MYRIAM S SILVA MARÍN

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BÁSICAS

UNIVERSIDAD DE LA SALLE
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BÁSICAS
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA
GUÍA METABOLISMOS DE CARBOHIDRATOS – TEST DE GLUCOSA

Autor: MYRIAM S SILVA M. McS.

1. INTRODUCCIÓN

Dentro de las funciones vitales, el organismo debe recibir un aporte dietario de

moléculas que suministren energía y elementos estructurales a las células,
dentro de este tipo de moléculas están los carbohidratos, que se definen como
cadenas hidrocarbonadas polihidroxilicas que poseen un grupo funcional ya
sea aldehído o cetona. La molécula más pequeña de los carbohidratos está
constituida por compuestos de una solo cadena que contienen de 3-7 carbonos
y que se denominan monómeros dentro de los que se encuentran la glucosa,
fructosa y galactosa, entre otros

La unión .de dos monosacáridos por enlaces glucosídico β1-4 forma los
disacáridos siendo los más comunes la lactosa (glucosa + galactosa), y la
sacarosa (glucosa + fructosa) y la maltosa (glucosa + glucosa). A su vez la
unión de largas cadenas de monosacáridos tanto por enlaces β1-4 como por
ramificaciones β 1-6, forma los polímeros, que en los animales corresponden al
glucógeno y en vegetales al almidón. Las fuentes de Glucosa en el organismo
provienen tanto de una fuente externa suministrada por alimentos ricos en Poli,
di o monosacáridos quienes, a través de los procesos catabólicos ocurridos
durante la digestión, tienen como objetivo ir fraccionando las moléculas
grandes por medio de enzimas digestivas que rompen los enlaces antes
mencionados, con el fin de originar pequeños monómeros como glucosa como
producto final.

Los monosacáridos son absorbidos en el intestino y transportados por vía

sanguínea al musculo e hígado donde se almacena en forma de glucógeno
(glucogénesis), o a células que necesiten energía (glucolisis). Cuando el
organismo necesita glucosa puede utilizar tres fuentes principales: la del
torrente sanguíneo, si esta no está disponible recurre al glucógeno de reserva
para obtenerla (Glucogenólisis) y cuando estas dos son insuficientes recurre a
las fuentes alternas no glúcidas (Gluconeogénesis) que tiene lugar en las
células hepáticas, adiposas y musculares. De esta manera se mantienen los
niveles sanguíneos de glucosa en sangre, necesario para que las células en
especial las cerebrales ya que estas no tienen forma de almacenarlas.
(Lehninger. 2004. Morrison K. 1999.).
 MYRIAM S SILVA MARÍN
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BÁSICAS

1. OBJETIVOS.
 Cuantificar y analizar las variaciones de la glucosa ante una sobrecarga
de carbohidratos a nivel sanguíneo en diferentes especies (bovinos,
equinos), mediante el test de glicemia basado en la técnica de
peroxidasa.
 Reconocer los valores normales de glucosa en suero o plasma en
diferentes especies
 Interpretar y correlacionar metabólicamente los resultados con el estado
de ayuno o de del individuo.

2. PRELABORATORIO
a) ¿Qué ventaja ofrece la medición de la glucosa oxidasa en el laboratorio
que usted va a desarrollar?
b) La fructosa de la miel está principalmente en forma -D- piranosa, este es
uno de los carbohidratos más dulces, alrededor de dos veces más dulce
que la glucosa. La forma -D- furanosa, de la fructosa, es mucho menos
dulce, el dulzor de la miel disminuye gradualmente a temperaturas altas.
¿Qué característica química de la fructosa puede explicar esta
observación?

3. MATERIALES Y REACTIVOS

3.1 PRINCIPIO

La glucosa oxidasa (GOD) cataliza la oxidación de glucosa a ácido glucónico.

El peróxido de hidrogeno (H2O2) producido se detecta mediante un aceptor
cromogénico de oxígeno, fenol 4-aminofenazona (4-AF), en presencia de
peroxidasa (POP).

4.0. MUESTRA

 Suero o plasma libre de hemolisis.

4.1. REACTIVOS

 Reactivo 1
 TRIS pH 7.4 92 mml/L
 Fenol 0,3 mmol/L
 Glucosa oxidasa(GOD) 15000 U/L
 Peroxidasa (POP) 1000 U/L
 4 – Aminofenazona (4-AF) 2,6 mmol/L

 Estándar
 Patrón primario de glucosa 100mg/dL
 MYRIAM S SILVA MARÍN
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BÁSICAS

4.2. EQUIPOS
 Espectrofotómetros
 Baños serológicos a 37ºC
 Micropipetas de 0.1 ml
 Pipetas de 2.0 ml
 Tubos de ensayo

5.0. METODOLOGÍA
 Longitud de onda: 505 nm (490-550 nm)
 Cubeta: 1 cm de paso de luz
 Temperatura: 37°C
 Lectura: Frente a blanco
 Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada
 Preparar un patrón y un blanco para cada serie de determinaciones.

5.1 PROCEDIMIENTO

Pipetear en tubos los de ensayo:

Tabla 1. Procedimiento para determinar cuantitativamente glucosa en

fluidos biológicos

Blanco Patrón Muestra

SOLUCIÓN DE TRABAJO (mL) 1,0 1,0 1,0

Patrón (µL) ------ 10 ------

Muestra (µL) ------ ------ 10

Mezclar e incubar a 37°C durante 10 minutos.

Leer la absorbancia (A) de la muestra y del patrón frente al blanco del reactivo.

El color final se mantiene estable durante 30 minutos.

5.2 CALCULO
Por formula espectrofotométrica

 Para toda clase de muestra: (A) M x (100 mg/dL)

(A) P
 MYRIAM S SILVA MARÍN
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BÁSICAS

6.0 PREGUNTAS DE INVESTIGACIÓN

1. ¿Cuál es la relación entre el síndrome metabólico y la diabetes Mellitus

tipo II?
2. Describa las causas de la hiperinsulinemia presentada en diferentes
organismos escogidos por usted.
3. ¿Por qué el glucógeno muscular no es capaz de regular la glucemia?
4. ¿Cómo se encuentra la actividad de la glucoquinasa en la diabetes y en
el ayuno?

BIBLIOGRAFÍA

HORTON, M. Principios de Bioquímica. Pearson Editores. Cuarta edición. 2008.

CAMPBELL, M. K. Bioquímica. Internacional Thomson Editores. Cuarta Edición. 2004.
MATHESWS C. K. Bioquímica. 3 Ed., Pearson Addison Wesley.2002.
MURRAY, M et al. Bioquímica de Harper. 13 Ed El manual Moderno. 1999.
LEHNINGHER, N. Principios de Bioquímica. 4Ed., Omega. 2004.
CHAMPE, P. Bioquímica. 3 Ed., Mc Graw Hill. 2005.