altas de ácido úrico, ácido
ascórbico, bilirrubina, creatinina, dopamina, y ácido cítrico. Este sistema depende de la
 presión parcial de oxígeno, que compite con la reacción y produce peróxido de hidrogeno,
por tanto, cuanto mayor sea esta presión parcial de oxígeno, la glucosa medida
eléctricamente será más baja. La glucosa oxidasa también puede utilizarse en otros
sistemas eléctricos.
- HEXOCINASA: La prueba de la hexocinasa esta aceptada como el método de referencia
para la determinación de glucosa. La concentración de glucosa es proporcional al índice
de producción de NAD (P) H, medido espectrofotométricamente. Dependiendo de la
fuente de glucosa-6-fosfato-deshidrogenasa, la enzima puede ser específica para el
NAPD o utilizar además NAD. Las muestras hemolizadas pueden crear problemas, ya
que el contenido liberado de los eritrocitos puede interferir en la relación estequiometria
entre la glucosa y la acumulación de NAD (P) H.

CONCLUSIÓN

En esta práctica llegamos a conocer la importancia de cada una de las pruebas que realizamos, y así
poder conocer carbohidratos, pentosas, aldosas, cetosas y acción reductora de azucares.
Es de mucha importancia conocer sobre el tema de carbohidratos, son bases fundamentales para la
estabilidad del organismo y así diferenciar que sustancias pueden ingerir ciertos organismos, cual las
pueden rechazar y como pueden reaccionar algunas con un cierto organismo.
 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.
https://cuidateplus.marca.com/alimentacion/diccionario/carbohidratos.html

http://www.diabetes.org/es/alimentos-y-actividad-fisica/alimentos/que-voy-a-
comer/comprension-de-los-carbohidratos/que-son-carbohidratos.html
https://medlineplus.gov/spanish/carbohydrates.html