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AISLAMIENTO DE CASEINA

DURÁN VELANDIA, Yessica Andrea; GALVIS ROJAS, Marlon Andrés;

PACHECO SUAREZ, María Teresa.

Facultad de ingenierías y Arquitectura, Universidad de Pamplona,

Colombia 2017.

RESUMEN

En esta práctica se realizó el aislamiento de caseína, llevando a cabo la

separación de la proteína de la leche a partir de su punto isoeléctrico, a la
cual, se llevó a cabo con diferentes tipos de leche como la leche
descremada, leche materna y leche de cabra. Para así identificar el
precipitado, Posteriormente se usó el potenciómetro equilibrado. Donde
también se usó el ácido clorhídrico para la variación del pH. Usando el agua
destilada y el etanol para obtener mayor rendimiento de la proteína
colocando los tubos de centrifugar en la centrifugadora para así identificar el
suero y la caseína final.

Palabras claves: Caseína, deslactosada, leche, pH, temperatura, titulación.

ABSTRACT

In this practice the isolation of casein was carried out, carrying out the
separation of the milk protein from its isoelectric point, to which, it was carried
out with different types of milk such as skim milk, breast milk and milk of goat.
In order to identify the precipitate, the balanced potentiometer was
subsequently used. Where hydrochloric acid was also used for pH variation.
Using the distilled water and ethanol to obtain a higher yield of the protein,
placing the centrifuge tubes in the centrifuge to identify the final whey and
casein.

Keywoords: Casein, deslactosada, milk, pH, temperature, titration

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INTRODUCCION
Cada proteína tiene una
composición de aminoácidos
específica que las hace diferentes
unas de otras y, por lo tanto, su
comportamiento en disoluciones
también es diferente. Por lo
general las proteínas fibrosas son
solubles en agua y resistentes a la
degradación enzimática, sin
embargo, con soluciones de cierta
fuerza iónica se pueden solubilizar.
Las proteínas globulares son
relativamente más solubles en
agua y en soluciones de baja
fuerza iónica, aunque algunas
coagulan cuando se calientan.
La composición de aminoácidos,
es también responsable del
comportamiento de las proteínas
en diferentes condiciones de pH.
Así al acidificar o alcalinizar una
determinada proteína, ésta puede
llegar a su punto isoeléctrico, es
decir, alcanzar una carga neta de
cero y por lo tanto precipitar. La
leche es un producto rico en
proteínas, tales como las caseínas
y globulinas, además de contener
carbohidratos y ácidos grasos. De
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la leche se puede separar la
caseína por precipitación en su
punto isoeléctrico (pH 4,6). [1]
La preparación pura de una
proteína es esencial antes de
determinar sus propiedades,
estructura y composición, por lo
que es necesario aislarla. Los
métodos de separación de
proteínas aprovechan propiedades
tales como, la carga tamaño y
solubilidad, que varía entre una y
otra proteína.
La caseína es una proteína
conjugada de tipo fosfoproteína
que en su fase soluble se
encuentra asociada al calcio
(fosfato de calcio) en un complejo
que se denomina caseinógeno. Por
el cual es necesario llevar a cabo
toda una serie de pasos para
aislarla de la leche y eliminar las
grasas e hidratos de carbono que
esta contiene. La caseína se
separa de la leche la cual tiene un
pH aproximadamente de 7 por
acidificación llevando a la caseína
a su punto isoeléctrico (de 4,6)
donde se precipita.
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Las fosfoproteínas son un grupo de PARTE EXPERIMENTAL

proteínas que están químicamente
unidas a una sustancia que Materiales
contiene ácido fosfórico. En la 1 PH-metro (SCHOTT)
caseína la mayoría de los grupos
fosfato están unidos por los grupos 1 Agitador magneto
hidroxilo de los aminoácidos serina
1 Plancha de calentamiento con
y treonina. La caseína en la leche
agitación (HP 220) Hotplate/stirrer
se encuentra en forma de sal
cálcica (caseinato cálcico). La 1 balanza analítica (marca
caseína representa cerca del 77% OHAUS)
al 82% de las proteínas presentes
en la leche y el 2,7% en Centrifuga (marca: K Centrifuge
composición de la leche líquida. [2] PCL SERIES)

Todas las proteínas se componen
básicamente de 20 unidades
estructurales denominadas
aminoácidos por enlaces péptidos
provocando características
específicas en cada una. Las
propiedades de las proteínas se
ven afectadas por modificaciones
en pH, la absorción de proteínas
mediante intercambio iónico
depende del pH, es decir de
valores de pH por debajo del punto
isoeléctrico la carga neta de las
proteínas es positiva y la molécula
se ve absorbida con mayor fuerza
en intercambiadores catiónicos
como la carboximetil celulosa
sónica. [3]
Reactivos
HCl al 20% concentrado. (Pureza
36.5-38%, marca: J.T. Baker).
Etanol
PROCEDIMIENTO
ANALISIS Y RESULTADOS
En la práctica de laboratorio se
adiciono 100 mL de leche tratada
de vaca en un vaso de precipitado
de 250 mL, a la cual, previamente
se eliminó la mayor cantidad de
grasa posible de la leche que se
tenía desde el día anterior de la
práctica, donde esta se dejó

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enfriando para que se separa la Después el precipitado se repartió

parte lipídica. en 8 tubos de centrifuga (7 con la
solución y 1 con agua) para
Posteriormente se preparó una equilibrar con un mismo peso; se
solución de 50 mL a una centrifugo durante 10 minutos a
concentración de 20% de HCl. el 2000 rpm.
cual se realizó los siguientes
cálculos para dar con la cantidad Seguidamente se aplicó
necesaria de HCl que se debían centrifugación a 2000 rpm por 10
adicionar, dando como resultado minutos con 20 mL de agua (2
un volumen de 27,03 mL puros de veces) y 15 mL de etanol, donde
HCl llevando así a realizar la posteriormente se pesó obteniendo
preparación de la solución. 3,753 gramos de caseína de 100
mL donde su rendimiento fue
𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 bueno ya que obtuvo un margen
%
𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 de error muy bajo comparado al
𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜 (𝑚𝐿)
= ∗ 100 rendimiento reportado en la
𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖𝑜𝑛 (𝑚𝐿) literatura (6 gramos por 200 mL),
𝑚𝐿 𝐻𝐶𝑙 estos márgenes de error se deban
20% = ∗ 100 a que no hubo buena manipulación
50 𝑚𝐿
del material, es probable a que
20% ∗ 50𝑚𝐿 esto se produzca en el momento
𝑚𝐿 𝐻𝐶𝑙 =
100% de la eliminación del sobrenadante
= 10 𝑚𝐿 𝐻𝐶𝑙 en cada una de las
centrifugaciones o no se haya
100
𝑚𝐿 𝐻𝐶𝑙 = 10 ∗ = 27,03 𝑚𝐿 𝐻𝐶𝑙 dejado precipitar bien la proteína,
37 proceso en el que se pudo
A continuación se midió el pH de la arrastrar cantidades estimadas de
leche y por medio de la proteína junto con el agua utilizada
acidificación con HCl al 20% se para eliminar HCl.
llevó el pH de la misma hasta 4,6.
Las caseínas son un conjunto
Donde se dejó reposar alrededor
heterogéneo de proteínas, por lo
de 15 minutos aproximadamente.
que es difícil fijar una definición.

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Sin embargo, todas las proteínas
englobadas en lo que se
denomina caseína tienen una
característica común: precipitan
cuando se acidifica la leche a pH
4,6. Por ello, a la caseína también
se le suele denominar proteína
insoluble de la leche.
CONCLUSION
Se concluye que se puede obtener
la separación de las proteínas de
la leche al adicionarle HCl ya que
baja su pH con ayuda de la
temperatura, llegando a un punto
isométrico, ya que la caseína
precipita a un pH 4,6.
El aislamiento de la proteína
(caseína) de la leche, es posible
dado a la rapidez de
sedimentación de la misma al
utilizar centrifuga y la poca
solubilidad que la proteína tiene
cuando se lleva a su punto
isoeléctrico. El rendimiento de la
proteína puede darse diferente si
se aplican métodos mal
manipulados generando márgenes
de errores.
BIBLIOGRAFIA
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1. MANUAL DE GUIAS DE LABOR
ATORIO DE BIOQUIMICA DE ALI
MENTOS
2.http://es.slideshare.net/vegabner/
aislamiento-de-la-caseina-de-la-lec
he
3. uruguayeduca.edu.uy/pluginfle.p
hp/30334/mod_resource/content/1/
practica3FQB.pdf
ANEXOS
1. ¿Cuántos gramos de caseína
obtuvo?
R: Se obtuvieron 3,753 gramos de
caseína de 100 mL donde su
rendimiento fue bueno ya que
obtuvo un margen de error muy
bajo.
2. ¿Qué porcentaje representa
del volumen inicial?
R: Representa un porcentaje de
caseína de 44% dado que de los
100 mL de leche inicial, después
de la 1ra centrifugada se obtuvo 66
mL de sobrenadante, es decir el
suero de la leche y de la parte
proteica se mantuvo 44 mL. Al
realizar los respectivos cálculos se
dio un valor de 44%.
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3. Según la literatura, ¿Cuántos

gramos debía obtener? ¿Fue
bueno el rendimiento?
R: En la práctica realizada de
aislamiento de caseína con la
leche alquería deslactosada según
su literatura se debió obtener por
cada 200 mL de leche 6 gramos de
proteína (caseína). El rendimiento
de la leche fue buena dado que se
obtuvo uno margen de error muy
mínimo a comparación con las
otras pruebas.

4. ¿Con cuál de los tipos de

leche usados se obtuvo más
rendimiento de proteína?
R:

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