PRACTICA N°5. AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE Bacillus cereus.

Ballesteros Silva Lisbeth; Casanova Rueda Jairo; Duque Caicedo Maryanod;

De Alba Villalobos Juliana; Hernández Pérez Sadam;
Departamento de Microbiología. Facultad de Ciencias Básicas
Universidad de Pamplona. Km 1 Vía Bucaramanga. Pamplona Norte de
Santander
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RESUMEN: En la presente practica se aplicaron las técnicas para el aislamiento e
idenficacion de Bacillus cereus en una muestra de arroz con fideos cocido. La
detección de dicho organismo es importante ya que es causante de intoxicaciones
alimentarias a través de la ingesta de alimentos contaminados que por lo general
fueron sometido a un proceso de elaboración y se dejaron sin la correcta
refrigeración por varias horas. A partir de una muestra de 10 g del alimento, fueron
llevadas a cabo diluciones seriadas 10-2 y 10-3 a partir de agua peptona al 0.1%
realizando la adición de la muestra en esta misma; de manera simultánea se
realizaron siembras por duplicado agregando 0.1 ml en el agar Mossel y selectivo
de Bacillus cereus, seguidamente se disemina el inoculo con ayuda del asa de vidrio
y se deja reposar 15 minutos o hasta secar. Finalmente fue incubado a 30°C +/- 1°C
por 24 o 48 horas, con el resultado de este procedimiento pudo corroborarse la falta
de medidas preventivas ante la contaminación que puede generar un mal
procedimiento proliferando las bacterias, hongos y levaduras en las siembras
inhibiendo el aislamiento e identificación del microrganismo.
PALABRAS CLAVE: Microorganismos patógenos, arroz cocido, intoxicaciones
alimentarias, Bacillus cereus.
INTRODUCCIÓN bacterias, virus, hongos y parásitos
manufacturas deficientes, lo cual
El incremento en la producción, puede propiciar condiciones
comercialización y consumo de adecuadas para su proliferación y
alimentos exige cada día un control desencadenar la presentación de
más eficiente y estricto de su calidad enfermedades transmitidas por
higiénica sanitaria, con el fin de alimentos (eta) al hombre [2]. La eta se
prevenir las enfermedades adquiere por el consumo de alimentos
transmitidas por alimentos (ETAs). contaminados con agentes químicos o
Bacillus cereus es un microbio microbiológicos y/o sus toxinas en
responsable de brotes de origen cantidades determinadas que afectan
alimentario. Bacillus cereus es un la salud humana.
microorganismo resistente a los
procesos de cocción o pasteurización Bacillus cereus es un bacilo Gram
de los alimentos [1]. Se encuentra en positivo, anaerobio facultativo y móvil
el ambiente de forma habitual y tiene debido a la presencia de flagelos
el potencial de contaminar fácilmente perítricos ; forma esporas resistentes
los alimentos por prácticas de a condiciones adversas del medio,
como altas temperaturas,
deshidratación y radiación, y produce
diversas toxinas que contaminan gran
variedad de alimentos . Es capaz de
crecer en un amplio rango de
temperaturas, desde los 4 °C a 48 °C,
a pHs de 4,9 a 9,3 y soporta
concentraciones de NaCl en el medio
hasta del 7 %. Las esporas son
resistentes a bajas condiciones de
humedad y a tratamientos térmicos
como la pasteurización o procesos de
cocción de los alimentos y al ácido
clorhídrico presente en el estómago, lo
que constituye un peligro potencial
para la salud humana.[3]
MATERIALES
- Mechero de Bunsen.
- Cajas de Petri estériles.
- Pipetas estériles.
- Agar Mossel
- Agar selectivo de Bacillus
cereus.
- Agar nutritivo.
MUESTRA
Arroz con fideos cocido
METODOLOGÍA
Esta técnica se utiliza cuando se
sospecha que el alimento contiene
más de 10 UFC de Bacillus cereus por
gramo de muestra.
Se preparo una serie de diluciones
decimales del arroz con fideos cocido,
a partir de la serie de diluciones
decimales y por duplicado se depositó
0.1ml de cada una sobre la superficie
bien seca de Agar Mossel y Agar
selectivo para Bacillus cereus,
seguidamente se disemina el inoculo
con ayuda del asa de vidrio y se deja
reposar 15 minutos o hasta secar.
Después, se incubo a 30°C +/- 1°C por
24 o 48 horas
Transcurrido el tiempo de incubación
se sembró por estría colonias típicas
sobre en el agar nutritivo para hacer la
confirmación bioquímica, se incubó a
30°C +/- 1°C por 24 horas.
RESULTADOS
-Agar Selectivo de Bacillus Cereus
(ASBC)
Ilustración 1. Agar selectivo Bacillus
cereus - dilución 10-3, placa 1.
Ilustración 2. Agar selectivo Bacillus
cereus - dilución 10-3, placa 2.

-Agar Mossel.
Ilustración 5. Agar mossel- dilución
10-2, placa 1.

Ilustración 3. Agar selectivo Bacillus

cereus- dilución 10-2, placa 1.

Ilustración 6. Agar Mossel- dilución

10-3, placa 2.

Ilustración 4. Agar selectivo Bacillus

cereus-dilución 10-2, placa 2.
Ilustración 7. Agar Mossel- dilución
10-2.

-Agar nutritivo
Ilustración 8. Agar Nutritivo
Como se puede observar en las
ilustraciones anteriormente citadas, no
es evidente ningún cambio en las
características macroscópicas de la
muestra, negativo (-) para crecimiento
de Bacillus cereus.
En el Agar Mossel, al realizar la
lectura de las diferentes placas con
sus respectivas disoluciones fue
observado una “supuesta” colonia de
Bacillus cereus en la dilución 10-2 en
la parte inferior de esta, pero se
verificó este con la parte teórica
demostrando que las colonias típicas
son de color rosado cremosas
rodeadas de un halo de precipitación
blanco denso y una gama de tono rojo
violeta al fondo.
Agar Selectivo Bacillus cereus, no se
presentó ningún cambio que evidencie
el crecimiento de este
microorganismo.
ANÀLISIS.
La determinación Bacillus cereus en el
arroz con fideos fue seleccionado ya
que es un alimento que se sometió a
un proceso de cocción y los alimentos
amiláceos están particularmente
asociados a brotes de este
microorganismo.
En el presente estudio no se evidenció
crecimiento de Bacillus cereus en
ninguno de los dos agares debido a
que no se tomaron adecuadamente
las medidas de prevención ante focos
de contaminación como lo son
bacterias, hongos y levaduras que se
encuentran presentes en material de
vidrio o plástico, o bien de líneas
celulares o medio contaminados.
Se observa en los agares Mossel y
selectivo Bacillus cereus crecimiento
de hongos y levaduras debido a la
presencia de contaminación, además
la temperatura a la que se incubaron
los agares es óptima para la
proliferación de estos
microorganismos.
En el agar nutritivo se puede
evidenciar un crecimiento de Bacillus
cereus con presencia de [2]Boletín epidemiológico para
contaminación. protocolo de vigilancia y control de
enfermedades transmitidas por
CONCLUSIONES.
alimentos. Grupo de vigilancia y
El aislamiento e identificación de control de factores de riesgo
Bacillus cereus de una muestra de ambiental, editor. Colombia: Instituto
arroz cocido de un restaurante fijo, Nacional de Salud; 2010. p. 10.
presente la presencia de dicho
[3]http://www.scielo.org.co/pdf/rfnsp/v
organismo a pesar de la
34n2/v34n2a12.pdf
contaminación que se generó en el
procedimiento.
La buena ejecución y las medidas
preventivas ante la higiene que se
debe tener en el aislamiento e
identificación de un microorganismo
es importante para la buena
observación y un excelente análisis a
la hora de obtener los resultados.
Es necesario implementar buenas
prácticas en la preparación de los
alimentos, como el mantenimiento de
la cadena de frío, la higiene en las
instalaciones y sus empleados, y la
utilización de procesos físicos,
químicos y biológicos para el control
del microorganismo. Procedimientos
que permitirán reducir el recuento del
microorganismo en el alimento,
asegurando su calidad y evitando la
presentación de intoxicaciones
alimentarias por B. cereus.
BIBLIOGRAFÍAS.
[1]Carlin F, Brillard J, Broussolle V,
Clavel T, Duport C, Jobin M, et al.
Adaptation of Bacillus cereus, an
ubiquitous worldwidedistributed
foodborne pathogen, to a changing
environment. Food Res Int.
2010;43(7):1885-94. 2 INS.