Discusión de resultados

Al realizar la marcha fotoquímica con los extractos obtenidos de las hojas de eucalipto
(Eucalyptus), romero (Rosmarinus officinalis) y borrachero (Brugmansia candida pers.) mediante
soxhlet y después de semisecar por rotaevaporacion ver figura 1, se obtuvo los resultados que se
muestran en la tabla 1.

Al llevar a cabo la prueba 1 de alcaloides inicialmente, se acidificaron los tres extractos con HCl
para mantener un pH acido. Después se hicieron las pruebas con el reactivo de dragendorff y
sonneschain, las cuales dieron positivas para los extractos de romero y borrachero formándose un
precipitado naranja y negativo para el eucalipto, al comparase con el testigo. (FIGURA 2).

Los alcaloides se unen a ácidos para forma sales de amonio sustituidas. La estabilidad de estas
sales respecto de la hidrolisis varia con la fuerza básica del alcaloide y la naturaleza del ácido
empleado. Estas sustancias precipitan por el agregado de uno o más de los siguientes reactivos
como es el yoduro de potasio y bismuto (reactivo de dragendorff), ácido fosfomlibdico (reactivo de
sonnenschein), yoduro de mercurio y potasio (reactivo de mayer), yoduro de potasio y cadmio
(reactivo de marme), una solución de yodo con yoduro de potasio (reactivo de wagner) o ácido
fosfotungstuco (reactivo de scheibler). 1

El único alcaloide que se encuentra presente en el romero es la rosmaricina y en el borrachero se

encuentra la escopolamina, la atropina, entre otro según la literatura.( Inma D. Alonso. 2017 y
Lucia A. de Garcia. Perea M. Reguero T. 1993)

Nombre de cada una de las estructras

A continuación, se presentan las reacciones dadas con el reactivo de dragendorff y sonnenschein

para los alcaloides identificados ………

En seguida se hizo la identificación de flavonoides, mediante la reacción de shinoda y la reacción

con NaOH. La prueba para la reacción de shinoda dio positiva para los tres extractos ver tabla 1,
formándose un cambio de coloración de naranja a roja para romero, lo cual indica la presencia de
flavonas, en el eucalipto hubo una coloración roja presentando flavonoles y el borrachero que
obtuvo una coloración roja conteniendo asi flavonoles o flavonas. (figura 3)

1
Remington: Farmacia, Volume 1
By Alfonso R. (DRT) Gennaro – pag 490- ed medica panamericana
Para la prueba con hidróxido de sodio fue positiva para los extractos de romero y eucalipto
presentando la formación de color amarillo a rojo y de café a narajana respectivamente. Ver tabla
1 figura 4. Para el romero la coloración roja indica la presencia de xantonas y flavonas. El romero
según la literatura contiene flavonas como son la diosmetina, diosmina, genkwanina, luteolina y
apigenina.2

nombraraslas

para el eucalipto dio positivo para flavonoles. según la literatura este contiene flavonoles como la
eucaliptina, hiperosido, quercetina, quercitrina y rutina.3

2
Plantas medicinales aprobadas en Colombia, Fonnegra Gómez Fonnegra G. Ed.Universidad de
Antioquia 2007. Pag. 221
3
Pag. 111-112.
 En la literatura no se encontró que el borrachero tenga una composición química de flavonoides.
Lo que coincide con lo obtenido en la practica, un resultado negativo

La reacción de shinoda o reacción de la cianidina permite el reconocimiento de flavonoides. Esta

reacción se fundamenta en que, al poner en contacto el ácido clorhídrico con magnesio metálico
se genera hidrogeno, este último reduce al favonoide desarrollando coloraciones que van del rojo
anaranjado al violeta. En el caso d los favonoles, el color es rojo cereza.Todos los flavonoides
excepto chalconas, auroras, e isoflavonas, dan positivas a esta reacción.4

A continuación se indica algunas de las reacciones de la prueba de shinoda con los flavonoides
identificados en los extractos de romero y eucalipto…..

La siguiente prueba que se realizo fue glucosidos cianogenicos, las cuales dieron negativas para
todos los extractos ya que al parecer en ninguno existe este metabolito secundario, según
revisiones en la literatura indican también que no existe la presencia de glucosidos cianogenicos
en romero, eucalipto y borrachero. Ver tabla 1. Figura 5.

Para extractos que contienen el metabolito, los heterósidos se hidrolizan fácilmente, a pH cercanos
a la neutralidad, por β-glucosidasas mas o menos específicas que liberan una osa y una cianhidrina.
Esta última, inestable, produce HCN y un compuesto carbonilo, aldehído o cetónico; esta segunda
reacción se cataliza por una hidroxinitrilliasa. En medio débilmente ácido y en caliente, los
heterósidos de hidrolizan de la misma forma que por las glucosidasas y, a pH cercano a la
neutralidad, la descomposición de la cianhidrina es espontánea y muy rápida. El comportamiento
en medio básico es débil varía según la estructura: formación de HCN (como medio acido) o
transformación del grupo nitrilo en acido carboxílico sin que el enlace glicosídico se hidrolice.

Los heterósidos cianogenéticos se detectan fácilmente mediante papel impregnado en reactivos

susceptibles de producir una reacción coloreada con el ácido cianhídrico que se libera cuando la

4
Carla Delporte V. Farmacognosia. universidad de chile 2010.
materia vegetal se tritura (ácido pícrico/carbonato sódico, bencidina/acetato cúprico). La reacción
de Grignard detecta la presencia de ácido cianhídrico (HCN) al actuar este sobre una tira de papel
absorbente impregnada con ácido pícrico y carbonato de sodio (picrato de sodio).5

La reacción correspondiente que se debería haber observado si la prueba hubiese sido positiva
seria la siguiente:

Se continuo con la identificación de azucares reductores, dando positivas las pruebas con el
reactivo de fehling A – B y reactivo de Benedict en todos los extractos ya que se formo un
precipitado rojo , ver tabla 1, figura 6.

La reacción general para la prueba con reactivo de fehling es la siguiente

El poder reductor que pueden presentar los azúcares proviene de su grupo carbonilo, que puede
ser oxidado a grupo carboxilo con agentes oxidantes suaves. Si el grupo carbonilo se encuentra
combinado no puede presentar este poder reductor.

Los azúcares reductores, en medio alcalino, son capaces de reducir el ión Cu2+ de color azul a Cu+
de color rojo. Para ello el grupo carbonilo del azúcar se oxida a grupo carboxilo. En medio
fuertemente básico como en nuestro caso el NaOH el ión Cu2+ formaría Cu (OH)2 insoluble por
eso añadimos tartrato sódico potásico que actúa como estabilizador al formar un complejo con el
Cu2+.6

5
Jean Bruneton, Farmacognosia, Fitoquímica plantas medicinales, 2ed, Editorial ACRIBIA S.A.
ZARAGOZA, España 2001, págs... 305-341, 365-400

6
Introducción a la ciencia de los alimentos, Volume 1
By Owen R. Fennem pag 140 ed. Reverte S:A.
La prueba de Benedict es otra de las reacciones de
oxidación, que nos ayuda al reconocimiento de
azúcares reductores, es decir, aquellos compuestos
que presentan su OH anomérico libre, como por
ejemplo la glucosa, lactosa o maltosa o celobiosa, en
la reacción de Benedict, se puede reducir el Cu2+
que presenta un color azul, en un medio alcalino,
el ión cúprico (otorgado por el sulfato cúprico) es
capaz de reducirse por efecto del grupo aldehído del
azúcar (CHO) a su forma de Cu+. Este nuevo ion se
observa como un precipitado rojo ladrillo
correspondiente al óxido cuproso (Cu2O), que
precipita de la solución alcalina con un color rojo-
naranja, a este precipitado se lo considera como la evidencia de que existe un azúcar
reductor.7
La reacción descrita es la siguiente, dada mediante un ejemplo: HACER REACCION.
Las saponinas se identificaron mediante las pruebas: de espuma y estabilidad de espuma, la cual
dio negativa para todos los extractos. Reactivo de lieberman Bouchard, positivo para los tres
extractos ya que se observa el cambio de coloración azul verdosa que indica que los extractos
contienen saponinas esteroideales, ver figura 7 y reactivo de rosenthaler, positivo para el extracto
de romero ya que se produjo un cambio de coloración a violeta que indica la presencia de
saponinas triterpenoides, y negativo para eucalipto y borrachero, tabla 1, figura 8.

La principal reacción de reconocimiento usada para estos metabolitos es la de Lieberman-

Burchard. Esta reacción se practica desde hace más de 80 años y a pesar de ello aún no se conoce
bien el mecanismo de reacción. La coloración esperada para una prueba positiva es múltiple pero
se mantiene por bastante tiempo y va desde el púrpura hasta el azul oscuro. Los carotenos y
xantofilas dan positiva la prueba.

7
Manual de experimentos de laboratorio para bioquímica
Silvia quesada mora, pag 94 EUNED. Editorial Univerisdad estatal a distancia
Otra de las pruebas fu la identificaion de taninos en los tres extractos, se identificaron mediante
tres pruebas: reactivo de gelatina, reactivo de tricloruro de hierro y con K4[Fe(CN)6].

Con gelatina los tres extractos formaron el precipitado blanco obteniendo una prueba positiva,
indicando la presencia de taninos, ver tabla 1, figura 9.

Produciendose la siguiente reaccion.

- - - - - - -
R CO NH R CO NH R``
OH puente de hidrogeno
OH
-
O -
O
- - - - - - -
HO CO 2 + R CO NH R CO NH R``
HO CO 2
OH
HO OH
HO

-
CO 2 -
CO 2

La prueba con tricloruro férrico también fue positiva para romero, eucalipto y borrachero. con el
extracto de romero se miró la formación de color negro lo cual indica la presencia de taninos
derivados del ácido gálico y para los extractos de eucalipto y borrachero una coloración verde,
ósea la presencia de taninos derivados del catecol, ver tabla 1, figura 10. La reacción generalizada
para la identificación de taninos con tricloruro férrico se muestra a continuación.
 HO OH HO OH
- 2-
+ FeCl3
Fe (OR)
+ 3HCl
OH OH

Con K4[Fe(CN)6] las pruebas fueron negativas con todos los extractos, por lo tanto, no hay
presencia de compuestos fenólicos como se espera según la literatura.

la identificación de quinonas se llevó a cabo mediante las pruebas con el reactivo de hidróxido de
amonio, ácido sulfúrico y reactivo de borntraguer. Todas ellas fueron positivas para los tres
extractos notándose en cada muestra un cambio de coloración a rojo indicando la existencia de
antraquinonas. ver tabla 1, figura 11.

Las naftoquinonas y antraquinonas libres al ser tratadas con la solución de hidróxido de amonio
forma complejos de color rojo cereza. Esta reacción es utilizada para la detección directa de
quinonas en los extractos vegetales.

La reacción de Bornträger se utiliza frecuentemente para investigar la presencia de principios

antraquinónicos en vegetales. Esta reacción consiste en agregar un reactivo alcalino como
amoníaco, solución de hidróxido de sodio o de potasio directamente a la droga en polvo o a un
extracto y se basa en la coloración roja que dan los derivados antraquinónicos en medio alcalino;
la aparición de una coloración anaranjada o roja indicará la presencia de agliconas libres oxidadas
y la intensidad del color será proporcional a la concentración de principios activos.8

También se identificaron cumarinas en donde se empleó el reactivo de erlich para la primera

prueba; fue positiva para los extractos de romero y borrachero dando una coloración naranja y
negativa para el romero. acontinuacion las reacciones que proceden para la identificación de
cumarinas con el reactivo de erlich (figura 12) ver tabla 1

Se identificaron también mediante la reacción con hidróxido de amonio la prueba fue positiva
tanto para eucalipto como borracherro formando la coloración verde y azuleja respectivamente y
negativa para romero (figura 13) estareaccion también llamada REACCION DE FLUORESCENCIA

8
Carla Delporte V. Farmacognosia. universidad de chile 2010.
(fluorescencia en medio básico (KOH)) esta prueba se basa en la apertura y solubilización en medio
básico, las cumarinas se caracterizan por su intensa absorción en la región ultravioleta del
espectro, las cuales al ser examinadas a la luz ultravioleta presentan coloración exaltada en
presencia de amoniaco.9

 Típica de cardenolidos de tipo B de digital

 la fluorescencia azul. Se deben a una deshidratación se pierden OH en 14 y 16 formandose dos
dobles enlaces en el anillo pentagonal del núcleo esteroideo.
 Tricloacético (fluorescencia azul)

Posteriormente se realizo la prueba para glicósidos cardiotónicos las cuales fueron negativas con
el reactivo de legal y baljet ver tabla 1 figura 14.

Los glicósidos cardiotónicos son sustancias amargas, derivadas de los esteroides, que actúan sobre
el corazón fortaleciendo el trabajo cardiaco. La fracción de hidratos de carbono que constituyen
los glicósidos, contienen de tres a cinco monosacáridos, por lo general desoxiazucares o azucares
especiales. Para que el compuesto resulte activo, deben estar presentes al menos un OH en el C3
en beta (qie constituye el glicósido) y otro en el C14 en B beta; metilos emn B, en C10 y C13; una
lactona unida al C17 correspondientemente a una r- lactona alfa-insaturada (cardenolido), o a una
g-lactona alfa,b-insaturada (bufadienolido) y los anillos A/B y C/D deben estar en cis, como se
indica acontinuacion10:

9
Orantes E. “Tamizaje fitoquímico de la especie vegetal guatemalteca Quararibea yunckeri Standley Subsp.
izabalensis W.S. Alverson ex Véliz (Bombacaceae)”.universidad de san carlos de Guatemala 2008.
10
Catedra de farmacognosia. Universidad nacional de la Patagonia san juan bosco. Pag. 82.
Los ensayos con reacciones de color:

 Debido a los azucares (desoxiazucares)

 Debido al nucleo esteroideo
 Reacciones del anillo de lactona
 Reacciones de fluorescencia (propias de los cardenolidos de digital)

Y por último se llevó acabo la identificación de sesquiterpenlactonas con el reactivo de

hidroximato férrico la cual fue positiva en todos los extractos, ya que se obtuvo la coloración
roja, ver tabla 1 figura 15 característica de la reacción que a continuación se ve:

CH3

O + H2N OH + Na OH
H3C O

CH2
H3C
H3C
3+
CH2 Fe
H3C + HCl

OH + O
O N
-
O
3

Las lactonas sesquiterpenicas constituyen una clase de productos naturales biogenéticamente

derivados del ácido mevalónico formado por condensación cabeza - cola de tres unidades de piro
fosfatos de isoprenilo y ciclizaciones posteriores producen anillos insaturados cis o trans. Su
actividad antineoplásica y propiedades citotóxicas y anti tumorales han sido su particular
importancia. Ha sido demostrado que toda gamma-lactonas sesquiterpenicas con insaturación α-β
en carbono 11 y 13 posee dichas propiedades11

Según los estudios de Domínguez (1975), la cromatografía proviene del griego Chroma-graphos,
Color-escritura, es un procedimiento físico-químico que permite separar los componentes de una
mezcla en movimiento, por adsorción o depósito y retención de los mismos sobre una superficie
estacionaria que puede ser un sólido o un líquido. Algunos componentes pueden ser adheridos
con mayor facilidad que otros y en distintas velocidades sobre la fase estacionaria, lo que permite
que estos se vayan separando. Se realizo cromatogrfia en capa fina También denominada TLC por
sus iniciales en inglés (Thin layer chromatography), consiste en la separación de sustancias de una
mezcla por migración diferencial sobre una capa delgada; es un método rápido para separar de
forma bien definida, compuestos estructuralmente muy parecidos12. La fase estacionaria de este
tipo de cromatografía consistió en una placa homogénea de algún aglutinante, que permita la
separación de los componentes; fue utilizada la sílica gel compuesto polar que retiene los
componentes polares y La fase móvil es líquida y consiste en un eluyente ,por lo general menos
polar que la fase estacionaria. que asciende por la placa arrastrando los analitos menos polares
estarán más atraídos porla fase móvil que por la estacionaria, debido a la afinidad de las
polaridades.(Martinez,A., 2008) figura 16

En la cromatografía se uso como fase móvil etanol y metanol, que genero que la separación de los
compuestos no sea muy eficiente ya qe en la literatura se reportan diferentes sistemas de fase
mivil dependiendo del metabolito que se quiera identificar; teniendo en cuenta esto se calculo los
rf de los metabolitos que se lograron identificar en cada extracto entendiéndose rf como La
relación entre la distancia que recorrió el analito y la querecorrió el disolvente desde el punto de
inicio u origen.

En el extracto de borrachero en el cromatograma 1 se logró separar un metabolito con un rf de 0,7

y 0,9 y en el cromatograma 2 0,5 y 0,7 (ver calculos), este según lo reportado en la literatura se
refiere a los alcaloides presentes en esta planta cabe aclarar que en la literatura se hallaba
reportado el rf con un sistema de elución de metanol:cloroformo rf:0,713 . en la práctica se utilizó
una fase móvil diferente al reportado por lo cual aparecen posiblemente los rf de 0,5 y 0,9 pero
también es importante resaltar que se encontró el rf de 0,7 el cual indica que se separaron los
alcaloides en ambos cromatogramas para el extracto de borrachero.

Para el extracto de romero, igualmente fueron realizadas sobre una fase estacionaria de sílica gel,
lo que permite la buena separación de aldehídos, cetonas, alcaloides, azúcares, fenoles,

11
Romero V. Morales R. estudio fitoquimico preliminar del fruto de la especie vegetal Cyphomandra betacea
(tomate de palo) e identificación de alcaloides esteroideales. Universidad del salvador 2009.
12
DOMÍNGUEZ, X.A.1975.Cromatografía en papel y en capa delgada.Programa regional de desarrollo
científico y tecnológico del departamento de asuntos científicos de la organización de los estados
americanos. Pp: 35- 58.
13
Reconocimiento y separación de alcaloides presentes en la hojas deborrachero (
Brugmansia arborea) usando cromatografía de capa fina (TLC)-MARIANA ESCARRAGA, Luz GUZMAN-
Universidad del Tolima
esteroides, terpenoides, ácidos grasos y aminoácidos14, donde se obtuvo un rf de 0,4 (ver
cálculos) en ambos cromatogramas realizados. Las presencias de flavonoides se pueden observar
de colores morados y amarillos con un Rf de 0,3. Diversos estudios realizados, han demostrado la
presencia de flavonoides15. Las manchas de los quinoles, en la cromatografía, se muestran desde
un amarillo ocre hasta colores azulosos oscuros, con un Rf cercano a 0.4 (Santana, 2010. Pedrozo,
2001). Igualmente se mira una diferencia en los cromatogramas realizados con los reportados ya
que se obtuvo una solo separación con rf 0,4, que se aproxima a las manchas de los quinoles
reportados en la literatura, mas no se observa una segunda mancha la cual indique la separación
de flavonoides ya que el sistema que se usó en este caso fue metanol y el reportado fue
igualmente en metanol/cloroformo.

En el caso del eucalipto para el cromatogramas 1 se evidencio dos manchas, con rf de 0,6 y 0,7 y
en el comatograma 2 una sola mancha con un rf de 0,6. Según lo reportado en la literatura donde
también se utiliza un sistema de metanol /cloroformo se reportan un rf de 0,716 PARA
FLAVONOIDES MAS ESPECIFICAMENTE FLAVONOles PRESENTES EN EL EUCALIPTO igualmente los
rf en ambos cromatogramas son muy parecidos a los reportados, lo cual significa que hubo una
sepracion de flavonoides en el extracto de eucalipto.

CONCLUSIONES

la marcha fitoquimica sirvió para identificar metabolitos secundarios en los extracto de hojas de
eucalipto, romero y borrachero pero no para identificar cuáles son los metabolitos específicos en
cada extracto.

La identificación de metabolitos secundarios como alcaloides o flavonoides para los extractos de

romero, borrachero y eucalipto, colaboro a reafirmar si existían o no estos en las plantas
vegetales, y si los había facilito a especificar algunos mediante la ayuda de los reportes literarios.
Así se encontró que el alcaloide presente en el romero es la rosmaricina y en el borrachero la
escopolamina y la atropina, las pruebas de alcaloides en eucalipto fueron negativas y se confirmó
en la literatura que no los había. Igualmente en la marcha fitoquímica se encontró que los
flavonoides presentes en el romero eran flavonas y en la literatura lo confirmó, siendo estos la
diosmetina, genkwanina , luteolina y apigenina. En el eucalipto se confirmó la existencia de
flavonoles siendo la eucaliptina, hiperosido, quecetina, quercitrina y rutina. El borrachero arrojo

14
DOMÍNGUEZ, X.A.1975.Cromatografía en papel y en capa delgada.Programa regional de desarrollo
científico y tecnológico del departamento de asuntos científicos de la organización de los estados
americanos. Pp: 35- 58.
15
. PEDROZO J.A. TORRENEGRA R.D. TELLEZ A. N. GRANADOS. A. 2006. Nueva fuente de quinoles, la
superficie foliar de Pentacalia ledifolia y Pentacalia corymbosa y sus propiedades antifúngicas. Revista
brasilera de farmacognosia. Vol. 16. PP: 591-595.
16
CONTRIBUCION AL CONOCIMIENTO DE LA COMPOSICION POLIFENOLICA DE MADERA, CORTEZA Y HOJAS
DE EUCALYPTUS CAMALDULENSIS, E. GLOBULUS Y E. RUDIS-ELVIRA Ma CONDE ARIAS-CAMISON Madrid
1994-tesis doctoral
resultados negativos en la marcha fitoquimica para flavonoides y se confirmo que sicon la
literatura.

Debido al uso de un sistema de cromatografía constituido por una fase móvil de metanol y no de
la reportada en la literatura de metanol cloroformo se logro separar un metabolito de cada
extracto