GUÍA DE PRÁCTICA EN

LABORATORIO Versión: 1

CARRERA: BIOQUÍMICA Y FARMACIA

Asignatura: BIOQUIMICA I Código: BYF 511 Página 1 de 5

Docente: Dra. Isabel Mamani Magne Nivel: 5to Semestre

PRACTICA 4. GLICEMIA
1. Objetivos /Competencia

 Conoce el principio de la reacción y la técnica procedimental del método

enzimático colorimétrico.
 Diferenciar entre Diabetes Mellitus I y Diabetes Mellitus II
 Determina la concentración de glucosa en una muestra biológica mediante
el método enzimático colorimétrico para relacionar con hipoglicemia e
hiperglicemia y las patologías relacionadas

2. Introducción

La glucosa es la principal fuente de energía de las células en el organismo. La

glucosa es un monosacárido con una concentración postpandrial de 90 mg/dl en la
sangre y sirve como una fuente de energía indispensable para la función celular.
El diagnóstico de los trastornos del metabolismo de los hidratos de carbono se
apoya en parte en la medición de la glucosa plasmática, ya sea en ayuna o tras
estimulación o pruebas de supresión. Los resultados de la glucosa plasmática
pueden clasificarse como hiperglucémicos (como la diabetes mellitus) o
hipoglucémicos.

Cuando se tiene un exceso de glucosa en la sangre por arriba del límite superior
normal para una edad, se presenta la hiperglucemia. Aunque los valores altos de
glucosa sérica en ayunas se relacionan con suma frecuencia con la presencia de
diabetes, el número de enfermedades y trastornos fisiológicos que pueden llevar a
incrementos mayores es vasto. El aumento de la concentración de glucosa sérica
se da en: respuesta a la tensión, enfermedad de Cushing, diabetes mellitus,
acromegalia, hipertiroidismo, pancreatitis crónica, administración de algunos
fármacos como diuréticos clorotiacídicos porque suprimen la secreción de insulina,
coma hiperosmolar no cetónico.
La hipoglucemia es un trastorno caracterizado por una concentración de glucosa
en ayunas, menor al límite inferior normal para el grupo de edad y esto sucede en:
enfermedad hepática, desnutrición, tolerancia deficiente a la glucosa,
administración excesiva de insulina, hipoglucemia funcional o espontánea,
ingestión de alcohol en ayunas.
 GUÍA DE PRÁCTICA EN
LABORATORIO Versión: 1

CARRERA: BIOQUÍMICA Y FARMACIA

Asignatura: BIOQUIMICA I Código: BYF 511 Página 2 de 5

Docente: Dra. Isabel Mamani Magne Nivel: 5to Semestre

Debido a que la concentración de glucosa sérica por lo general se vuelve anormal

sólo cuando hay un trastorno grave de esta interacción, el verificar la glucosa
sérica ayuda a evaluar la función e integridad del sistema.
La prueba de glucosa en ayunas evalúa de modo aproximado la capacidad del
cuerpo para regular la glucosa y proporciona información acerca de la clase de
anormalidad, si es que la hay. No se tomarán alimentos ni bebidas, excepto agua,
cuando menos por ocho horas antes de tomar la muestra.

2.1 Principio de la reacción: La prueba utilizada se determina mediante el

método enzimático colorimétrico, basado en la reacción de Trinder.

GOD
Glucosa + O2 + H2O H2O2 + Gluconato

2H2O2 + Fenol + 4-AF POD Quinoneimina + 4H2O2

Abreviaturas: GOD = Glucosa oxidasa

POD = Peroxidasa
4-AF = 4-aminofenazona.

2.2 Técnica Procedimental

Preparación de la muestra clínica:

- Suero o plasma venoso.
- La muestra debe recolectarse en ayuno excepto por el agua, durante ocho
horas cuando menos antes de la prueba.
- La muestra debe recolectarse en tubo colector de tapón rojo para suero el
cual no contiene anticoagulante, o de color lila el cual contiene EDTA
anticoagulante para obtener plasma.
- La muestra debe centrifugarse a 3500 rpm durante 5 min para separar el
suero y plasma.
- La glucosa en suero o plasma es estable al menos 3 días a 2-8ºC.
Nota:
- La muestra es inaceptable si:
a) Si el suero se obtiene turbio.
 GUÍA DE PRÁCTICA EN
LABORATORIO Versión: 1

CARRERA: BIOQUÍMICA Y FARMACIA

Asignatura: BIOQUIMICA I Código: BYF 511 Página 3 de 5

Docente: Dra. Isabel Mamani Magne Nivel: 5to Semestre

b) Si la identificación es inadecuada.
c) Si el tubo de recolección no es el adecuado.
d) Cuando se haya excedido el tiempo máximo de análisis
permisible.
Desarrollo
1. Pipetear en tubos :

Blanco Estándar
Muestra
Estándar -- 10ul --
Muestra -- -- 10ul
Reactivo 1000ul 1000ul 1000ul
2. Mezclar e incubar 5 min a 37ºC.
3. Leer la absorbancia (A) a 505nm, usando blanco de reactivo.
4. Coloración estable 30 minutos a temperatura ambiente.
Otros:
 El método es lineal hasta valores de 400 mg/dL.
 Si la concentración de glucosa es superior, diluir la muestra a 1+2 con agua
destilada y multiplicar el resultado por 3.
2.3 Aspectos prácticos a considerar cuando se analiza la glucemia:

1. Centrifugar la sangre lo antes posible: los eritrocitos y leucocitos consumen

glucosa, por tanto, si el contacto con las células es prolongado se pueden
dar resultados falsamente bajos (a Tª ambiente puede incluso desaparecer
al cabo de 6h). Actualmente, existen tubos con separador de suero que
funciona como una interfase entre las células y el suero después de la
centrifugación, haciendo que no sea necesario separar el suero en otro
tubo.
2. Si no se van a analizar inmediatamente, se puede refrigerar la muestra o
añadir un conservante ej. Fluoruro sódico.
3. La concentración de glucosa en suero refrigerado es estable durante 3 días.

3. Materiales

 Papel
 GUÍA DE PRÁCTICA EN
LABORATORIO Versión: 1

CARRERA: BIOQUÍMICA Y FARMACIA

Asignatura: BIOQUIMICA I Código: BYF 511 Página 4 de 5

Docente: Dra. Isabel Mamani Magne Nivel: 5to Semestre

 Lapicero
 Internet

4. Procedimiento

4.1. Esquematice la técnica procedimental de la determinación de Glicemia.

4.2. Diferencie los tipos de Diabetes presentes en el cuadro siguiente.
Diabetes Mellitus Tipo I TIPOII
Edad de comienzo ( en
años)
Respecto a la insulina
( Falta o Resistencia)
Insulinodependientes ( si/no)

Control por dieta ( si/no sí es

si indique que tipo de dieta)
Complicaciones ( De 3
ejemplos)

Métodos de diagnóstico

4.3 Determinar la concentración de la muestra (usando la siguiente fórmula y

los valores de referencia) y realizar la interpretación de los resultados
obtenidos.

mg /dL Glucosa = Abs. Muestra x Conc. estándar

Abs. Estándar

Donde: La concentración del estándar: 100 mg/dL.

Valores de referencia:
- Suero o plasma 70-110 mg/dL
- Neonato nacido a término 30-60 mg/dL
- Niños 60 – 100 mg/dl
 GUÍA DE PRÁCTICA EN
LABORATORIO Versión: 1

CARRERA: BIOQUÍMICA Y FARMACIA

Asignatura: BIOQUIMICA I Código: BYF 511 Página 5 de 5

Docente: Dra. Isabel Mamani Magne Nivel: 5to Semestre

NOTA: Absorbancias y datos del paciente serán asignadas por el docente en

clase.

5. Resultados: Registrar en su informe

6. Conclusiones: Escribir las conclusiones generales en base a los objetivos
planteados
7. Recomendaciones:
 Trabaje en equipo y considere las indicaciones dadas por el docente

8. Bibliografía:

 Murray, R., Bender, D., Botham, K., y et al. (2013). Bioquímica Ilustrada
de Harper. (29 ed).
México, México. McGraw-Hill.
 Nelson. (2014). Lehninger principios de Bioquímica. (6ª ed). Omega
 Baynes, J., Dominiczak, M. (2011). Bioquímica médica. (3 ed).
Barcelona, España. Elsevier
Mosby.