UNIVERSIDAD AUTÓNOMA METROPOLITANA

UNIDAD XOCHIMILCO

Extracción de clorofila de espinaca (Spinacia oleracea)

Alumnos:

Cárdenas Buendía Claudio Alexis

Córdova Peña Brenda

Hernández Rodríguez  Jorge

Pantoja Nájera Ana Patricia

 Porfirinas

Absorben a una Las clorofilas tienen en el anillo

longitud de onda tetrapirrólico un ion Mg2+ unido
al centro de los nitrógenos, un
próxima a los 400 y anillo de ciclopentanona, un
500 nm, o sea que no éster de fitol que provee a la
absorben el verde molécula de una cola lipófila y
un sistema de dobles enlaces
conjugados

Pigmentos solubles
en solventes
orgánicos
 ¿Dónde se encuentra?
Las clorofilas se encuentran en las membranas de los tilacoides, que en las cianobacterias son
invaginaciones de la membrana plasmática, y en los plastos de las células eucarióticas.
 v e?
si r Gracias a sus propiedades pueden absorber la radiación solar para producir la
q ué fotolisis del agua, lo que libera los electrones necesarios para la formación del
ra
¿Pa
ATP y del NADPH durante el proceso de fotosíntesis

Los dos electrones energizados se liberan

hacia moléculas aceptoras (plastoquinona)
que residen en la membrana del tilacoide,
comenzando reacciones de reducción-
oxidación
La clorofila, in vivo, consta de una pequeña proporción (0,1% del total) de clorofila
fotoactiva que absorbe la energía luminosa y se excita, el resto recoge y dirige la energía
hacia la clorofila fotoactiva. Esta última, produce una capacidad reductora y una capacidad
oxidante que son usadas para poner en marcha gran cantidad de reacciones redox
El intercambio de energía entre electrones libera fotones de energía que descomponen moléculas de
H2O en iones de hidrógeno H+, iones de oxígeno y electrones libres

Dentro de los tilacoides, los protones de H+ se concentran y se difunden de las partes con más alta
concentración a las de más baja concentración. Al mismo tiempo protones de H+ se disipan hacia el
estroma, generando energía que permite que la enzima ATP-sintasa sintetice ADP (adenosin
difosfato) y fosfato para formar ATP
 Spinacia oleracea
Es una planta herbácea anual o perennes dioicas y con genotipos monoicos y autoalógamos, de hasta
1m de altura, lampiñas, con raíz fusiforme y blanquecina, tallos simples o poco ramificados, hojas
algo carnosas, las caulinares alternas y más pequeñas y las basales arrosetadas, oblongas, sagitadas o
triangular-hastadas, lampiñas y pecioladas, de 15-30 cm de longitud.
Tiene flores verdosas, ovarios uniloculares y uniovulado con 4 estilos apicales. Utrículo inerme o con
2-4 espinas
 Sus usos …
 Sensibilizador en fotografía por sus propiedades fotoquímicas
 Colorante de dulces, chicles, pastas, gelatinas, etc.
Colorante de perfumes, lociones, jabones, dentífricos, etc.
 Conservación de alimentos dentro de bolsas, pues absorbe el oxígeno e inhibe el crecimiento
bacteriano.
 Compuesto de abonos, pues es un buen transportador de micronutrientes metálicos.
 Protector solar en cremas, lociones y pomadas por su capacidad de absorber la radiación solar.
 Agente desodorante pues reduce o elimina el olor del bencil mercaptano (olor a humo/tostado), del
ácido tioglicólico (olor a azufre) y de la trimetilamina (olor a pescado),.
 Debido a su semejanza con el pigmento de la sangre (hemoporfirina), las primeras aplicaciones
terapéuticas se dirigieron al tratamiento de la anemia.
 Las sales de clorofila provocan una débil actividad hemolítica y que aceleran la coagulación de la
sangre, así como el proceso de cicatrización.
 Propiedades antiinflamatorias
 Todas las plantas con clorofila poseen pigmentos carotenoides y vitamina C, una vez ingeridas
se convierten en vitamina A necesaria para el crecimiento normal de las células corporales y en
particular de los epitelios
 Indica la cantidad de nitrógeno presente y con eso podemos conocer la “salud” de la planta

Por los usos terapéuticos e industriales tan variados que tiene es importante conocer un método de
extracción eficaz y seguro para poder obtener la clorofila per se o conocer su concentración
 Metodología
• Se adquirió una muestra de espinaca en el mercado de

Preparació San Andrés Totoltepec, delegación Tlalpan

• Se lavaron y secaron las hojas de espinaca, eliminando la
nervadura más gruesa, se trituraron 10 g de la muestra
n de la con 1 g de carbonato de calcio y se adicionaron pequeños
volúmenes de acetona al 80%. Se filtro al vacío
muestra

• En un embudo de separación, al filtrado se le

adicionaron 25 mL de n-hexano y 60 mL de
Extracción de cloruro de sodio al 10%. Se elimino fase acuosa
• A la fase orgánica se le adicionó sulfato de sodio
la clorofila anhidro y se filtró
• Se evaporó el n-hexano a baño maría.
 • Se utilizaron placas de sílice-gel
• El proceso se desarrolló en cuatro
Cromatografía diferentes fases móviles: cloroformo-
acetona (7:3), etanol-acetona (7:3), n-
hexano-acetona (7:3)

• Se utilizó un espectrofotómetro UV-

1800 Shimadzo
Espectro • El rango en que se hizo la medición
UV/Vis fue 200-800 nm de longitud de onda
 Resultados y discusión
Rendimiento

Ensayo 1 Ensayo 2
2.4 mL 5.0 mL
Promedio 3.7 mL

 Se obtuvieron valores diferentes de rendimiento, esto por factores intrínsecos de la planta

Cromatografía

Compuesto Distancia recorrida Factor de

por el compuesto retención
Etanol/Acetona (7:3)
No hubo separación No hubo separación.
Cloroformo/Acetona (7:3)
Clorofilas 30 mm 0,75
Xantofilas 39 mm 0,975
Hexano/Acetona (7:3)
Clorofila b 10 mm 0,25
Clorofila a 14 mm 0,35
Xantofilas 39 mm 0,975
Placa etanol/acetona Placa cloroformo/acetona Placa hexano/acetona
Espectro UV/Vis

Los máximos de absorción en el ensayo Los máximos de absorción en el ensayo 2

1 fueron a 410, 435, 469, 663 y 741 nm. fueron a 412, 429, 449, 535, 611 y 665 nm.
 Conclusiones
 Spinacia oleracea presenta un rendimiento significativo en la extracción de
clorofila

 Se recomienda para trabajos posteriores mantener mayor control en la planta que

será utilizada

 Para realizar la cromatografía, los mejores resultados se obtuvieron con

hexano/acetona

 El n-hexano no es recomendado para realizar la lecturas en espectro UV/Vis, se

deberá experimentar con diferentes disolventes