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1.

Ninhidrina:

La Ninhidrina (Hidrato de Tricetohidrindeno) es el reactivo más empleado en la detección y cuantificación de


aminoácidos. Durante la reacción todas aquellas sustancias que presentan al menos un grupo amino y uno carboxilo
libre, reaccionaran con la ninhidrina consumiendo dos equivalentes de Ninhidrina por cada aminoácido para completarla
reacción. En el primer paso de la reacción el aminoácido se oxida, descarboxilándose y liberando el grupo amoniaco,
mientras que uno de los equivalentes de Ninhidrina se reduce a Hidrindantina. En el segundo paso la Hidrindantina
formada y otro equivalente de Ninhidrina, reaccionan con el amoniaco, formando un complejo con el grupo alfa-amino
de los aminoácidos coloreándolos de violeta azuloso en la mayoría de los aminoácidos cuyo grupo amino es primario,
para la prolina e hidroxiprolina que no poseen grupo amino sino imino (-NH-), dan un color rojo que pasa rápidamente a
amarillo y café para la asparagina que tiene un grupo amino en la cadena lateral. Esta reacción también identifica los
grupos alfa-amino libres presentes en péptidos y proteínas.
2. Prueba Xantoproteica

Aminoácidos como la fenilalanina, la tirosina y el triptófano, tienen anillos aromáticos derivados del benceno y por lo
tanto, las propiedades químicas de esta molécula, la reacción actúa sobre los núcleo aromáticos gracias a la acción del
ácido, que causa una nitración del anillo bencénico en presencia de ácido nítrico. La reacción positiva se observa por la
formación de un nitrocompuesto amarillo o verde, al adicionar un grupo nitro al anillo bencénico.

3. Reacción millón

Es específica para grupos fenólicos, por lo tanto, dan positivo todas las sustancias que poseen esta estructura, por
ejemplo, la tirosina. En una primera instancia se procede a la nitración del anillo fenólico con el ácido nítrico del reactivo.
La tirosina nitrada forma complejos con los iones mercurio Hg (I) y Hg (II) del reactivo produciendo un precipitado rojo o
una solución roja, ambos resultados positivos (a veces se observa un precipitado blanco, que debe calentarse para que
vire a la coloración roja

4. Prueba del nitroprusiato

La prueba de nitroprusiato o test de Brand permite identificar a la cisteína en una solución acuosa por el grupo
sulfhidrilo presente en su estructura. Este grupo (-SH) le permite a la cisteína formar un puente disulfuro con otra
cisteína dando lugar a una cistina. El nitroprusiato de sodio y cianuro de sodio son los reactivos necesarios para realizar
esta prueba. La reacción depende de la molécula que se pretende identificar, ya sea que esté libre o
formando un compuesto. En el caso, por ejemplo, de la cistina, al añadir los reactivos de la prueba de
nitroprusiato ocurre una reacción que se puede explicar en dos etapas: en la primera, durante los diez minutos
iniciales, el cianuro reduce la cistina, de esta manera se rompe el enlace disulfuro y se forman dos aminoácidos de
cisteína que tienen grupos sulfhidrilo libres. En la segunda etapa, el nitroprusiato de sodio interacciona con la cisteína,
produciendo un compuesto soluble de color rojo-púrpura

5. prueba de Biuret para enlaces peptídicos


la reacción del Biuret permite detectar los oligopéptidos de tres y más aminoácidos. La prueba consiste en la
formación de un complejo entre al menos dos enlaces peptídicos consecutivos con un ión cúprico Cu(II) en
medio alcalino. El complejo es de color violeta y la intensidad depende del número de enlaces presentes.

El Cobre(II) se añade en forma de Sulfato de Cobre. Dado que las soluciones de Sulfato de Cobre tienen color
azul, la cantidad de reactivo añadida debe ser controlada para evitar positivos falsos. El nombre se proviene del
compuesto Biurea (NH2-CO-NH-CO-NH2) el cual da positiva la prueba. Mediante esta reacción es posible seguir
el proceso de hidrólisis proteica, la reacción será negativa cuando la hidrólisis sea completa.
6. Reactivo de Sakaguchi
Se fundamenta en la condensación del grupo guanidino con el alfa-naftol en un medio altamente oxidante, para
la posterior producción de un compuesto de color rojo intenso. Esta prueba da positiva frente a la arginina, así
como a las proteínas que contienen este aminoácido.

Resumen
Las proteínas son polímeros de aminoácidos y representan un grupo numeroso de biomoléculas que juegan un
papel central en la bioquímica celular. Los aminoácidos son las unidades estructurales más simples (monómeros)
que componen la estructura de las proteínas; están constituidos por un grupo amino (NH2 o NH3 + ), un grupo
carboxilo (COOH o COO- ), un átomo de hidrógeno y una cadena radical conocida también como grupo R, unidos
al carbono α (central) de la molécula. La presencia de estos grupos químicos en la estructura de los aminoácidos
confiere características estructurales y propiedades físico-químicas particulares a estas moléculas. Esto
determina que los aminoácidos y proteínas puedan ser sometidos a una variedad de métodos, procedimientos y
reacciones químicas, que permiten su aislamiento/separación, caracterización e identificación. Existe una
variedad de reacciones generales y específicas para caracterizar aminoácidos, péptidos y proteínas (ej. Reacción
de Ninhidrina, Biuret, test brand, Sakagushi, Millon, Xantoproteica) así como un centenar de métodos para el
estudio de las propiedades de las proteínas basados en el peso, forma, tamaño, solubilidad, y carga (ej.
centrifugación, cromatografía, electroforesis, precipitación con sales, metales o cambios en el pH). En el
presente trabajo práctico se realizarán algunas reacciones y métodos para el estudio de aminoácidos y proteínas
que se describen más adelante.
Introducción
Las proteínas son las moléculas orgánicas más abundantes en la célula, ellas constituyen más del 50% del peso
seco de la célula. Cada tipo celular, tiene un rol específico determinado por su composición proteica. Con la
posibilidad de que 20 (o 22) aminoácidos diferentes puedan estar unidos en cualquier orden para conformar
polipéptidos de cientos de aminoácidos, tienen el extraordinario potencial de producir una gran cantidad de
variantes en su conformación. Las proteínas están formadas por aminoácidos. Los aminoácidos, gráficamente,
son representados como ladrillos que forman una pared, los aminoácidos forman diferentes proteínas
específicas, las proteínas son el fundamento mismo de la vida. En efecto, debido a la gran variedad de proteínas
existentes y como consecuencia de su estructura, las proteínas cumplen funciones sumamente diversas,
participando en todos los procesos biológicos y constituyendo estructuras fundamentales en los seres vivos. Este
grupo de nutrientes se encarga básicamente de formar y renovar las células de nuestro cuerpo. Además,
distribuye el agua contenida, forma enzimas, hormonas y anticuerpos y, en última instancia, nos proporciona
energía. (Clavert & Gerber, 1972; Regina et al., 2014)

Los alimentos que ingerimos nos proveen proteínas. Pero tales proteínas no se absorben directamente ni como
tales, sino que, luego de su desdoblamiento (“hidrólisis” o rotura), causado por el proceso de digestión,
atraviesan la pared intestinal en forma de aminoácidos. La extracción de proteínas celulares comienza siempre
con una ruptura celular o lisis. Los métodos más utilizados se basan esencialmente en la homogenización de los
tejidos y la destrucción de los límites celulares por medio de diferentes procedimientos físicos y/o químicos.
Obteniéndose lo que se denomina extracto crudo. Los objetivos a lograr en esta etapa son maximizar la
liberación de las proteínas de interés, evitando la degradación térmica o las alteraciones secundarias por
oxidación, proteólisis La funcionalidad de la proteína es algunas veces considerada solo importante para
procesos de alta demanda, como extrusiones o emulsiones. (Watabiki, Tokiyasu, Ishida, & Ogawa, 1989)

Referencias
Clavert, A., & Gerber, R. (1972). Greffes intratesticulaires de cristallins isol??s ou associ??s ?? de la r??tine. Comptes
Rendus des Seances de la Societe de Biologie et de Ses Filiales, 166(8), 1095-1098.
Regina, N., Herrera, M., Andrés, C., Carmona, C., Carlos, L., & Herrera, B. (2014). Pruebas bioquímicas para la detección
de metabolitos producidos en los errores innatos del metabolismo. Iatreia, 27(4), 417-427.
Watabiki, T., Tokiyasu, T., Ishida, N., & Ogawa, K. (1989). Double Staining Procedure for Histochemical Localization of
Alcohol and Aldehyde Dehydrogenase Activities in the Mouse Liver. Acta Histochemica et Cytochemica, 22(3), 401-
406. https://doi.org/10.1267/ahc.22.401

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