PRACTICA 6.
HIDROLISIS DE UNA PROTEÍNA Y ENSAYOS PARA PROTEÍNAS Y
AMINOÁCIDOS.
Domínguez B. Dennise G., Tirado P. Pablo T., Santa María O. Brenda V.
Equipo: 5 Grupo:2QM4
RESUMEN: Se llevó acabo la “hidrolisis de una proteína” así como
su identificación, para ello se prepararon soluciones la A ( que fue a
reflujo con grenetina), B que es la solución A (grenetina neutralizada
con NaOH), la C ( grenetina sin hidrolizar) y la D la albumina (clara de
huevo) con agua, procediendo a la identificación de aminoácidos con:
reacción Xantoproteica, reacción de precipitación, reacción de Biuret,
reacción de nihidrina, reacción de ácido nitroso, acción reguladora de
aminoácidos y cromatografía en placa fina.
INTRODUCCIÓN:
 Las proteínas son biopolímeros de los α-aminoácido,
llamados así debido a que el grupo amino esta enlazado al
átomo de carbono α adyacente al grupo carbonilo. Las
propiedades físicas y químicas de una proteína están
determinadas por los aminoácidos que la constituyen. Las
subunidades
individuales de los
aminoácidos se unen
por medio de enlaces
de amida llamados
enlaces peptídicos.
 Un péptido es un compuesto que contiene dos o más
aminoácidos unidos por medio de enlaces de amida entre el
grupo amino de cada aminoácido y el grupo carboxilo del
aminoácido vecino. A cada unidad de aminoácido en el
péptido se le llama residuo. Un polipéptido es un péptido que
contiene muchos residuos de aminoácidos, pero por lo
general tiene una masa molecular de alrededor de 5000. Las
proteínas contienen más unidades de aminoácidos, con
masas moleculares que van de alrededor de 6000 a
40000000.
 Estructura de la proteína:
*Estructura primaria: estructura enlazada de manera covalente de la
molécula, esta incluye la secuencia de los aminoácidos.
*Estructura secundaria: tienden a formar arreglos ordenados enlazados
por puentes de hidrogeno.
*Estructura terciaria: incluye todas las estructuras secundarias y todos
los dobleces y plegados entre ellas.
*Estructura cuaternaria: a la asociación de dos o más cadenas de
péptidos en la proteína completa.
La hidrólisis de proteínas es un proceso en el cual se produce la ruptura
de la estructura primaria, es decir la ruptura de la secuencia normal de
una proteína; lo cual termina por fragmentar las proteínas para
convertirlas en aminoácidos.
Las proteínas están formadas por múltiples aminoácidos que se unen
entre si por enlaces peptídicos. En cada enlace se eliminan un ion
hidroxilo de un aminoácido y un ion de hidrógeno del aminoácido
siguiente; así pues, los aminoácidos sucesivos de la cadena proteica
están unidos por condensación, y su digestión se debe al efecto
opuesto: la hidrolización.
*Hidrólisis ácida :Se basa en la ebullición prolongada de la proteína con
soluciones ácidas fuertes (HCl y H2SO4). Este método destruye
completamente el triptófano y parte de la serina y la treonina.
*Hidrólisis de proteínas básica :Respeta los aminoácidos que se
destruyen por la hidrólisis anterior, pero con gran facilidad, forma
racematos. Normalmente se utiliza (NaOH e BaOH).
*Hidrólisis enzimática: Se utilizan enzimas proteolíticas cuya actividad
es lenta y a menudo incompleta, sin embargo no se produce
racemización y no se destruyen los aminoácidos; por lo tanto es muy
específica.
DISCUSIÓN DE RESULTADOS.
 Reacción Xantoproteíca:
Reacción positiva para aminoácidos aromáticos, en donde los
compuestos que presentan bencenos sustituidos (con grupos unidos al
anillo bencénico), al reaccionar con el ácido nítrico concentrado forman
compuestos nitrados de color amarillo, el cual se intensifica en un medio
alcalino. Con base a nuestros resultados obtenidos lo dicho
anteriormente fue comprobado gracias al empleo de la solución de
albumina, visualizando en esta claramente la coloración amarillenta
(prueba positiva) formada al emplear el medio alcalino (NaOH), esto
debido a que estaban presentes aminoácidos con anillos aromáticos,
como es el triptófano, prolina, fenilalanina, tirosina, histidina . Caso
contrario se observó en la solución A, contenida de glicina, lisina,
arginina entre otras, en donde hubo una ligera coloración amarilla
puesto que era simplemente una mezcla de aminoácidos los cuales
presentaban rupturas entre sus enlaces.
 Reacción de precipitación:
Dicha prueba identifica los enlaces disulfuro de las proteínas,
mayor parte las proteínas que contengan un número mayor de puentes
disulfuro.
Los residuos de cisteína pueden formar puentes disulfuro. Pueden
unir 2 cadenas peptídicas o una sola para formar un anillo. la prueba
que resulto positiva fue la empleada con solución D (albumina) la
cual, por presentar aminoácidos azufrados, como metionina y
cisteína se formó un precipitado color café indicándonos la
existencia de puentes disulfuro.
 Prueba Biuret:
Es un método general para la determinación de proteínas o péptidos,
se basa en la reacción del sulfato de cobre con compuestos que tengan
2 o más enlaces peptídicos, en un medio alcalino. El producto es un
complejo color violeta, cuya intensidad depende la cantidad de
enlaces peptídicos presentes. Los di péptidos y aminoácidos dan esta
prueba negativa. Dando como positivo en la solución C y D,en
presencia de hidróxido de sodio.

 Reacción de Ninhidrina:

Esta prueba sirve para poder identificar los aminoácidos libres

primarios.

En esta prueba se obtienen los resultados en la sol B (grenetina

hidrolizada) y solución patrón las cuales obtuvieron una coloración
violeta intensa, lo cual indica que presentan aminoácidos libres en
cambio el agua y la solución de grenetina sin hidrolizar dieron negativo
puesto que el agua sin presencia de ningún tipo de aminoácidos y la
grenetina al no hidrolizarse los aminoácidos seguían unidos por enlaces
peptídicos.

 Reacción con ácido nitroso

Esta reacción se basa en la determinación de grupos aminos libres

de los péptidos y las proteínas midiendo la cantidad de nitrógeno
liberado mediante un burbujeo.

Presento resultados positivos en la solución A (grenetina hidrolizada)

debido que con los aminoácidos libres (grupo amino) producto de la
hidrolizarían de la proteína se logró hacer la reacción, desprendiendo
nitrógeno gaseoso (N2) en forma de burbujeo, lo mismo que pasó con l
la sol C (grenetina sin hidrolizar) y solución D ( albumina de huevo) ,
pero en menor cantidad de burbujeo, esto es debido a hay poca
cantidad de aminoácidos libres.

 Acción reguladora de aminoácidos

En esta reacción se pone en manifiesto como un aminoácido actúa

como un ácido o una base, ya que los aminoácidos son anfóteros,
utilizamos hidróxido de sodio y ácido clorhídrico para las diferentes
reacciones.

BIBLIOGRAFÍA:
 Fuente: Hidrólisis de proteínas (
http://deproteinas.com/hidrolisis-de-proteinas consultada el
15/04/18 ).
 Mc Murry.J. Química Orgánica. Cengage Learning, 7° Ed.
México. 2008. Pp. 1016-1018, 1022-1027.
 Voet, voet. Bioquímica 3ª edición, editorial panamericana,
México, 2006, Pp. 71-100.