UNIVERSIDAD POLITÉCNICA DEL ESTADO DE MÉXICO

TECNICAS: SOUTHERN BLOT Y

NOTHERN BLOT
Ingeniería en biotecnología
Biología molecular
Dra. Nallely Rosalba Román Cortés

Argueta Rodríguez Isaí

Ávila castellano Alejandra patricia
Escaba Cabrera Andrea
Traconis Gómez Laura Susana
Urbano Jiménez Yosajandi Yoyoiko
SOUTHERN BLOT Esta técnica se utiliza para determinar la presencia de un gen o
fragmentos del ADN específicos en una muestra de sangre o
tejido.

Se basa en la aplicación de dos procesos fundamentales:

*La desnaturalización o separación de las cadenas

complementarias del ADN

*La hibridación o unión de dos cadenas complementarias.

Enzima de restricción se utiliza para cortar una muestra de ADN

en fragmentos que se separan mediante electroforesis en gel y
van a ser transferidos a una membrana de nitrocelulosa.

Sonda: detecta presencia de nucleótidos que son

complementarios a la secuencia de la sonda.
 SOUTHERN BLOT PROCEDIMIENTO
1.- Extracción: De cualquier tejido
humano.
2.- Digestión del ADN: Con enzimas de
restricción que corta el ADN bicatenario.
Una vez cortado el ADN es sembrado en
un gel de agarosa.
3.- Electroforesis: Separa las moléculas
por tamaño y carga.
4.- Transferencia: Pasaje del ADN desde
el gel a una membrana de nylon.
5.- Hibridación con sonda radiactiva:
Consiste en poner fragmentos de ADN
que se unan al ADN que se encuentra en
la membrana de nylon.
6.- Visualización: Identificación de los
fragmentos específicos de ADN mediante
autorradiografía.
NORTHERN BLOT
El RNA es una molécula compleja, al
momento de su extracción. La muestra
para la electroforesis se debe preparar
un buffet de carga, debe contener
moléculas de formamida y formaldehido
para evitar formación de estructuras
secundarias.
Al tener la muestra pipetear en un gel lo
más rápido para evitar que el RNA se
degrade. La pequeña interacción entre
bases de muestra con el RNA, moléculas
como bromuro de etidio puede teñir el
gel con menor brillo.
El RNA no se une bien a la nitrocelulosa,
es necesario usar una versión de celulosa
como Nylon.
NORTHERN BLOT PROCEDIMIENTO