Utilización de TLC para el análisis de extracto de canela e

identificación de compuestos muy polares

Karoll Juliette Rey Martínez, Mariana Buitrago Oliveros
Universidad de los Andes, Departamento de química.

ABSTRACT: Los aceites esenciales se encuentran presentes en muchas plantas de diferentes

especies, además contienen diversos compuestos con diferentes estructuras químicas. Estos
compuestos son capaces de inhibir y catalizar algunas reacciones favorables para los seres
humanos. El objetivo de este trabajo es comprender a través del empleo de algunos métodos de
extracción y de separación cuál es la mejor forma de estudiar compuestos provenientes de
muestras vegetales. Para esto, se aplicó la TLC para identificar compuestos presentes en extracto
de canela por medio de ultrasonido y arrastre por vapor. Se concluyó que, en efecto, hay presencia
en ambas muestras de compuestos polares. Posiblemente, cinamaldehído (según la literatura, es
el principal constituyente de la canela). También se estableció, como era de esperarse, que los
métodos tradicionales de extracción constituyen procesos demasiado largos y poco eficientes, en
comparación a las nuevas tecnologías como la extracción asistida por ultrasonido, que permite una
extracción óptima y segura de compuestos contenidos en muestras vegetales.

INTRODUCCIÓN comportamiento de los componentes volátiles

La canela (Cinnamomun verum o cinnamomun
zeylanicu) es una especia que proviene de Sri
Lanka. Se extrae de la corteza de un árbol de
10 o 15m. Su aceite esencial ha sido
ampliamente utilizado en la historia de la
humanidad para distintos fines tanto médicos,
como cosméticos y alimenticios. Su aroma se
debe al aceite esencial aromático que
constituye un 0,5-2,5% de su composición. El
componente mayoritario de la canela es el
aldehído cinámico el eugenol y el alcohol
cinámico.
A lo largo de la historia, la canela se ha
utilizado para inducir el sueño, provocar la
menstruación y cicatrizar algunas heridas. Sin
embargo, gracias al desarrollo tecnológico,
esos extractos han sido profundamente
estudiados para sacar el máximo provecho de
las características y utilidades que tienen
ciertas moléculas que los componen. Pero, la
información disponible sobre el
en la canela es limitada. Tradicionalmente
se emplean métodos como la destilación con
agua, la destilación con agua y vapor, la
maceración y el enfleurage. Sin embargo, estos
tienen un rendimiento extremadamente
bajo: resultan costosos y los procedimientos
son relativamente largos. Hoy en día existen
métodos que cumplen esa misma función de
extracción de manera más eficiente y efectiva
como lo es el método de ultrasonido, utilizado
comúnmente para aislar sustancias bioactivas
de material vegetal mediante la cavitación a la
que se someten las muestras, en donde se
alcanzan fuerzas suficientes para producir
sonolisis, rompiendo las paredes celulares y
extrayendo el material intracelular de manera
que se puedan controlar variables como la
temperatura y la presión para evitar que
mezclas volátiles o termolábiles sufran daños
en su estructura, generando así un mayor
rendimiento en un menor tiempo que los
métodos tradicionales.
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Para fines educativos y de comparación se
decidieron hacer 2 procesos distintos de
extracción y 1 mismo de separación, en donde
se escogió el método asistido por ultrasonido
como mecanismo moderno y el de arrastre por
vapor como tradicional, donde se identificaron
numerosas diferencias evidenciadas en los
resultados cuantitativos de extracto obtenido
al final de un mismo componente de la
muestra.
El cinamaldehído es el componente
mayoritario presente en el extracto de la
canela con un aproximado de 60-75% junto a
un rango de 4-10% de fenoles, cierta parte
de eugenol y una mínima parte de
hidrocarburos. Su estructura presenta un
anillo aromático unido a una cadena de 2
carbonos enlazados por un enlace doble y
finalmente el grupo funcional (aldehído) en un
extremo. Dada la estructura se establece que
este es un compuesto bastante polar dada la
presencia del grupo carbonilo, por ende, se
asume que tendrá una afinidad mayor con
compuestos apolares que le permitirán
separarse de manera óptima durante la TLC,
que resulta bastante efectiva en la separación
de compuestos con dichas características.
Figura 1. Molécula cinamaldehído
La TLC (por sus siglas en
inglés, thin layer cromatography) es un
método cromatográfico que permite separar
los compuestos presentes en una muestra de
acuerdo a características
químicas comunes en cada uno. El
fundamento de la técnica fue desarrollado por
Merck KGaA en Alemania, la empresa que
lleva su nombre incubó las ideas de su
fundador desde 1900. En 1938 se realizó la
primera cromatografía de capa delgada a
manos de N.A. Izmailov and M.S. Schreiber En
Rusia. Durante el proceso, la fase móvil
arrastra la muestra por acción de la
capilaridad a través de la fase estacionaria y
los que tengan mayor afinidad con esta última
tardarán un poco más en ser eluidos, mientras
que aquellos que sean más afines con la fase
móvil saldrán en un tiempo menor, a su misma
velocidad. Cabe aclarar que ambas fases jamás
interactúan químicamente entre sí. Cuando
todos los compuestos llegan al final de la placa
y se pueden observar distintas marcas en la
placa, se puede decir que ocurrió una
separación eficiente de los componentes. Este
sistema de separación consta de partes
sencillas que son las placas cromatográficas
que contienen la fase estacionaria (sílica, como
lo fue en este caso) y una cámara de TLC, en
donde se sitúa la fase móvil y posteriormente
se ubicará la placa que tiene la muestra.
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Materiales:
 Muestra vegetal de canela
 Molino
 Mortero y pistilo
 Frasco plástico grande
 1,5g de Ninhidrina
 100mL de Etanol Absoluto
 3mL de ácido acético glacial
 Yodo
 3 soportes universales
 2 planchas de calentamiento
 1 matraz generador de vapor
 1 matraz con tres entradas
 Condensador
 Termómetro
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 Frasco recolector Para la ninhidrina, se pesaron 1,5g de

 Hexano ninhidrina en un vaso de 250mL. Luego, se
 Hexanol disolvió en 100mL de etanol absoluto y se
 Metanol añadieron 3mL de ácido acético glacial. Como
 Etanol la ninhidrinda no se disuelve por completo, se
 Pentanol aplastaron cuidadosamente los restos con una
 Acetil acetona espátula y con ayuda de un agitador, se
 Éter etílico mezcló, se traspasó a un frasco de
 Cámara de cromatografía de capa vidrio ámbar previamente marcado y se llevó
delgada a la cabina de extracción. Por otro lado, se
 Secador dispuso el yodo en un recipiente plástico
debidamente tapado y se dejó en la cabina de
En primer lugar, se eliminaron las impurezas extracción.
de la canela seleccionando trozos con
apariencia uniforme, es decir, se retiraron los Para la extracción en arrastre por vapor, se
trozos de madera de coloración distinta a la armó el montaje el montaje de la (Figura 1).
coloración tradicional de la canela. Durante este procedimiento se colocó la
Posteriormente, se agregó la canela a un muestra de canela molida en el matraz de tres
mortero para realizar una pre-molienda con el entradas, llenando una tercera parte de su
fin de evitar complicaciones en el molino. contenido, mientras que el matraz generador
Seguidamente, se limpió el molino con de vapor fue llenado hasta la mitad. En el
etanol verificando que el molino estuviese condensador fueron conectadas dos
completamente libre de impurezas que mangueras largas con un flujo constante de
pudiesen dejar residuos u olores provenientes agua ayudando al enfriamiento del vapor, que
de otras muestras procesadas allí es el producto final. Ambos matraces se
anteriormente. Se realizó este procedimiento calentaron, el generador fue llevado
con el equipo desconectado para evitar gradualmente hasta una temperatura de
accidentes. Se procedió a moler la canela en 325°C aproximadamente, para acelerar un
pequeñas cantidades. Se sacó la canela del poco el proceso. Mientras que, el que contenía
molino y se cubrió para evitar la llegada de la muestra se mantuvo a una temperatura de
impurezas. Luego, se limpió 60°C. Posterior a la estabilización del sistema,
cuidadosamente el molino para se esperó a que comenzara el flujo de vapor a
evitar dejar muestra atascada en el molino. Se pasar por la muestra. Transcurrieron
pesó y se almacenó en un pequeño alrededor de 3 horas cuando se dio por
frasco marcado con el nombre de los finalizada la extracción. Se procedió a
responsables y de la muestra para su posterior almacenar el extracto en un frasco color ámbar
análisis. de 250 mL previamente marcado con el
nombre de las muestras y de los responsables.
A continuación, se prepararon las soluciones
reveladoras para posteriormente comprobar Posteriormente, se prepararon placas de sílice
cuál era la más adecuada para el experimento. para realizar las pruebas con los reveladores.
En la práctica se prepararon y utilizaron los Para esto, se cortaron las placas con las
siguientes reveladores: ninhidrina y yodo. siguientes medidas: 2,5cm ancho y 3,5 de
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largo. Se trazaron dos líneas delgadas a los
laterales. Luego, con ayuda de un capilar, se
realizó el siguiente procedimiento para cada
uno de los solventes disponibles: Se colocó una
gota de la muestra de canela en uno de los
lados y se sumergió el lado donde se puso la
gota. Se esperó a que el líquido ascendiera por
toda la placa. Seguidamente, se aplicó
ninhidrina. Se llevó la placa al secador hasta
que se estuviese opaca. Posteriormente, se
observó la placa bajo luz UV. Se realizó el
mismo procedimiento para el revelador de
yodo. Sin embargo, se dejaban las placas
dentro de los frascos que contenían yodo
sólido por 30s para observarlas en detalle
después bajo la luz UV.
Para la extracción asistida por ultrasonido se
empleó un beaker de 100mL. En él se
colocaron 5g exactos de la muestra de canela
molida. Posteriormente, se agregaron 10mL
de metanol y se ubicó el sistema en el aparato
ultrasonido. Se hicieron 3 intervalos de
extracción de 5 minutos cada uno, realizando
TLC cada que uno empleando la ninhidrina y el
yodo como reveladores.
Seguidamente, se realizó
la rotaevaporación de las muestras. Para esto,
se pesó la muestra, se traspasó a un balón y
este se conectó al rotaevaporador. Se moderó
la presión hasta alcanzar la ideal para el agua,
el solvente utilizado para el arrastre por
vapor. Posteriormente, se esperó a que se
completara y se pesó el balón nuevamente
para conocer cuánta agua se había eliminado
de la muestra. Se realizó este procedimiento
para la canela extraída por los dos métodos:
ultrasonido y arrastre por vapor.
Por último, se realizó la cromatografía de capa
delgada (TLC). Para esto, se tomaron las
muestras rotaevaporadas previamente para el
posterior análisis. En primer lugar, se
recortaron placas de sílice de las mismas
dimensiones que las placas anteriores. Se
utilizó acetato de etilo y ciclohexano como
solventes para poner en las cámaras. Se
prepararon soluciones con diferentes
proporciones: 8:2, 6:4, 4:6 y 2:8 de los
disolventes. Se agregaron 2mL de cada
solución en diferentes cámaras
respectivamente. Allí se sumergieron
diferentes placas de sílice con una pequeña
gota de cada muestra en un extremo, puesta
con un capilar cuidadosamente. Se realizó este
procedimiento para las muestras
provenientes de la rotaevaporación del
extracto de canela por ultrasonido y por
arrastre por vapor. A su vez, se realizó el
mismo procedimiento para el sistema de
solventes acetato de etilo-pentano.
Seguidamente, se sumergieron las placas en
yodo y se dejaron revelar por un minuto
aproximadamente, manteniendo el yodo
dentro de la cabina de extracción debido a su
alta toxicidad, para después observar las
placas bajo luz UV. Se procedió a almacenar las
placas.
En la segunda parte del procedimiento, se
seleccionaron los mejores resultados del
proceso anterior y se replicaron en placas
cuadradas de 3,5cm de ancho por 3,5cm de
largo. Sin embargo, después de que el solvente
llegase a un extremo, se giró 90° la placa para
que corriera verticalmente. Posteriormente,
se observó la trayectoria de los puntos de
muestra bajo luz UV. Se anotaron los
resultados y se almacenaron las placas.
ANÁLISIS Y DISCUSIÓN
La caracterización cualitativa exacta del
extracto de la canela no pudo ser realizada por
falta de tiempo. Sin embargo, con el extracto
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obtenido para cada método, se realizó un
análisis cromatográfico exhaustivo utilizando
pruebas de TLC a diferentes condiciones,
buscando optimizar el sistema de revelador y
solvente, en donde se encontró mayor
eficiencia utilizando el sistema de acetato de
etilo y pentanol en una proporción de 6:4 para
el extracto asistido por ultrasonido y el
sistema DCM y ciclohexano en una proporción
de 4:6 para el extracto obtenido en el arrastre
por vapor. Con lo anterior se concluyó que en
la muestra de ultrasonido se encuentra una
mayor cantidad de solventes fuertemente
polares, pues se requirió de una fase altamente
apolar para mostrar distintas señales o puntos
en la placa. Mientras, en el caso de arrastre por
vapor, a pesar de ser un sistema apolar el
escogido, tiene una parte que aumenta un
poco su polaridad y sólo en este lograron verse
(y de manera muy leve) los puntos propios de
esta cromatografía. Esto que quiere decir
que, los analitos contenidos en la muestra
presentan una polaridad menor a la de los de
la muestra que fue sonicada. Ambas
respondieron favorablemente en mayor
medida al usar yodo como revelador en lugar
de la ninhidrina. Escoger el sistema adecuado
requirió de un gran número de intentos
debido a la interferencia de los demás
compuestos polares presentes en el extracto
de canela. Esta diferencia en el sistema de
separación puede presentarse por la
diferencia entre solvente en que se encontraba
inicialmente el extracto, siendo agua para el de
arrastre por vapor y metanol para el de
ultrasonido, pues aunque ambos fueron
sometidos a un proceso de rotaevaporación,
las condiciones para este fueron distintas en
ambas muestras (la presión a la que se
evaporó el agua fue de 32 milibares), lo que
pudo causar una pérdida en uno de los dos
extractos de compuestos presentes en la
solución, por lo que se vieron afectados los
resultados de las placas cromatográficas.
CONCLUSIONES
Los procesos de extracción tradicionales,
aunque funcionan y cumple con su principal
tarea, lo hacen de una manera que no es muy
eficaz ni efectiva cuando se tienen métodos
modernos con tecnología de punta que
permiten obtener lo mismo en un tiempo
muchísimo menor y con mayor eficiencia,
como se evidenció durante la práctica al
observar que para el método de arrastre por
vapor, el cual tardó alrededor de 3 horas en
práctica, fueron muy reducidos y poco
concluyentes los resultados de la TLC incluso
después de todos los sistemas probados,
mientras que para el ultrasonido, para el cual
se hicieron 3 intervalos de únicamente 5
minutos, se obtuvo un resultado más
contundente que mostraba, efectivamente
distintos compuestos separados entre sí en la
placa.
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