UNIVERSIDAD TÉCNICA DE AMBATO

FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERÍA EN

ALIMENTOS Y BIOTECNOLOGÍA

DATOS INFORMATIVOS:
Estudiante: Ostz Albán Carrera: Biotecnología
Asignatura: Bioquímica
Docente: Ing. Lorena Nuñez
Auxiliar de Laboratorio: Ing. Paola
Chuquilla
Nivel: Segundo Fecha: 28/05/2020
Paralelo: “A”

TEMA: Determinación de carbohidratos y lípidos en muestras de sangre

1. Identificar la composición de los reactivos enzimáticos para la determinación

de Glucosa y Triglicéridos.
Tabla 1. Reactivo enzimático para determinación Glucosa.
Glucosa oxidasa >15,000 U/L
Peroxidasa >2,000 U/L
Buffer Fosfato pH7 75 mM
4-Aminofenazona 0.5 mM
Fenol 2,75 mM
(MexLab, 2018)
Tabla 2. Reactivo enzimático para determinación Triglicéridos.
Lipasa ≥ 800 U/L
4-Clorofenol 2 mM
Gliceroquinasa ≥ 500 U/L
Peroxidasa ≥ 900 U/L
4- Aminofenazona .0,4 mM
Glicerol-3-fosfato- oxidasa ≥ 1500 U/L
ATP 2 mM
Buffer Good pH 6.8 50 mM
(WienerLab, 2000)
2. Mencione el objetivo de la solución estándar en la cuantificación de cada
prueba.
La solución estándar también se denomina patrón primario ya que de esta solución
sabemos su composición y concentración exacta. En el caso para determinar
glucosa en sangre la solución estándar es Glucosa 0,1%, el objetivo de esta
solución estándar es determinar concentración del analito en este caso la glucosa
en plasma sanguíneo en una muestra. Para ello una vez medida la absorbancia de
esta solución podemos determinar el factor de calibración, el cual multiplicado
con la absorbancia medida de la muestra problema nos dará la concentración del
analito a buscar en este caso la concentración de glucosa en plasma sanguíneo
(Laitinen & Harris, 1982).
3. Mencione como se desarrolla la reacción de Trinder en las pruebas
estudiadas.
Todas las pruebas realizadas en la determinación de glucosa, triglicéridos y
colesterol se basan en la reacción del Trinder en el cual el peróxido de hidrógeno
(H2O2) reacciona con un derivado fenólico clorado (4-clorofenol) y 4-
aminofenazona, dando un cromóforo, en ese caso la denominada quinonimida roja
(complejo coloreado rojo), con un máximo de absorción se encuentra a 500nm
(Portillo et al., 1997).
4. Otro método para incubar los tubos (plasma + reactivo enzimático) es
durante 5 minutos a 37°C o 10 minutos a Temperatura ambiente. ¿Por qué
varia el tiempo en función de la temperatura?
La temperatura influye en la velocidad de una reacción. A una mayor temperatura
existirá mayor energía cinética de las moléculas, por lo que aumentará las
colisiones entre distintas moléculas la reacción ocurra en menor tiempo. Al
contrario una temperatura baja la reacción ocurrirá en mayor tiempo (Avery,
1977).
En el ejemplo expuesto la temperatura de 37°C es mayor a una temperatura
ambiente que oscila aproximadamente en los 15-18°C en la ciudad de Ambato,
por lo tanto la reacción enzimática a temperatura de 37°C ocurrirá en menos
tiempo (5 min).
 5. Consultar cual es el proceso para determinar Colesterol HDL y LDL. Que
reactivo se usa para precipitar el plasma y separar el HDL y LDL?
El fundamento para determinar Colesterol HDL y LDL es la acción combinada de
tres enzimas: colesterol esterasa, colesterol oxidasa y peroxidasa para dar un
producto final coloreado, con absorbancia máxima a 505 nm basado en el método
de Trinder. La relación absorbancia/concentración es lineal hasta concentraciones
de colesterol de 750 mg/100 mL (Universidad Complutense en Madrid, 2018) .
El colesterol esterasa hidroliza los esteres de colesterol a colesterol y ácidos grasos
libre. El colesterol oxidasa, oxida todo a colestenona y peróxido de hidrogeno.
LDL precipitan en presencia de ácido fosfotúngstico y magnesio.
HDL es precipitado en presencia de ácido fosfotúngstico.

Bibliografía:

Avery, H. E. (1977). Cinética química básica y mecanismos de reacción. Reverté.

Obtenido de https://books.google.com.ec/books?id=PG1u2E-9Nd4C. pp. 50-53
Laitinen, H. A., & Harris, W. E. (1982). Análisis químico. Editorial Reverte. Obtenido de
https://books.google.com.ec/books?id=VMB2E281nPUC. pp. 115-116
MexLab. (2018). Reactivo líquido para la determinación fotométrica de Glucosa en
suero o plasma y otros fluidos biológicos. Obtenido de
https://grupomexlab.com/wp-content/uploads/2018/04/Glucosa-LS.pdf
Portillo, J. D., Barrio, M. T. F., & Salido, F. P. (1997). Aspectos básicos de bioquímica
clínica. Díaz de Santos. Obtenido de
https://books.google.com.ec/books?id=Y1Qm0nRmAtsC. pp. 93-95
Univeridad Complutense en Madrid. (2018). 2 PRÁCTICAS DE BIOQUÍMICA
HUMANA-2018-19.
WienerLab. (2000). Método enzimático para la determinación de triglicéridos en suero
o plasma. Obtenido de https://www.wiener-
lab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum%20espanol/tg_color_gpo_pap
_aa_liquida_sp.pdf